国家自然科学基金(31272593)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
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- pEGFP-N1-pAPN-SPC段基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中表达被引量：1
- 2014年
- 为了构建能够表达猪pAPN-SPC段的真核细胞表达载体pEGFP-N1-pAPN-SPC,并在Vero细胞中进行表达,本试验从猪肠道黏膜组织基因组中扩增出pAPN-SPC段基因,插到带有EGFP基因的真核细胞表达载体pEGFP-N1中,经Bam HⅠ及EcoRⅠ酶切鉴定正确后转染Vero细胞,用荧光显微镜检测细胞中EGFP的表达,用RT-PCR和Western blot检测pAPN-SPC段基因的表达情况。结果成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-pAPN-SPC,且pAPN-SPC段在Vero细胞中得到了有效表达,为研究pAPN-SPC段蛋白对病毒增殖效果的影响奠定了基础。
- 杨震左玉柱裴丽华范京惠
- 关键词：真核表达
- 猪流行性腹泻病毒HB/FN株S基因的克隆、原核表达及免疫原性分析被引量：5
- 2013年
- 根据GenBank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典毒株的S基因序列并参照pMD19-T载体序列,设计了一对分别引入限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,PCR方法从猪流行性腹泻病毒HB/FN株中扩增得到一条1 080bp的片段。将其连入pMD19-T载体中,经酶切鉴定并测序,测序结果和参考株S基因同源性高达100%。根据抗原性分析选择其抗原性较高的655bp基因片段分别插入到pET-28a(+)、pET-32a(+)、pGEX-6p-1中,构建3种不同的原核表达载体,经合适条件的IPTG诱导后SDS-PAGE分析,结果显示S基因在3种表达载体中均能表达,在pET-28a(+)中表达量最高,表达产物分子质量约为25ku。利用His标签的特性对重组蛋白进行纯化,Western blot证明蛋白可以与PEDV阳性血清产生特异性结合反应。用纯化的蛋白免疫小鼠,抗体检测显示S蛋白具有良好的免疫原性。
- 王晨枫左玉柱裴丽华杨震范京惠
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因原核表达免疫原性
