国家自然科学基金(31272537)
- 作品数：6 被引量：30H指数：3
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- 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
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- gga-miR-9*对传染性法氏囊病病毒复制的影响
- 为研究gga-miR-9*对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,本研究用化学合成的方法合成gga-miR-9*的模拟物gga-miR-9*mimics,转染DF-1-细胞,接种IBDV,分别收集上清液和细胞,测定I...
- 欧阳伟王永山杜希宁刘华洁张海彬
- 文献传递
- 鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因密码子的优化及其在大肠杆菌中的表达被引量：5
- 2013年
- 为了提高鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因在大肠杆菌中的表达量,分析近期引起安徽免疫失败IBD病例中分离的强毒分离株AH1株的VP2基因,发现有49个稀有密码子,其中编码Arg(R)的有16个,编码Gly(G)的有6个。编码精氨酸的AGG(AGA)2个稀有密码子紧密相连(R区),另外还有2个相对比较集中的GGG密集区(G区)。根据大肠杆菌密码子使用频率对IBD强毒分离株(AH1株)VP2基因进行改造并合成优化基因,命名为mVP2。将mVP2基因分别克隆到pET-32a及pBV220原核表达质粒,构建了含密码子优化型IBDV VP2基因的原核表达质粒pET32-VP2和pBV220-VP2。SDS-PAGE结果显示,优化基因mVP2在大肠杆菌中的表达较野生型基因有十分显著的提高。Western-blot检测到目的蛋白能够与鸡抗IBDV超免疫血清反应。本研究为开展VP2基因结构与功能的深入研究及IBD免疫预防和快速诊断奠定了理论基础。
- 潘群兴朱向东欧阳伟王晓丽夏兴霞毕振威诸玉梅董晨红王永山
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒VP2密码子优化
- 传染性法氏囊病病毒对鸡法氏囊组织中干扰素和p53转录的影响
- 为了分析传染性法氏囊病病毒(HBDV)感染对鸡体抗病毒天然免疫的影响,用IBDV弱毒(B87)和强毒(QL/12)分别感染4周龄SPF鸡,每隔12h时(124h)取3只鸡的法氏囊组织作为一个pool,用荧光定量RT-PC...
- 欧阳伟王永山刘华洁杜希宁张海彬
- 关键词：干扰素P53天然免疫
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒VP3基因在昆虫细胞中的表达及其ELISA抗原反应性分析
- 为分析传染性法氏囊病病毒(IBDV)重组VP3蛋白的ELISA抗原反应性,将IBDV vp23基因插入杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-vp3并转化E.coli D...
- 刘华洁王永山杜希宁梅永杰王晓丽欧阳伟毕振威潘群兴姚火春
- 关键词：VP3蛋白
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析被引量：20
- 2014年
- 从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病（IBD）发病鸡群中分离到2株传染性法氏囊病病毒（IBDV），分别命名为QL和ZZ—ll，对4周龄SPF鸡的致死率分别为94％和86％。为分析该毒株的分子生物学特征，对其全基因组序列进行了测定，2个病毒株基因组A节段长度为3260bp、B节段长度2827bp。病毒演化分析结果显示2个病毒基因组A节段的核苷酸序列与已发表的强毒株序列的同源性分别为96．8％～98．1％和96．9％～98．4％，处在IB—DV超强毒株分支上；而B节段与已发表的弱毒株序列的同源性分别为89．7％～90．4％和90．0％～90．7％，位于弱毒株分支上。IBDV超强毒株和弱毒株序列特征氨基酸残基与基序分析表明，QL和ZZ—11两个病毒株的A节段VP2基因的氨基酸残基为222A、249Q、253Q、254G、256I、294I和299S，七肽基序为SWSASGS，均符合超强毒株的分子特征；而B节段777～782位核苷酸序列为GGTGCC，没有KpnI酶切位点，具有弱毒株的序列特点。以上分析结果表明，QL和ZZ—11为IBDV自然重配株，A节段源于超强毒株，而B节段源于弱毒株。
- 朱向东王永山欧阳伟潘群兴毕振威李月华范红结王笑梅
- 传染性法氏囊病病毒VP2单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制
- 为研制传染性法氏囊病病毒(IBDV)快速检测试剂盒,用重组IBDV-VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞触合,获得三株稳定分泌抗VP2蛋白单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为1...
