中央高校基本科研业务费专项资金(12NZYTH06)
- 作品数：7 被引量：19H指数：2
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- 牦牛Prdm9基因保守区的原核表达及多克隆抗体制备
- 2014年
- 采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从牦牛睾丸组织获得Prdm9基因的cDNA的保守区序列,克隆到pMD19-T载体中。经测序确证后,将基因克隆到原核表达载体PET32a(+),转化E.coli表达菌BL21(DE3),以IPTG诱导融合蛋白的高效表达。利用Ni柱亲和层析纯化蛋白,将得到的抗原免疫日本大白兔,获得了1∶4效价的牦牛PRDM9保守序列的多克隆抗体,可用于后续试验的研究。
- 曾琴黄林林亚秋金素钰郑玉才
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 牦牛和雄性不育杂交后代睾丸组织差异表达核蛋白的双向电泳分析被引量：2
- 2015年
- 研究比较牦牛(Bos grunniens)和犏牛睾丸核蛋白的表达差异,以探索公犏牛不育的分子机制。提取牦牛(n=4)和犏牛(n=4)睾丸的核蛋白,采用双向电泳分离后,对差异表达蛋白质点进行质谱鉴定。通过分辨率高、重复性好的睾丸组织核蛋白双向电泳图谱,检测出在牦牛和犏牛睾丸存在2倍及以上差异表达的蛋白点15个,通过MALDI-TOF-TOF质谱鉴定得到13种差异表达蛋白,大多数为核蛋白,在犏牛睾丸中表达显著下降,另外还包括4种核不均一蛋白(hnRNPs)。这些蛋白质参与精子发生、前体RNA加工和选择性剪接、基因表达调控等过程,其表达的改变可能与犏牛精子发生障碍有关。
- 付伟李彩霞刘文静黄林任亮金素钰林亚秋郑玉才
- 关键词：牦牛犏牛睾丸雄性不育
- 牦牛和黄牛睾丸组织Prdm9基因cDNA序列的比较被引量：1
- 2015年
- 为比较牦牛与普通牛Prdm9基因的序列特征,采用RT-PCR和3'-RACE方法,从牦牛和黄牛睾丸组织总RNA中分别获得Prdm9基因的部分cDNA序列,经过拼接后获得了牦牛和黄牛Prdm9基因的完整cDNA序列,长度分别为2580bp和2421bp,编码序列长度均为2091bp,共编码696个氨基酸,氨基酸序列相似性为98.56%.分析显示,牦牛和黄牛Prdm9基因开放阅读框有10个核苷酸同义突变和10个单核苷酸多态性(SNPs),并导致10个氨基酸差异,其中4个位于锌指域.研究结果表明,牦牛和黄牛Prdm9基因结构特征类似,但在锌指域存在一些氨基酸差异,可能会影响该基因的功能.
- 马晓琴刘文静金素钰黄林郑玉才
- 关键词：牦牛黄牛睾丸
- 牦牛和犏牛睾丸组织Msh4基因mRNA表达差异的研究被引量：5
- 2013年
- 为了研究牦牛与犏牛睾丸组织Msh4基因mRNA表达水平的差异,从分子水平上揭示犏牛雄性不育的分子机制,试验从成年麦洼牦牛(n=9)、成年不育犏牛(n=3)和性未成熟犊牦牛(n=3)睾丸组织中提取总RNA,采用荧光定量PCR方法对Msh4 mRNA表达水平进行检测。结果表明:犏牛和犊牦牛睾丸组织中Msh4 mRNA表达水平极显著低于牦牛(P<0.01),说明睾丸组织Msh4基因的低表达可能与犏牛雄性不育有关。
- 曾琴黄林金素钰林亚秋郑玉才
- 关键词：牦牛犏牛雄性不育睾丸
- 成年牦牛与双性牦牛睾丸蛋白质双向电泳的比较研究被引量：2
- 2014年
- 为了比较牦牛和双性牦牛睾丸组织中蛋白质的差异表达,以探索双性牦牛生殖障碍的机理。提取牦牛睾丸(n=4)和1头双性牦牛睾丸总蛋白质,采用双向电泳分离后,对差异表达蛋白质点进行质谱鉴定。实验获得了分辨率高、重复性好的牦牛与双性牦牛睾丸组织蛋白质的双向电泳图谱,2倍及以上差异表达的蛋白质24个,其中22个蛋白质经质谱分析和数据库搜索后得到鉴定。有6种蛋白质属于分子伴侣,在双性牦牛睾丸组织中表达量显著下降,推测与双性牦牛精子发生障碍有关。
- 付伟李彩霞黄林刘文静金素钰林亚秋郑玉才
- 关键词：牦牛睾丸双向电泳质谱
- 利用双向电泳-质谱技术鉴定牦牛和犏牛睾丸中的差异表达蛋白质被引量：14
- 2014年
- 比较了牦牛和犏牛睾丸组织中蛋白质的表达差异;应用双向电泳-质谱技术,对牦牛和犏牛的睾丸组织中差异蛋白质进行分离和鉴定;对获得的22个差异表达点进行质谱鉴定和数据库搜索,获得了19个蛋白质,其中有3种分子伴侣可能与犏牛雄性不育有关;研究结果表明,牦牛和犏牛睾丸组织中存在差异表达蛋白,并可利用双向凝胶电泳进行分离,为进一步分析犏牛雄性不育的原因提供了线索.
- 付伟李彩霞刘文静马晓琴任亮黄林金素钰郑玉才
- 关键词：牦牛犏牛睾丸双向电泳质谱
- 牦牛和黄牛Prdm9基因锌指域序列的比较被引量：1
- 2014年
- 为了研究牦牛杂交雄性不育的分子机制,采用3'-RACE方法分别从牦牛、黄牛睾丸组织的总RNA中获取其Prdm9基因的部分cDNA序列,长度分别为1 548、1 392 bp,包含全部的锌指域。对比分析显示:牦牛、黄牛的Prdm9基因均含有5个连续的C2H2型锌指,每个锌指均由21个氨基酸构成,锌指间是高度保守序列TGEKPYV,并且锌指域从这段高度保守序列开始;牦牛、黄牛各自Prdm9基因中的5个锌指间在氨基酸构成上存在差异,并且二者在整个锌指域上有6个氨基酸差异,其中5个都在锌指中的重要正向选择位点处,推测这些氨基酸差异可能与牦牛种间杂交后代的雄性不育有关。
- 马晓琴黄林刘文静林亚秋金素钰郑玉才
- 关键词：牦牛黄牛睾丸
