黑龙江省自然科学基金(D0352)
- 作品数：9 被引量：45H指数：3
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- 相关机构：齐齐哈尔大学天津科技大学大连民族学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- Reteplase基因的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2006年
- 进行了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体Reteplase(r-PA)基因的克隆,并在甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)中实现了胞外表达。以基因工程菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)306染色体DNA为模板,通过PCR技术克隆了r-PA基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体上并进行了序列测定。测序结果表明:克隆到的基因序列长1.1 kb,与已发表的Reteplase基因同源性达99.91%,其编码的氨基酸顺序一致。文中还构建了甲醇毕赤酵母分泌性表达载体pMETαA-r-PA,用PacⅠ单酶切将pMETαA-r-PA线性化后,采用电转化的方法将其导入甲醇毕赤酵母PMAD16中,PCR和表型鉴定表明,筛选到Reteplase基因已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上的阳性克隆。经摇瓶初步培养及以甲醇为唯一碳源诱导表达,胞外Reteplase表达水平最高达27.93mol/(s.L)。
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- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂甲醇毕赤酵母
- 培养条件对里氏木霉306菌体形态和t-PA生物合成的影响被引量：12
- 2005年
- 里氏木霉(Trichoderma reesei)306是能够生物合成组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的基因工程菌株。在对其液态深层培养时,发现随培养条件和培养时间的变化,其菌体能以松散和菌丝球的两种形态存在。菌体形态和t-PA的产生密切相关。培养基中无机盐和表面活性剂的种类和添加量以及接种量和pH等培养条件是影响里氏木霉306菌体形态和t-PA合成的主要因素。在液态深层培养过程中,菌体以松散的菌丝体形态生长,形成纸浆状发酵液,利于t-PA的合成。
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- 关键词：丝状真菌里氏木霉组织型纤溶酶原激活剂菌体形态
- 里氏木霉306产t-PA固态发酵条件的研究被引量：1
- 2005年
- 对基因工程菌株里氏木霉(Trichodermareesei)306生物合成组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的固态发酵培养基成分和发酵条件进行了研究;分析了发酵过程中t-PA的生成、总糖的消耗和菌体生长的规律。在优化的固体发酵条件下,t-PA的最大酶活是924.63IU/g干重培养基,较初始条件下提高了5倍。通过浅盘进行了放大实验,最大酶活为983.64IU/g干重培养基,t-PA合成速率为:13.66IU/g干重培养基.h,较三角瓶固态发酵最高产酶提高了6.38%,产酶速率提高了24.07%。
- 冮洁杜连祥路福平廖海印
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂T-PA固态发酵发酵条件基因工程药物
- 基因工程菌里氏木霉染色体DNA的提取方法被引量：22
- 2004年
- 研究基因工程菌株里氏木霉 (TrichodermaTeesei)染色体DNA的提取方法。采用冷冻研磨CTAB法、氯化苄SDS法和冷冻研磨SDS法三种提取DNA的方法。通过琼脂糖凝胶电泳对提取的DNA进行检测。结果表明 :冷冻研磨CTAB法更适合此类DNA的提取。对冷冻研磨CTAB法提取条件进行了优化。用该法提取的DNA上的外源基因t-PAcDNA部分片段进行PCR扩增 ,获得良好结果。用本实验冷冻研磨CTAB法提取的DNA完全适用于PCR和其它的分子生物学操作的要求。
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- 关键词：基因工程丝状真菌里氏木霉染色体DNA分子生物学
- 里氏木霉306生物合成t-PA的代谢调节机制的研究
- 2004年
- 对基因工程菌株里氏木霉 (Trichodermareesei) 30 6生物合成组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)的代谢调节机制进行了研究。在基础发酵条件下 ,L 山梨糖、D 果糖、可溶性纤维素、CMC、麦芽糖、乳糖和棉子糖等单糖及多糖对t PA生物合成都有诱导作用 ,其中L 山梨糖的诱导效果最好 ,加量以 1 .0 %为宜。葡萄糖及其中间代谢产物对t PA的生物合成产生分解代谢物阻遏作用。纤维二糖在低浓度时可以促进t PA的生物合成而在高浓度时对t
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- 关键词：里氏木霉组织型纤溶酶原激活剂
- 里氏木霉306生物合成组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)5L罐分批发酵条件的研究被引量：2
- 2005年
- 以摇瓶分批发酵条件为基础，对基因工程菌株里氏木霉(Trichodermareesei)306进行了5L发酵罐分批发酵条件的研究。确定了适宜的发酵条件：温度为28℃，溶氧浓度控制30％饱和度，pH值在自然状态下进行发酵。以5L发酵罐分批发酵试验数据为依据，对里氏木霉306生物合成t-PA分批发酵动力学进行了研究。应用MATLAB工具软件进行非线性规划，建立了菌体生长、底物消耗和产物合成的发酵动力学模型。
- 江洁杜连祥路福平邹亚杰肖琳乔玉龙张宝涛
- 关键词：里氏木霉分批发酵发酵动力学模型
- 里氏木霉(Trichoderma reesei)306产组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)液体发酵条件的优化被引量：4
- 2004年
- 采用正交设计和响应面分析等实验方法对基因工程菌株里氏木霉 (Trichodermareesei)30 6产组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)的液体发酵条件进行了优化。确定了适宜的培养基配方和最佳发酵工艺条件。在优化发酵条件下 ,摇瓶液体发酵液中的t PA酶活力达 3386 91IU/mL ,比初始发酵条件下酶活力提高上千倍。
- 冮洁杜连祥路福平邹亚杰贾丹丹姚蕾
- 关键词：里氏木霉组织型纤溶酶原激活剂液体发酵培养基配方
- 用静息细胞培养法研究影响组织型纤溶酶原激活剂生物合成的因素被引量：3
- 2005年
- 建立了基因工程菌株里氏木霉(Trichodermareesei)306生物合成组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的静息细胞培养系统。确定静息细胞培养基的成分为:葡萄糖1.0g/L,尿素1.0g/L,K2HPO41.0g/L;静息细胞培养的条件为:选择发酵30h的菌体,10%的接种量,pH5.4,150r/min,28°C静息培养12h。并在该静息细胞培养系统中,研究了糖类、有机酸、氨基酸和金属离子等因素对里氏木霉306生物合成组织型纤溶酶原激活剂的影响。
- 冮洁杜连祥路福平刘晓红
- 关键词：里氏木霉组织型纤溶酶原激活剂
- 表面活性剂和促进剂对重组里氏木霉生物合成t-PA的影响被引量：1
- 2007年
- 重组里氏木霉(Trichoderma reesei)是染色体上整合有组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)cDNA的基因工程菌株.对高产t-PA的重组里氏木霉菌株进行了筛选,并研究了乙酸钠和抗坏血酸(Vc)等促进剂及曲拉通(Triton100)、吐温80(Tween80)、十二烷基磺酸钠(SDS)和蔗糖酯等表面活性剂对菌株生物合成t-PA的影响.结果表明:乙酸钠能促进t-PA的生物合成,在发酵培养基中,其浓度为0.1%时,酶活可提高36.42%;吐温80对t-PA的合成有促进作用,其浓度为0.1%时,酶活可提高82.04%;抗坏血酸也可促进t-PA的合成,其浓度为0.05%时,酶活可提高124.82%;曲拉通和十二烷基磺酸钠加入时完全抑制t-PA的合成;蔗糖酯对t-PA的合成有部分抑制作用.
- 冮洁刘雪江
- 关键词：表面活性剂促进剂
