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葡聚糖凝胶微柱离心-HPLC法测定紫杉醇-PEG功能化多壁碳纳米管的包封率被引量：4: 2018年; 目的建立紫杉醇(PTX)-PEG功能化多壁碳纳米管(DSPE-PEG-MWCNTs-PTX)包封率的测定方法。方法采用葡聚糖G-50凝胶微柱离心法分离DSPE-PEG-MWCNTs与游离药物,用HPLC法测定结合在DSPE-PEG-MWCNTs的PTX,计算包封率。结果在本法选择的色谱条件下,PTX得到良好的分离,在2~200μg/m L(r=0.999 7)线性关系良好。葡聚糖G-50凝胶微柱离心法能有效分离DSPE-PEGMWCNTs与游离药物,测得DSPE-PEG-MWCNTs-PTX平均包封率为88. 17%,RSD为2. 33%(n=3)。结论建立的葡聚糖凝胶微柱离心-HPLC法简便快捷,测定结果准确可靠,可用于测定DSPE-PEG-MWCNTs-PTX包封率。; 陈丹萍张涵索绪斌; 关键词：多壁碳纳米管紫杉醇微柱离心包封率

羧基化多壁碳纳米管-紫杉醇复合物的制备、表征及其体外释药被引量：1: 2019年; 目的制备羧基化多壁碳纳米管-紫杉醇复合物(PTX-MWCNTs-COOH),并考察其体外释药性能。方法以紫杉醇(PTX)为药物,磷脂为表面活性剂,溶剂共混法制备PTX-MWCNTs-COOH,用激光粒径仪、透射电镜(TEM)、差示扫描量热仪(DSC)等对其进行表征,滤膜法-HPLC测定其载药量,微柱分离-HPLC测定其包封率,反向透析法研究PTX-MWCNTs-COOH在p H 7. 4的PBS缓冲溶液(含1%聚山梨酯80)的体外释药行为。结果药物成功加载到多壁碳纳米管上形成PTX-MWCNTs-COOH,其Zeta电位为(-24. 5±1. 01) m V,载药量为(50. 09±0. 02)%,包封率为(76. 80±0. 02)%,在体外的释放效果良好。结论制备的PTX-MWCNTs-COOH具有良好的理化性质,载药量与包封率较高,反向透析法能较好地用于研究PTXMWCNTs-COOH的体外释药行为。; 陈丹萍戴海颖刘金玲林小超张涵索绪斌; 关键词：紫杉醇磷脂体外释放

清热止咳方对肺炎支原体感染BALB/c小鼠NLRP3炎性体mRNA表达的影响被引量：4: 2018年; 目的:探讨清热止咳方对肺炎支原体(MP)感染小鼠NLRP3炎性体mRNA表达及IL-18分泌的影响。方法:将96只雌性BALB/c小鼠按随机数字表随机分为正常对照组、MP模型组、罗红霉素组及清热止咳方组,每组24只。滴鼻法建立MP感染小鼠模型,每组小鼠灌胃给药2周,其中正常对照组及模型组分别灌服相同容量蒸馏水。于造模后7d、14d、28d留取小鼠肺组织及肺泡灌洗液(BALF),分别用荧光定量PCR及ELISA方法检测NLRP3、ASC、Caspase-1mRNA及IL-18在肺组织或肺泡灌洗液中的表达量。结果:给药后7d、14d罗红霉素组和清热止咳方组可下调MP模型小鼠肺组织NLRP3、ASC、Caspase-1mRNA表达及BALF IL-18分泌(P<0.05)。结论:清热止咳方抗肺炎支原体感染与下调NLRP3炎性体相关mRNA表达,并抑制IL-18分泌有关。; 张涵索绪斌张云凌姚琳许庆瑞张树明王伟明; 关键词：肺炎支原体 IL-18

肺炎支原体经ROS激活NLRP3炎性体诱导RAW264.7细胞分泌IL-1β被引量：13: 2015年; 目的:观察肺炎支原体(Mycoplasma pneunoniae,Mp)促进NLRP3炎性体的活化及下游促炎性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)的表达是否与活性氧簇(ROS)有关。方法:预先用5 mmol/L ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理RAW264.7细胞30 min,用10 MOI Mp分别感染RAW264.7细胞4、8、16和24 h。流式细胞术检测细胞内ROS水平;real-time PCR法检测细胞NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达;Western blot法检测NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平;ELISA法检测细胞上清液IL-1β的分泌水平。结果:与正常组比较,感染后4、8、16和24 h模型组ROS生成显著增加(P<0.01);感染后8、16和24 h模型组NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达显著增加(P<0.01),感染后16和24 h NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平上调(P<0.01),感染后24 h细胞上清液IL-1β含量显著增加(P<0.01);与模型组比较,NAC组在上述相应时点ROS生成降低,NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达下调,蛋白水平下降,细胞上清液IL-1β的含量减少。结论:Mp可能通过刺激RAW264.7细胞生成ROS而激活NLRP3炎性体。; 张涵马晶张云凌张树明许庆瑞王伟明; 关键词：肺炎支原体活性氧簇白细胞介素1Β

芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体感染BALB/c小鼠NLRP3炎性体的影响被引量：7: 2017年; 目的探讨芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体(MP)感染BALB/c小鼠NLRP3炎性体蛋白表达及IL-1β分泌的影响。方法实验分为健康对照组、MP模型组、罗红霉素治疗组(50mg/kg体重)及芩百清肺浓缩丸治疗组(3.3g/kg体重),每组32只。滴鼻法建立MP感染模型,连续给予相应的药物14d,健康对照组及模型组给予等容量蒸馏水。分别于给药后7、14、28d,抽取肺泡灌洗液,ELISA检测IL-1β含量;留取肺组织,Western blot检测NLRP3炎性体相关蛋白表达。结果 MP模型组小鼠造模后7、14d肺组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量分别为0.93±0.07、0.72±0.02、0.65±0.03;0.41±0.04、0.47±0.02、0.43±0.02,与健康对照组0.30±0.02、0.29±0.02、0.31±0.03;0.27±0.03、0.23±0.02、0.34±0.02比较差异有统计学意义(P<0.01);芩百清肺浓缩丸治疗组给药后7d、14dNLRP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量分别为0.56±0.07、0.52±0.04、0.44±0.02;0.32±0.02、0.33±0.02、0.35±0.02,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。MP模型组小鼠给药后7、14d肺泡灌洗液IL-1β分别为(69.98±8.97)pg/ml、(49.55±7.60)pg/ml,与健康对照组(37.39±4.28)pg/ml和(36.61±4.31)pg/ml比较,差异有统计学意义(P<0.01);芩百清肺浓缩丸治疗组给药后7、14dIL-1β分别为(59.70±8.16)pg/ml和(41.39±3.67)pg/ml与模型组比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论芩百清肺浓缩丸治疗可下调MP感染小鼠肺组织NLRP3炎性体蛋白的表达及IL-1β分泌。; 张涵索绪斌张云凌姚琳许庆瑞张树明王伟明; 关键词：肺炎支原体白细胞介素-1Β

芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体感染RAW264.7细胞NLRP3炎性体表达的影响被引量：9: 2016年; 目的:观察芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)感染RAW264.7细胞NLRP3炎性体及IL-1β的影响。方法:试验分为空白对照组、模型组和芩百清肺浓缩丸含药血清组。常规培养RAW264.7细胞、肺炎支原体菌株,制备芩百清肺浓缩丸含药血清,用10 MOI MP感染RAW264.7细胞,分别于8、16、24 h收集细胞。FQ-PCR检测NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达;Western-blot检测NLRP3、ASC、Caspase-1 p20蛋白表达;ELISA检测细胞上清液IL-1β含量。结果:与空白对照组比较,MP感染RAW264.7细胞后8、16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达显著上调(P<0.05或P<0.01);感染后16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 p20蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);感染后24 h细胞上清液IL-1β含量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,芩百清肺浓缩丸含药血清可显著下调MP感染RAW264.7细胞16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA的表达(P<0.05或P<0.01);显著降低感染后24 h NLRP3、ASC、Caspase-1p20蛋白表达和细胞上清液IL-1β的分泌(P<0.05或P<0.01)。结论:芩百清肺浓缩丸抗肺炎支原体作用的机制可能与下调NLRP3炎性体表达有关。; 张涵索绪斌张云凌马晶张树明许庆瑞王伟明; 关键词：肺炎支原体 NLRP3 含药血清

影响广地龙粗提液蚓激酶活力因素的研究被引量：7: 2016年; 目的以广地龙粗提液中的蚓激酶为研究对象,研究影响其酶活力的影响因素,并计算其酶学反应动力学常数。方法将蚓激酶与酪蛋白溶液一起培养,通过检测溶液中反应得到的酪氨酸含量,计算蚓激酶的酶活力;分别研究溶液pH值,不同的金属离子、吐温-80、EDTA的浓度,及乙醇的体积分数等条件对蚓激酶酶活性的影响,用米氏方程拟合蚓激酶降解酪蛋白过程,计算动力学参数。结果蚓激酶的活力受pH的影响明显,当pH7.0时酶活力最高;随着钙离子浓度的增加酶活力降低,Na^+、Mg^(2+)、Ba^(2+)对酶的活力影响不大,K^+、Fe^(2+)对酶的活力有一定的促进作用;乙醇对蚓激酶的活力具有抑制作用,体积分数为60%时蚓激酶完全失活;EDTA会降低蚓激酶的活力;吐温-80能提高蚓激酶的活力;蚓激酶降解酪蛋白的活化能Ea=-19.4 k J/mol。结论研究结果可为蚓激酶的提取分离及制剂研究提供参考。; 徐兴索绪斌向兰岳静静游杨杨张涵; 关键词：蚓激酶动力学参数活化能