- 刘静静王永山欧阳伟夏兴霞潘群兴王晓丽毕振威诸玉梅朱瑞良
- 关键词：VP2夹心ELISA
- 文献传递
- gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响
- 为研究microRNA(gga-miR-21)对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,本研究利用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中构建重组质粒pL...
- 欧阳伟朱向东王永山王永强潘群兴毕振威王笑梅
- 关键词：病毒复制
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析
- 从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病(IBD)发病鸡群中分离到两株传染性法氏囊病病毒(IBDV),分别命名为QL和ZZ-11,对4周龄SPF鸡的致死率分别为94%和86%。为分析该毒株的分子生物学特征,对其全基因组序列...
- 朱向东王永山欧阳伟潘群兴毕振威李月华范红结王笑梅
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的制备及其抗病毒活性的分析被引量：1
- 2014年
- 以传染性法氏囊病病毒(IBDV)病毒样颗粒重组VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得7株分泌抗IBDV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞。用间接免疫荧光试验和病毒中和试验分别测定McAb的特异性和抗病毒活性,杂交瘤细胞株2C8分泌的McAb具有较高的抗IBDV活性,培养上清液中的抗体中和效价为210,诱生BALB/c小鼠腹水中的抗体中和效价达到107,抗体亚类为IgG1κ。将2C8-McAb制成注射液,经肌肉注射,在12h内,鸡血液循环中的鼠源McAb达到高峰,半衰期至少可持续14d。在IBD预防试验中,注射2C8-McAb的鸡可抵抗IBDV强毒感染。在IBD治疗试验中,对IBDV强毒感染发病鸡用2C8-McAb治疗,存活率为60%(18/30),第21天检测法氏囊组织IBDV全部为阴性;而非治疗对照组,发病鸡的存活率只有20%(6/30),第21天检测存活鸡法氏囊组织IBDV全部呈阳性。本试验结果表明,高中和活性的2C8-McAb对IBD具有良好的预防及治疗效果,能够显著降低死亡率,并且McAb治疗康复鸡不带毒。
- 夏兴霞欧阳伟王永山诸玉梅潘群兴毕振威王晓丽吴晓悠董晨红
- 关键词：抗病毒活性
- gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响被引量：2
- 2012年
- 为研究microRNA(gga-miR-21)对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,本研究利用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中构建重组质粒pL-miR-21。将pL-miR-21与3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG共转染293FT细胞,制备含gga-miR-21基因的重组慢病毒VL+miR-21。将VL+miR-21感染DF-1细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得过表达gga-miR-21的细胞株DF-miR-21,采用定量RT-PCR(qRT-PCR)检测表明,gga-miR-21的表达量比正常DF-1细胞提高60%。将IBDV接种于DF-miR-21细胞,在96 h后,其病毒滴度(104.75TCID50/0.1 mL)显著低于正常DF-1细胞的病毒滴度(108.75TCID50/0.1 mL)。采用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析验证,在IBDV基因组VP1基因中存在gga-miR-21的结合靶点。将IBDV感染DF-miR-21细胞,采用western blot分析,VP1蛋白的表达量比正常DF-1细胞显著降低;用qRT-PCR分析,VP1 mRNA水平与正常DF-1细胞没有明显差异。本实验结果表明:细胞gga-miR-21可以抑制IBDV的复制,其分子作用机理是在VP1基因翻译水平上实现的。
- 欧阳伟朱向东王永山王永强潘群兴毕振威王笑梅
- 关键词：传染性法氏囊病病毒病毒复制
