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拟蜘蛛丝蛋白基因在小鼠颗粒细胞中的整合及其鉴定: 为了探讨拟蜘蛛丝蛋白基因二聚体(2S)在小鼠颗粒细胞基因组中整合和建立转拟蜘蛛拖丝蛋白基因的小鼠颗粒细胞系的可能性,本研究将在前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S连接到具有CMV启动子、IRES序列和GFP报告基因...; 王春生李晶张滕子宁方勇朴善花安铁洙; 文献传递

蜘蛛拖丝蛋白基因嵌合体小鼠的研究: 蜘蛛拖丝由于具有独特的抗拉性和弹性的力学特性而备受关注。为了建立通过动物获取蜘蛛拖丝蛋白的方法,本研究以小鼠为实验动物模型,利用前期工作获得的含有蜘蛛拖丝蛋白基因的假病毒感染小鼠ES细胞,通过囊胚注射制备整合有目的基因的...; 梁洋王春生朴善花薛超安铁洙; 关键词：小鼠ES细胞嵌合体小鼠; 文献传递

转蜘蛛拖丝蛋白基因逆转录病毒载体构建与检测: 为了建立通过动物被毛获取蜘蛛拖丝蛋白的方法,本研究利用pIRES2-EGF和PMX载体以及前期获得的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S),构建逆转录病毒载体PMX-2S-IRES-EGFP。采用磷酸钙法将PMX-2S-IRES-EG...; 宁方勇梁洋王春生朴善花安铁洙; 关键词：逆转录病毒载体重组逆转录病毒; 文献传递

转Temporin-GFP山羊乳腺上皮细胞株的筛选: 获得山羊乳腺特异表达中国林蛙抗菌肽的转基因细胞株,本研究利用前期工作中获得的山羊乳腺特异表达载体Tem-GFP-pBC1转染传代培养的山羊乳腺上皮细胞,并经G418筛选获得转基因阳性细胞.其结果,获得特异表达GFP和抗菌...; 王春生张志崇张秋婷朴善花安铁洙; 关键词：山羊抗菌肽

转甜味蛋白Brazzein基因乳腺特异表达载体的山羊体细胞株筛选: 2014年; [目的]建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法。[方法]将前期工作中构建的Brazzein基因山羊乳腺特异表达载体STP-pBC1进行线性化,采用脂质体法转染山羊成纤维细胞,以期获得转基因阳性细胞。[结果]采用脂质体法转染山羊成纤维细胞后,通过最适G418浓度(400μg/ml)筛选获得转基因阳性细胞;转基因阳性细胞形态呈现梭形且核仁清晰,其生长曲线呈现正常的"S";转基因阳性细胞经冷冻复苏后,仍呈现与冷冻前新鲜转基因细胞相似的形态和生长曲线;PCR鉴定结果表明,STP-pBC1已整合入转基因细胞的基因组中。[结论]成功获得乳腺特异的转甜味蛋白基因Brazzein的山羊成纤维细胞株。; 王春生李咏乐仇雨歌朴善花安铁洙; 关键词：山羊 BRAZZEIN基因转基因细胞

拟蜘蛛拖丝蛋白基因人工合成及其真核表达载体的构建: 根据GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY55585和AH015065)、拖丝蛋白基因的结构特点和密码子的简并性,设计378bp的拖丝蛋白基因单体,并对其人工聚合成四聚体.Primer5.0分析结果表明,决定拖丝弹性...; 王春生刘欣梁洋安铁洙; 关键词：四聚体真核表达载体; 文献传递

小鼠卵母细胞的FSEA玻璃化冷冻保存: 为了完善小鼠卵母细胞的冷冻方法和探明冷冻保护剂和冷冻解冻对卵母细胞的影响,本研究利用FSEA对小鼠成熟卵母细胞进行冷冻保存。与此H时,采用免疫组化、DAPI、FDA和PI法对卵母细胞进行染色,分别观察了FSEA处理和经冷...; 梁洋杜文敬王春生李昊朴善花安铁洙; 关键词：卵母细胞玻璃化冷冻; 文献传递

毛囊干细胞研究进展: 毛囊干细胞定位在毛囊突出区,具有所有成体干细胞的共性—慢周期、未分化、自我更新能力及体外增殖能力强等。CD34、K15、K19和Nestin可能作为毛囊干细胞的表面标记。体外毛囊干细胞可诱导分化为神经元细胞,神经胶质细胞...; 原璐王春生安铁洙; 关键词：毛囊干细胞分化潜能信号调控; 文献传递

逆转录病毒载体的研究进展被引量：3: 2010年; 基因传递技术被广泛应用于基因治疗、基因改造等领域,其中逆转录病毒载体由于其遗传的稳定性、转染的高效性而得到迅速地发展。作为传递基因的工具,打靶到特定组织和细胞的能力、效率、目的基因的表达情况及生物安全性问题都值得深入探讨。文章从逆转录病毒的分类和基因结构、载体的发展历程、构建特点等几方面进行了阐述。; 梁洋杜文敬苏畅安铁洙; 关键词：逆转录病毒基因传递

转KAP6.1-GFP-蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S绵羊成纤维细胞株的筛选被引量：1: 2011年; 【目的】通过体细胞核移植为获得皮肤特异表达蜘蛛拖丝蛋白的绵羊奠定基础。【方法】将pcDNA3.1和带有角蛋白结合蛋白启动子质粒pGM-T-KAP6.1分别用BglⅡ和Hin dⅢ双酶切后连接,再与蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S连接,最后通过酶切与pIRES2-EGFP质粒连接后构建真核表达载体pIRES2-EGFP-4S;将此载体线性化后,采用脂质体法转染绵羊皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得转基因阳性细胞。【结果】筛选得到转pIRES2-EGFP-4S的阳性细胞。对阳性细胞经体外培养后的检测显示:(1)细胞形态(长梭形)、细胞生长曲线(呈S形)、群体倍增时间(随培养时间增加逐渐缩短)和细胞接种率(细胞贴壁率及存活率在24 h内逐渐升高,并达到最高值125%)等均具有正常绵羊成纤维细胞的生物学特征;(2)阳性细胞经冷冻复苏后具有与新鲜阳性细胞相似的生物学特征;(3)PCR检测结果显示,pIRES2-EGFP-4S在阳性细胞的基因组中整合。【结论】获得具有在绵羊皮肤特异表达,且便于检测的转蜘蛛拖丝蛋白4S的绵羊成纤维细胞株。; 王春生原璐宁方勇吴治昊朴善花安铁洙; 关键词：真核表达载体构建转基因

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