国家自然科学基金(20706052) 作品数:5 被引量:21 H指数:2 相关作者: 罗坚 苏志国 张焱 马润宇 白倩 更多>> 相关机构: 中国科学院过程工程研究所 北京化工大学 山东东阿阿胶股份有限公司 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 化学工程 理学 更多>>
乳腺生物反应器表达的重组人乳清白蛋白的高效分离纯化 被引量:1 2011年 利用乳腺生物反应器高效地表达重组人乳清白蛋白,但是目标产物分离纯化的难度较大。通过分子模拟计算比较待分离原料中主要蛋白组分的物化性质,包括表面电势和表面疏水性,在此基础上设计了高分辨率、快速的分离纯化工艺。通过硫酸铵沉淀的正交试验条件优化,有效地去除了干扰层析精制过程的IgG杂质,提高了后续疏水层析的稳定性,从而成功地分离开目标蛋白及与其同源的牛乳清白蛋白杂质,得到纯度>95%的rHLA纯品,工艺回收率48.6%。乳糖合成活性和圆二色谱检测结果表明,纯化rHLA具有调节β-1,4-半乳糖苷转移酶活性和天然的空间结构。 李由 张焱 苏海佳 罗坚 白倩 马光辉 苏志国关键词:乳腺生物反应器 疏水层析 同源蛋白质 超大孔聚苯乙烯微球固定蛋白质 被引量:2 2009年 采用琼脂糖对孔径为300~500nm的超大孔聚苯乙烯(MPS)微球进行亲水化修饰,并在修饰后的表面上偶联病毒蛋白颗粒(RV),用于蛋白质的分离纯化实验.结果表明,经过修饰的MPS层析介质具有优异的流体力学性能,层析过程的最高流速可达1120cm/h,对病毒蛋白颗粒的固定量为0.638mg/g,是商品化介质Sepharose 4FF的2倍.采用RV-MPS介质对病毒蛋白颗粒抗体进行了分离纯化,收率为29.22%,高于Sepharose 4FF的18.92%. 曲瑞芳 孔英俊 曲建波 马光辉 马润宇 苏志国 罗坚关键词:流体力学特性 蛋白质 乳腺生物反应器表达产物层析分离过程中介质的污染机理及其再生策略 2011年 考察了磺酸基离子交换层析介质(SP Sepharose FF)在分离表达人乳铁蛋白的重组牛乳过程中的污染机理及其再生策略。通过层析原料及流分中各组分含量的检测分析,发现牛乳中的脂类通过堵塞效应或疏水相互作用残留在层析柱上,造成层析运行压力升高;部分酪蛋白通过静电相互作用占据介质的配基位点,导致介质的交换容量降低;乳糖与介质之间无直接相互作用。连续层析运行次数的增加以及层析-再生时间间隔的延长,均能导致残留组分和介质之间的相互作用逐渐增强,最终影响介质的再生效率。使用NaOH进行及时清洗,可以有效地清除柱上残留的脂类和蛋白,恢复离子交换介质的层析性能和微观形态。 孙西艳 张焱 李岩 罗坚 秦培勇 苏志国关键词:乳腺生物反应器 离子交换介质 污染机理 乳腺生物反应器表达的重组人乳铁蛋白的分离纯化及生物活性鉴定 被引量:6 2010年 以国产高交联度的快流速琼脂糖为基质,合成了不同配基密度的SP(Sulfopropyl,磺酸基)离子交换介质,建立了乳腺生物反应器表达重组人乳铁蛋白(Recombinant Human Lactoferrin,rHLF)的纯化方法。以溶菌酶为模型蛋白考察了不同配基密度离子交换介质的静态和动态吸附行为,结果表明介质具有良好的吸附性能。不同配基密度离子交换介质均可纯化得到rHLF,其中,高配基密度(0.24mol/L)的离子交换介质每毫升可以处理50mL rHLF牛乳,rHLF收率为86.5%,纯度为98.5%。圆二色谱的测定结果表明纯化的rHLF二级结构与天然人乳铁蛋白一致。生物学功能实验结果表明,rHLF的铁结合与释放活性与天然人乳铁蛋白相似,浓度为5g/L的rHLF对大肠杆菌的生长具有明显的抑制作用。 白倩 张焱 汪音爵 罗坚 李岩 黄永东 马润宇 苏志国关键词:离子交换介质 纯化 抑菌活性 阿胶生产工艺中胶原蛋白降解过程研究 被引量:13 2009年 目的:研究阿胶生产工艺中胶原蛋白的降解过程以及关键单元操作。方法:在阿胶生产过程中取样并分析其氨基酸组成和相对分子质量范围,利用高效液相色谱质谱技术分析其多肽组成。结果:阿胶生产工艺中原料胶中甘氨酸含量提高了16.8%,表明原料胶中胶原蛋白含量逐渐升高;凝胶过滤色谱分析结果表明原料胶相对分子质量逐渐降低,胶原蛋白的降解过程主要集中在常压浓缩阶段;质谱分析结果表明原料胶内除胶原蛋白外还存在细胞外基质蛋白和部分细胞骨架蛋白的降解物,在常压浓缩过程中以泡沫形式被去除的物质主要为非胶原类蛋白的降解物。结论:阿胶生产工艺中胶原蛋白的降解过程主要集中在常压浓缩阶段,常压浓缩过程是影响阿胶产品组成的关键单元操作。 张贵锋 刘涛 王前 罗坚 解茹 秦玉锋 尤金花 田守生 苏志国关键词:阿胶 生产工艺 胶原蛋白 降解