山西省回国留学人员科研经费资助项目(74-2003)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：陈家军刘苏健孙宗全苏刚马丽更多>>
- 相关机构：华中科技大学山西医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：山西省科技攻关计划项目山西省回国留学人员科研经费资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 局部RNA干扰下调磷脂酰肌醇3激酶-Akt信号通路抑制大鼠颈静脉颈动脉间置模型静脉移植血管新生内膜增生被引量：3
- 2007年
- 目的探讨局部干扰磷脂酰肌醇3激酶(P13K)p110β亚单位对移植血管新生内膜增生的作用。方法大鼠颈静脉分支-颈动脉间置模型,通过 Pluronic F-127-质粒缓释系统在血管吻合完成后局部 RNA 干扰。分6组:第1组:25%Pluronic F-127组,第2组:pU6-Pik3cb-shRNA-1组,第3组:pU6-Pik3cb-shRNA-2组,第4组:1/2(shRNA 1+shRNA 2)组,第5组:pGenesil-1质粒错配shRNA 组,第6组:渥曼青霉素阳性对照组。实验时分别将200μl含有50μg shRNA 质粒,或50μg渥曼青霉素,或空白 Pluronic F-127凝胶均匀地涂在移植桥血管的周围。每组30只 SD 大鼠,分别于1、3、7、14、28 d 取材苏木精-伊红染色观察内膜厚度;术后3 d 进行荧光定量 PCR 和 Western 印迹法测定 P13K p110β亚单位 mRNA 和其下游效应分子磷酸化 Akt 和 mTOR。结果 Pluronic F-127质粒缓释系统平滑肌细胞转染效率为60%,内皮细胞达90%以上,pU6-Pik3cb-shRNA 和渥曼青霉素转染后 Pik3cb mRNA 和其下游效应分子磷酸化 Akt 和 mTOR 下调,移植血管内膜增生减轻。结论靶向Pik3cb 的 shRNA 下调 P13K-Akt-mTOR 信号通路,减轻移植血管新生内膜增生。
- 邓勇志刘苏健马丽孙宗全陈家军苏刚刘超王国华柯俊
- 关键词：移植物闭塞血管血管内膜增生
- 靶向Pik3cb shRNA表达载体的构建及其对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响被引量：2
- 2007年
- 目的构建大鼠Pik3cb shRNA真核表达载体,并检测其下调大鼠血管平滑肌细胞Pik3cb mRNA表达的效应。方法根据Genbank中大鼠Pik3cb序列设计并合成两条shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆导入载体pGenesil-1,酶切鉴定和测序无误后分别命名为pU6- Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2。通过脂质体转染大鼠胸主动脉平滑肌细胞,确定转染效率;通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Pik3cb mRNA的表达;TUNEL法检测细胞凋亡。结果pU6-Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2经测序和PCR扩增与原序列相同,转染大鼠平滑肌细胞48 h时转染率为15.7%,荧光定量PCR结果显示转染组Pik3cb mRNA表达明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),错配质粒组与对照组比较Pik3eb mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),TUNEL结果显示转染组凋亡细胞明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建重组真核表达质粒pU6-Pik3cb-shRNA,并有效下调大鼠胸主动脉平滑肌细胞Pik3cb mRNA的表达,为靶向Pik3cb防治移植血管再狭窄的基因治疗奠定了基础。
- 刘苏健马丽邓勇志孙宗全陈家军苏刚
- 关键词：RNA干扰质粒平滑肌
