广东省科技计划工业攻关项目(2006B36003008)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：宫玉波周瑾陆晓和袁伟更多>>
- 相关机构：济南军区青岛第一疗养院南方医科大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组腺病毒Ad-EGFP转染大鼠角膜的实验研究被引量：1
- 2011年
- 目的评价携带报告基因的重组腺病毒Ad-EGFP经不同转染途径原位转染大鼠角膜的可行性和安全性,探索重组腺病毒载体原位转染大鼠角膜的最佳途径。方法取SD大鼠80只,随机分为A、B、C、D4组,A组、B组:分别于球结膜下注射Ad-EGFP15μL及9g·L-1NaCl注射液15μL;C组、D组:分别前房注射Ad-EGFP15μL及9g·L-1NaCl注射液15μL。各组大鼠分别于注射后1d、5d、7d及14d摘除角膜,行HE染色观察角膜组织有无超微结构改变,共聚焦显微镜观察荧光表达,透射电镜观察有无病毒颗粒存在。结果 4组大鼠于注射当时及整个观察期内角膜组织各层均未见明显超微结构改变,眼前段组织未见明显的组织病理性改变;术后B、D组角膜始终未见绿色荧光的阳性表达,电镜下亦未见病毒颗粒;A、C组注射后1d角膜即可见绿色荧光;5d荧光表达最强,7d时较5d时减弱,14d时更弱。且注射1d后电镜下可见腺病毒颗粒;A组绿色荧光表达位于角膜上皮层及角膜基质层;C组绿色荧光表达仅位于角膜内皮层,角膜上皮层及基质层未见阳性表达。结论携带报告基因的重组腺病毒Ad-EGFP可通过球结膜下注射、前房注射等途径原位转染至大鼠角膜组织,且安全性好;球结膜下注射可使腺病毒携带的报告基因在角膜上皮层及角膜基质层表达;前房注射途径可使腺病毒携带的报告基因在角膜内皮层表达。
- 袁伟陆晓和宫玉波周瑾
- 关键词：重组腺病毒绿色荧光蛋白角膜
- Ad-siICOS阻断ICOS共刺激通路抑制大鼠角膜移植排斥反应的实验研究被引量：1
- 2011年
- 目的观察携带报告基因GFP且表达ICOS-siRNA的重组腺病毒(Ad-siICOS-EGFP)阻断可诱导共刺激分子(in-ducible costimulator,ICOS)共刺激通路对角膜移植急性免疫排斥的抑制作用。设计实验性研究。研究对象Wistar大鼠(供体)及SD(受体)大鼠。方法取Wistar大鼠(供体)及SD(受体)大鼠,建立大鼠同种异体穿透性角膜移植模型,将其随机分为A、B、C、D4组,每组20只鼠:A组为单纯角膜移植对照组;B组为Ad-siICOS-EGFP注射组;C组为Ad-EGFP注射组;D组为生理盐水注射组。术后每日在裂隙灯显微镜下观察角膜植片以及眼前段组织的变化。对角膜混浊、水肿、新生血管3项指标进行评分,观察排斥反应指数(RI)的变化并记录植片的存活时间。各移植组分别于术后5天随机取10只大鼠,麻醉处死后,取植片行免疫组织化学及RT-PCR检测。各组其余大鼠进行角膜植片存活时间统计。主要指标角膜植片平均存活时间I;COS蛋白表达情况I;COSmRNA表达情况。结果各组角膜植片平均存活时间:A组(9.800±0.632)天;B组(14.700±1.418)天;C组(10.000±1.054)天;D组(10.100±0.876)天(F=52.383,P=0.000)。ICOS蛋白表达情况:各组植片均可见ICOS蛋白阳性表达,各组植片组织ICOS蛋白免疫组化染色阳性细胞评分:A组(1.900±0.568);B组(1.100±0.316);C组(1.800±0.632);D组(1.900±0.568)(F=5.214,P=0.004)I。COSmRNA表达情况:各组大鼠植片组织ICOS的PCR产物凝胶电泳条带辉度值比值:A组(1.004±0.164);B组(0.621±0.096);C组(0.929±0.134);D组(0.918±0.120)(F=16.717,P=0.000)。结论 Ad-siICOS-EGFP可有效抑制大鼠植片组织ICOSmRNA及ICOS蛋白的表达,从而阻断ICOS共刺激通路;移植术后即刻受体鼠球结膜下注射Ad-siICOS-EGFP,可抑制大鼠角膜移植急性免疫排斥反应,延长角膜植片存活时间。
- 袁伟陆晓和宫玉波周瑾
- 关键词：角膜移植可诱导共刺激分子
- 重组腺病毒载体RNA干扰阻断ICOS共刺激通路抑制大鼠角膜移植免疫排斥反应的研究
- 2011年
- 目的观察携带有报告基因绿色荧光蛋白且表达ICOS-siRNA的重组腺病毒载体Ad-siICOS-EGFP阻断ICOS共刺激通路对角膜移植急性免疫排斥反应的抑制作用。方法取Wistar大鼠(供体)及SD大鼠(受体),建立大鼠同种异体穿透性角膜移植模型,将SD大鼠随机分为A、B、C、D4组,每组各20只:A组为单纯角膜移植对照组;B组为Ad-siICOS-EGFP注射组,术后即刻于球结膜下注射Ad-siICOS-EGFP;C组为Ad-EGFP注射组,术后即刻于球结膜下注射Ad-EGFP;D组为生理盐水注射组,术后即刻于球结膜下注射生理盐水;每眼选择角膜缘1200位、600位两个注射点,每个注射点注射剂量为15μL。术后每天在裂隙灯显微镜下观察排斥反应指数的变化并记录植片的存活时间。各组分别于术后5d随机取10只大鼠,麻醉后取角膜,部分植片行RT-PCR检测,部分角膜冰冻切片行共聚焦显微镜观察。各组其余大鼠进行角膜植片存活时间统计。结果 A组、B组、C组、D组角膜植片平均存活时间分别为(9.800±0.632)d、(14.700±1.418)d、(10.000±1.054)d、(10.100±0.876)d,其中B组存活时间最长,与其余各组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);A组、C组、D组各组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。B组及C组角膜植片共聚焦显微镜下可见GFP绿色荧光表达,表达位于角膜植片上皮层及整个角膜基质层;A组、D组角膜植片未见绿色荧光表达。A组、B组、C组、D组植片组织ICOS的PCR产物凝胶电泳条带灰度值比值分别为1.004±0.164、0.621±0.096、0.929±0.134、0.918±0.120,其中B组最低,与其余各组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);A组、C组、D组各组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 Ad-siICOS-EGFP可以有效地抑制大鼠植片组织ICOSmRNA及蛋白的表达,从而阻断ICOS共刺激通路;移植术后即刻受体鼠球结膜下注射Ad-siICOS-EGFP,可以抑制大鼠角膜移植急性免疫排斥反应,延长角膜植片存
- 袁伟陆晓和宫玉波周瑾
- 关键词：角膜移植RNA干扰免疫排斥反应