肺炎支原体感染RAW264.7细胞NLRP3炎性体及下游分子的表达被引量：10: 2014年; 目的观察肺炎支原体(Mycoplasma pneunoniae,Mp)感染RAW264.7细胞早期NLRP3炎性体及前炎性细胞因子的表达。方法将RAW264.7细胞随机分为5组,正常组用常规方法培养,不感染Mp;4个实验组RAW264.7细胞均用Mp感染4h,感染复数(细胞︰Mp)分别为1︰20、1︰40、1︰80、1︰100,采用FQ-PCR法检测细胞NLRP3、ASC、caspase-1mRNA表达和IL-1β、IL-18水平。结果 Mp感染复数1︰20、1︰40、1︰80、1︰100组NLRP3、ASC、caspase-1mRNA表达量分别为2.10±0.62、2.14±0.66、2.66±0.69、3.29±0.64和3.91±0.83、4.21±0.95、4.25±0.86、4.30±0.99和1.65±0.48、1.65±0.36、1.94±0.51、2.00±0.57,与正常对照组0.98±0.08、1.00±0.08、0.99±0.09比较,差异均有统计学意义(P<0.01);感染复数1︰100组IL-1β为200.00±9.25pg/ml,与对照组159.92±5.89pg/ml比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Mp感染可诱导RAW264.7细胞NLRP3炎性体活化。NLRP3炎性体可能参与了Mp的早期感染。; 张涵马晶张云凌张树明许庆瑞王伟明; 关键词：肺炎支原体白细胞介素-1Β 白细胞介素-18

RP-HPLC法测定紫杉醇脂质体的药物包封率被引量：3: 2017年; 目的:建立紫杉醇脂质体药物包封率的测定方法。方法:采用葡聚糖凝胶G-50柱色谱法分离紫杉醇脂质体和游离药物,用RP-HPLC法检测紫杉醇的量,计算脂质体中紫杉醇的包封率;色谱条件:采用Platisil-ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(含0.1%三乙胺和0.67%冰乙酸)(80∶20)为流动相,流速1.0mL·min^(-1),检测波长227 nm,柱温为室温。结果:紫杉醇与辅料及溶剂的色谱峰分离良好,峰形很好;紫杉醇线性范围0.5~50μg·mL^(-1)(r=0.999 3),加样回收率范围为99.66%~100.8%,包封率范围为90.29%~91.65%。结论:本方法能快速检测紫杉醇脂质体中紫杉醇含量及包封率。; 游杨杨索绪斌岳静静徐兴张涵; 关键词：红豆杉紫杉醇脂质体包封率测定反相高效液相色谱

芒果苷元在大鼠血浆中的含量测定及药动学研究被引量：1: 2017年; 目的建立测定大鼠血浆中芒果苷元含量的HPLC,探讨其在大鼠胃肠道给药后的药动学过程。方法选择对硝基苯酚为内标物质,大鼠血浆样品用乙酸乙酯-甲酸(10∶1)进行萃取,用HPLC进行分析。色谱条件:色谱柱:Platisil 5μm ODS(4.6 mm×250 mm);流动相:乙腈-水-甲酸(40∶60∶0.5,pH 2.74);柱温:室温;流速:0.8 mL·min^(-1);检测波长:312 nm。单剂量灌胃给药400 mg·kg^(-1)后,测定不同时间点大鼠血浆中芒果苷元的浓度。结果芒果苷元在0.54~162μg·mL^(-1)血浆浓度范围内呈现良好线性关系(r=0.998)。日内和日间精密度RSD均小于7.5%。利用软件Winnonlin 6.1计算其主要药动学参数为:t_(max)为0.5 h;t_(1/2)为(3.46±0.903)h;ρ_(max)为(26.9±3.17)μg·mL^(-1);AUC_(0-t)为(52.4±12.0)μg·h·mL^(-1)。结论本试验所建立的HPLC测定大鼠血浆中芒果苷元含量的方法简单可行,专属性强,可用于大鼠血浆中芒果苷元的药动学分析。; 岳静静索绪斌游杨杨张涵; 关键词：血浆药动学高效液相色谱法

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