吉林省教育厅科研项目(2005042)
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 相关作者：马红霞刘玉堂刘树明丛薇陈立芳更多>>
- 相关机构：吉林农业大学新疆农业职业技术学院更多>>
- 发文基金：吉林省教育厅科研项目国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 大肠杆菌多重耐药调控基因evgS的克隆及其原核表达被引量：2
- 2011年
- 以大肠杆菌ATCC25922的基因组为模板,根据GenBank中大肠杆菌的evgS基因序列设计引物,PCR扩增出约894 bp的基因片段,将所得片段与pMD18-T simple vector连接,转化至大肠杆菌JM109中,筛选阳性克隆,其质粒中插入序列测序结果与GenBank中报道一致。提取阳性克隆质粒,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,回收目的片段,定向克隆到pET-28a原核表达载体中,提取阳性质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,获得阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,收集表达产物,通过SDS-PAGE分析证实,pET-28a-evgS可成功地在大肠杆菌中表达EvgS蛋白。Western-blot检测证明,表达产物具有良好的反应原性。
- 刘树明马红霞陈立芳刘玉堂
- 关键词：大肠杆菌克隆原核表达
- 临床分离动物源性大肠杆菌周浆蛋白AcrA表达水平的测定
- 2010年
- 为研究大肠杆菌周浆蛋白AcrA表达水平与不同动物源性大肠杆菌多重耐药水平之间的关系,将获得的重组阳性质粒pET28a(+)-acrA转化至大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,经IPTG诱导表达,得到约42ku的目的蛋白。AcrA蛋白表达产物经侧带法纯化后免疫獭兔,制备抗AcrA的多克隆抗体,采用间接ELISA法检测临床分离的31株不同动物源性大肠杆菌中acrA基因的表达水平。结果显示,随着多数被检大肠杆菌多重耐药水平的提高,AcrA蛋白的表达量有上调的趋势。表明,动物源性大肠杆菌的多重耐药水平与AcrA蛋白的表达水平可能存在相关性。
- 贾绍娟曹海涛马红霞
- 关键词：大肠杆菌多重耐药
- 大肠杆菌多重耐药调控基因rob的原核表达及其表达蛋白多克隆抗体的制备
- 2010年
- 提取阳性克隆质粒pMD18-T-rob,经SacⅠ+XhoⅠ双酶切,回收目的片段,定向克隆到pET-28a(+)原核表达载体中,提取阳性质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,获得阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,收集表达产物,SDS-PAGE分析证实pET-28a-rob可成功地在大肠杆菌中表达出Rob蛋白。Western-blot分析证明,Rob蛋白具有良好的反应原性。表达出的Rob蛋白经侧带法纯化后免疫獭兔3次,制备抗Rob蛋白的多克隆抗体。通过间接ELISA方法检测抗体效价,结果表明抗体血清1∶40稀释时抗体效价较高。
- 陈立芳马红霞刘玉堂刘树明
- 关键词：大肠杆菌原核表达多克隆抗体
- 大肠杆菌多重耐药调控基因marR的克隆及其原核表达被引量：1
- 2010年
- 为获得MarR多克隆抗体，试验以大肠杆菌ATCC25922基因组为模板，根据GenBank中大肠杆菌的marR基因序列设计引物，PCR扩增出长约435bp的marR基因片段，将所得片段与pMD18-T载体连接，转化至JM109大肠杆菌中，筛选阳性克隆，其质粒中插入序列的测序结果与GenBank中报道一致，从阳性克隆中提取质粒，经BamHI和XhoI酶切回收435bp的目的片段，定向克隆到pET～28a（＋）表达载体中，提取阳性质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中获得阳性克隆。结果表明：经IPTG诱导阳性菌收集表达产物，通过SDS—PAGE分析证实marR基因得到表达；经Western—blot检测该蛋白具有良好的反应原性。
- 许皓马红霞马颖林雁春
- 关键词：大肠杆菌MARR克隆原核表达
- 大肠杆菌多重耐药调控基因marA的克隆及其原核表达被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank中大肠杆菌的marA基因序列设计引物,以大肠杆菌ATCC25922的基因组为模板,PCR扩增出约384 bp的marA基因片段,将所得片段与pMD18-T simple vector连接,转化至JM109大肠杆菌中,筛选阳性克隆,其质粒中插入序列测序结果与GenBank中报道一致。从阳性克隆中提取质粒,经BamHⅠ和XhoⅠ酶解,回收384 bp目的片段,定向克隆到pET-28a表达载体中,提取质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,获得阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,收集表达产物,通过SDS-PAGE分析证实marA基因得到表达。
- 李春雨张春艳丛薇刘玉堂马颖马红霞
- 关键词：大肠杆菌克隆原核表达
- 大肠杆菌多重耐药调控基因soxS的克隆及其原核表达被引量：2
- 2010年
- 根据GenBank中大肠杆菌的soxS基因序列设计引物,以大肠杆菌ATCC25922的基因组为模板,PCR扩增出约324 bp的soxS基因片段,将所得片段与pMD18-Tsi mple vector连接,转化至J M109大肠杆菌中,成功地筛选到阳性克隆,其质粒序列测序结果与GenBank中报道一致。从阳性克隆中提取质粒,经BamHⅠ和XhoⅠ酶解,回收324 bp的目的片段,定向克隆到pET-28a表达载体中,提取质粒,再次转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,成功地筛选出阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,获得表达产物,通过SDS-PAGE检测出soxS基因的表达。
- 于晓颖刘玉堂丛薇刘树明马红霞
- 关键词：大肠杆菌克隆原核表达
