吉林市科技发展计划项目(20090602)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：赵东海李大鹏张磊朱安峰钟秀宏更多>>
- 相关机构：吉林医药学院吉林医药学院附属医院长春市中心医院更多>>
- 发文基金：吉林市科技发展计划项目吉林省教育厅“十一五”科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 表达大鼠融合蛋白NKX2.5-pEGFP的骨髓间充质干细胞的建立
- 2011年
- 目的:构建大鼠NKX2.5融合绿色荧光蛋白真核表达质粒NKX2.5-pEGFP,并筛选表达大鼠融合蛋白NKX2.5-pEGFP的骨髓间充质干细胞(MSCs),为后续性细胞和基因治疗心肌梗死提供理论基础。方法:提取胎鼠心肌细胞总RNA,RT-PCR扩增获得大鼠NKX2.5基因,将目的基因克隆到pEGFP-N3载体并获得重组后NKX2.5-pEGFP质粒。采用密度梯度离心法联合贴壁法分离骨髓单个核细胞并获得MSCs。将重组质粒NKX2.5-pEGFP以Lipo2000转染到大鼠MSCs,G418筛选2周。蛋白免疫印记和荧光检测重组后质粒在骨髓间充质干细胞中的表达情况。结果:电泳检测证实经RT-PCR获得NKX2.5基因大小为981bp,与理论值相符。NKX2.5-pEGFP重组质粒经BamHⅠ、SalⅠ双酶切,PCR鉴定得到2条大小约为981和4 700bp的酶切片段,鉴定结果与预期结果完全一致。蛋白免疫印记检测到转染重组质粒的MSCs中有相对分子质量为65 000的蛋白表达,与理论值相符。荧光检测NKX2.5-pEGFP重组质粒转染的MSCs中可见绿色荧光,证实表达阳性。结论:成功建立表达大鼠NKX2.5-pEGFP基因的MSCs。
- 赵东海朱安峰杨淑艳钟秀宏张以忠赵丽微
- 关键词：骨髓间充质干细胞NKX2.5基因增强型绿色荧光蛋白
- NKX2.5基因修饰骨髓间充质干细胞对心肌梗死大鼠心功能的影响被引量：4
- 2011年
- 目的:以NKX2.5融合绿色荧光蛋白基因(NKX2.5-pEGFP)质粒转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),将基因修饰后MSCs移植入大鼠心肌梗死模型中,评价其对心功能的影响。方法:体外分离培养大鼠MSCs,构建NKX2.5-pEGFP基因质粒,以lipo2000将质粒转染入MSCs。将基因修饰后MSCs植入心肌梗死后10 d的大鼠心肌梗死区(MSCs组,n=20),同时将注射等体积无血清改良依格尔(DMEM)培养液于心肌梗死区的大鼠作为DMEM组(n=20)。移植注射后4周,通过检测左心室射血分数(LEVF)、左室缩短分数(FS)等研究其对心功能的影响。结果:移植4周后,MSCs组大鼠LEVF[(79±4)%]较DMEM组[(47±3)%]显著提高(P<0.01),MSCs组大鼠FS[(48±9)%]较DMEM组[(25±6)%]显著提高(P<0.01)。结论:移植NKX2.5基因修饰后的MSCs能够改善心肌梗死大鼠心功能。
- 赵东海张磊李大鹏
- 关键词：NKX2.5基因骨髓间充质干细胞
