北京市科委基金(D0906003040291)
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 相关作者：毛羽成军郑铁龙李兴旺王琦更多>>
- 相关机构：北京地坛医院军事医学科学院大连医科大学更多>>
- 发文基金：北京市科委基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- JC病毒衣壳蛋白VP1在大肠杆菌中的表达及纯化被引量：1
- 2009年
- 目的构建JC病毒衣壳蛋白VP1基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化该蛋白。方法用PCR方法扩增患者尿液中JC病毒衣壳蛋白VP1的基因,测序正确后将其克隆入pET-32a(+)原核表达载体,IPTG诱导表达VP1融合蛋白。大量表达该融合蛋白并用镍柱亲和层析法纯化。结果成功构建重组表达载体,30℃,IPTG诱导可见有融合蛋白表达,存在形式为包涵体。该融合蛋白相对分子质量约为59kDa。Western blot证明融合蛋白具有很好的抗原性。用镍柱亲和层析法成功纯化出VP1融合蛋白。结论成功表达VP1融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 白瑞玲王勤英成军赵龙凤毛羽
- 关键词：JC病毒原核表达
- JC病毒蛋白VP3原核表达载体的构建及诱导表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建JC病毒蛋白VP3原核表达载体,并观察其表达情况。方法通过聚合酶链式反应(PCR)获得VP3基因,将其连接到pGEM-T载体,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot免疫印迹分析鉴定融合蛋白的表达情况。结果扩增获得VP3基因片段,成功构建了大肠杆菌原核表达JC病毒VP3载体。经IPTG诱导,得到了分子质量为59 ku的目的蛋白,Western blot证实其具有良好的抗原性。结论本研究成功表达了VP3蛋白,对于研究VP3蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了的基础。
- 李小权毛羽郑铁龙成军张树林王琦李兴旺
- 关键词：JC病毒VP3蛋白原核表达
- JC病毒衣壳蛋白VP1多克隆抗体的制备被引量：1
- 2010年
- 目的制备pET-32a(+)-VP1蛋白的多克隆抗体。方法用纯化后的VP1蛋白分4次免疫兔子,颈动脉插管法取血,制得多克隆抗体。结果用ELISA法和Western blot鉴定多克隆抗体的效价得1?320000。该抗体可以用Western blot法检测出59 kD左右的VP1蛋白。结论成功制备高效价的JC病毒衣壳蛋白VP1多克隆抗体。
- 黄敏杨琼李炜王琦成军
- 关键词：JC病毒VP1蛋白多克隆抗体
- JC病毒小包膜蛋白VP2抗原及鼠多克隆抗体的制备
- 2010年
- 目的构建JC病毒小包膜蛋白VP2的原核表达载体，表达纯化VP2蛋白，并制备其抗体。方法用PCR方法从患者脑脊液中扩增JC病毒小包膜蛋白VP2基因，测序正确后克隆入pET-32a（＋）原核表达载体，转化BL21大肠埃希菌，用异丙基-G—D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达该蛋白并纯化。纯化的VP2蛋白免疫BALB／c小鼠，制备鼠多克隆抗体。结果将pET-32a（＋）-VP2重组表达载体分别转化BL21大肠埃希菌，经IPTG诱导后，表达出相对分子质量为58．5×10^3左右的重组融合VP2蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示，IPTG诱导6～10h重组蛋白表达水平较高。Western印迹证实其具有良好的抗原性，且免疫BAI．B／c小鼠后成功制备了鼠多克隆抗体。结论成功构建原核表达载体pET-32a（＋）VP2并获得纯化VP2融合蛋白，并制备JC病毒小包膜蛋白VP2抗体，为进一步对VP2蛋白的功能及JC病毒流行病学调查等研究奠定了坚实的基础。
- 王殿丽郑铁龙王琦向天新成军毛羽卢联合李兴旺
- 关键词：JC病毒病毒抗原病毒抗体病毒蛋白质类
- JC病毒t抗原的融合蛋白表达及抗体制备
- 2009年
- 目的构建JC病毒t抗原的原核融合蛋白表达载体，表达并纯化该融合蛋白。方法采用PCR方法从患者脑脊液中扩增JC病毒t抗原，测序正确后再克隆入pET32a（＋）质粒，构建pET32a（＋）-t表达重组体，并诱导表达t抗原融合蛋白。大量制备该融合蛋白并以镍柱亲和层析纯化。然后以纯化蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果pET32a（＋）-t表达出相对分子质量为41000左右的重组蛋白。十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SD-PAGE）分析显示，异丙基-β-D硫代半乳糖苷诱导后3．5～20．0h融合蛋白均高水平表达。Western印迹证实具有良好的抗原性，免疫BALB／c小鼠后，成功制备了鼠多克隆抗体。结论成功构建原核表达载体pET32a（＋）-t，表达纯化t抗原融合蛋白，成功制备了JC病毒小包膜蛋白t的抗体，为进一步流行病学调查及该基因的功能研究奠定了基础。
- 郑铁龙王殿丽李兴旺毛羽洪源王琦成军
- 关键词：JC病毒抗体生成重组融合蛋白质类
- JC病毒Agnoprotein在大肠埃希菌中的表达及纯化被引量：2
- 2008年
- 目的构建JC病毒Agnoprotein基因的原核表达载体,表达纯化该蛋白。方法PCR扩增患者脑脊液中JC病毒晚期调节蛋白Agnoprotein基因,测序正确后克隆入pET-32a(+)原核表达载体,诱导表达Agnoprotein蛋白并纯化。结果pET-32a(+)-Agnoprotein表达出预期分子量大小的具有免疫活性的重组融合蛋白。结论成功地表达纯化了Agnoprotein融合蛋白,为进一步研究其生物功能奠定了基础。
- 郑铁龙成军毛羽李兴旺洪源
- 关键词：JC病毒AGNOPROTEIN原核表达
