内蒙古自治区卫生厅资助项目(20035028)
- 作品数：1 被引量：5H指数：1
- 相关作者：周小欧李曼君吴万敏王晓娟沈关心更多>>
- 相关机构：华中科技大学湖北省新华医院内蒙古医学院更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区卫生厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗SARS抗体独特型单链抗体的筛选及鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的从人源噬菌体抗体库中筛选抗SARS独特型抗体为SARS的诊断及疫苗的研究奠定基础。方法以混合SARS病人恢复期血清免疫球蛋白(Ig)作为筛选分子,从噬菌体抗体库中筛选出能与病人血清IgG(IgM)结合的抗体,并通过与混合正常人血清Ig作负性筛选,从而获得抗SARS病毒的独特型抗体(AId)。通过4轮“吸附-洗涤-扩增”,从最后一轮所得单克隆菌株中分别通过ELISA筛选出能和SARS病人恢复期血清Ig结合的菌株,提取质粒DNA,并对PCR扩增产物进行DNA序列测定,最后用所筛选的克隆通过与不同人群血清反应,证实其特异性。结果随机挑选经第4轮筛选后的200个单克隆菌落,其中有10个与SARS病人恢复期血清Ig结合的OD值明显高于其与正常人Ig结合的OD值;以上10个克隆经PCR扩增,其中有6个克隆于1 000 bp处有电泳条带;其DNA序列经与BLAST数据库和IMGT/QUEST软件比对有5个均与人的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)高度同源,且与其同源性最高的人Ig的VH属VHI亚群,VL属k链,属VKⅡ亚群;最后确认有3个克隆其噬菌体抗体和SARS病人血清Ig结合的OD值均明显高于与正常人血清Ig结合的OD值。结论利用抗体库技术可不经免疫制备特异性抗SARS抗体独特型抗体,为SARS诊断及疫苗的研制奠定基础。
- 何峰容王晓娟周小欧李曼君朱慧芬吴万敏沈关心
- 关键词：噬菌体抗体库技术
