重庆市卫生局科研项目(07-2-088)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：倪卫东梁安霖高仕长郑水长更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 携RSKA/hIGF-1杂交基因重组质粒的构建及表达
- 2010年
- 背景:骨骼肌肌萎缩的治疗一直是基础和临床研究的难点和热点之一,近年来基因治疗在该领域得到了广泛的研究和关注。目的:拟构建携带大鼠骨骼肌α-肌动蛋白/人胰岛素样生长因子1(rat skeletal α-actin/human insulin-like growth factor-1,RSKA/hIGF-1)杂交基因的重组真核表达质粒,并观察其在C2C12细胞内表达。方法:登录Genbank数据库,查找RSKA启动子序列、hIGF-1cDNA序列和人生长激素3′尾端非编码区序列(3′UTR),把3段基因序列拼接后进行全基因合成,再将合成的全基因融合到PbluescriptⅡSK(+)[PBS]质粒上。用酶切电泳及测序检查质粒重组后序列的正确性;重组质粒转染C2C12细胞,应用RT-PCR和Western blot法分别鉴定转染细胞中hIGF-1 mRNA和蛋白的表达。结果与结论:重组质粒PBS-RSKA/hIGF-1酶切图谱与预期相同,测序验证插入片段全序列无改变。转染C2C12细胞后,RT-PCR及Western blot结果显示有特异条带出现,且差异明显。结果证明成功构建携RSKA/hIGF-1杂交基因的重组质粒,并在C2C12细胞中正确表达。
- 郑水长高仕长倪卫东梁安霖
- 关键词：胰岛素样生长因子1Α-肌动蛋白生长激素基因重组
