国家自然科学基金(81172962)
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 相关作者：邵雷陈代杰李继安李梦茜石煊雯更多>>
- 相关机构：上海医药工业研究院上海师范大学雅本化学股份有限公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项上海市青年科技启明星计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程医药卫生农业科学更多>>
- 乙醇脱氢酶与葡萄糖脱氢酶偶联催化制备(S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇被引量：3
- 2016年
- (S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇是抗癌药物克唑替尼的手性合成前体,可由2,6-二氯-3-氟苯乙酮经乙醇脱氢酶催化还原制备,还原中所需的还原型辅酶Ⅱ再生是该反应的技术瓶颈。本研究构建重组大肠杆菌E.coli BL21-ADH和E.coli BL21-GDH,实现了葡萄糖脱氢酶和乙醇脱氢酶的共表达,并进行偶联转化。结果表明,当在反应温度为30℃,p H为7的条件下,(S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇的产量达到最高,在投料量为6%时,该体系转化率为93.75%。
- 刘丽勤张骏梁谭俊陈代杰李亚军邵雷
- 关键词：乙醇脱氢酶葡萄糖脱氢酶
- 用于合成L-2-氨基丁酸基因工程菌的构建被引量：1
- 2015年
- 构建了还原型辅酶Ⅰ(NADH)再生与亮氨酸脱氢酶(LDH)偶联的催化体系,合成甲酸脱氢酶(FDH)基因序列片段,连接入pET28a质粒,构建了pFDH-pET28a,转化入E.coli BL21(DE3)表达。经IPTG诱导后,FDH粗酶液的酶活力约10 u/ml。合成LDH基因序列,连接入pET21a质粒,构建了pLDH-p ET21a,将该质粒与pFDH-pET28a共转化入E.coli BL21(DE3),共表达FDH与LDH,与苏氨酸脱氨酶(TD)共同催化L-2-氨基丁酸的合成。投料量为7 g/100 ml时,该体系产率可达95%。
- 郭红颜梁蕊李航陈代杰邵雷
- 关键词：甲酸脱氢酶共表达
- 增加cmcJ基因表达盒拷贝数对转化头孢菌素C效率的影响
- 2013年
- 研究表明利用棒状链霉菌Streptomyces clavuligerus(ATCC27064)的粗酶液能够在头孢菌素C的7位添加一个甲氧基,得到的7α-甲氧基头孢菌素C,可以作为头霉素类抗生素的半合成前体。本研究首先构建含有棒状链霉菌中cmcJ基因的重组质粒pHJJ-2,再通过属间接合转移的方法将该基因片段导入棒状链霉菌中,得到cmcJ基因表达盒增加的棒状链霉菌重组突变株。结果表明,重组突变株将头孢菌素C转化为羟基化头孢菌素C的转化率,从野生型菌株的57.0%提高到重组突变株的67.4%;甲氧基头孢菌素C的转化率由野生型的43.1%提高到重组突变株的51.9%。
- 黄娟娟郭兆霞李继安刘伟邵雷陈代杰
- 关键词：头孢菌素C生物转化棒状链霉菌基因重组
- 糖基转移酶编码基因snogE中断对诺加霉素生物合成的影响被引量：1
- 2013年
- 为了考察基因snogE中断对诺加霉素生物合成的影响,比对多种糖基转移酶的氨基酸序列,并克隆与已知蒽环类抗生素糖基转移酶序列同源性最高的snogE编码基因片段,构建基因中断质粒pSXW-2-62。利用接合转移的方法将其转入产诺加霉素的胡桃链霉菌中并发生同源重组,得到重组菌株mSXW-2-71,验证突变株基因型与发酵产物。结果表明,基因中断质粒以正确方式整合入基因组,中断了snogE基因;在突变株发酵产物中无法检测到诺加霉素产生。snogE基因编码的糖基转移酶在诺加霉素的生物合成途径中是必需的。
- 石煊雯李梦茜李航李继安陈代杰邵雷
- 关键词：糖基转移酶基因中断同源重组
- 犹他游动放线菌中酰胺水解酶基因拷贝数增加对转化棘白菌素B效率的影响
- 2012年
- 目的:利用ΦC31整合酶介导的位点特异性重组方法,构建棘白菌素B酰胺水解酶基因拷贝数增加的犹他游动放线菌重组菌株。方法:构建含有棘白菌素B酰胺水解酶基因的基因整合型质粒pYGCQ-03-13,通过属间接合转移的方法将该基因片段转入犹他游动放线菌SIPI-T2001中;利用静息细胞转化法,考察其对转化效率的影响。结果:筛选得到的阳性重组菌株SIPI-GE.T2001,对棘白菌素B的转化效率最高达到61.7%。结论:增加棘白菌素B酰胺水解酶基因拷贝数,有效地提高了犹他游动放线菌对棘白菌素B的转化效率。
- 刘爱娟常青李继安卢亮陈代杰苏敏邵雷
- 关键词：酰胺水解酶生物转化基因重组
- 夫西地酸产生菌菌落形态与代谢特征的研究被引量：1
- 2012年
- 通过对梭链孢脂球菌SIPI-A.3201进行紫外诱变处理,挑选出3种比较典型的单菌落.摇瓶发酵考察它们的生长代谢特性,检测菌体浓度、糖氮代谢、pH变化以及夫西地酸生物合成量等几项指标.并且对菌株Ⅰ和菌株Ⅲ发酵过程中的菌丝形态变化进行了研究.结果表明:与菌株Ⅰ和菌株Ⅱ相比,菌株Ⅲ草帽型的单菌落产抗水平最高,达到了约480×10-6g/mL.
- 邓昕蓝鸿董晓景李继安陈代杰
- 关键词：夫西地酸菌落形态
- 产诺加霉素链霉菌摇瓶发酵条件的研究被引量：2
- 2013年
- 诺加霉素是由黑胡桃链霉菌Streptomyces nogalater产生的结构复杂的蒽环类抗生素,具有较强的抗肿瘤活性。该文对实验室保藏的Streptomyces nogalater ATCC 27451进行菌种选育,得到了一株发酵效价高,遗传稳定的高产菌株。通过摇瓶培养,从发酵培养基和培养条件两方面进行发酵工艺的优化。培养基方面,从单一碳源,单一氮源的最佳种类和组合的筛选,到前体氨基酸以及油的添加进行尝试;培养条件方面,考察了温度,pH,装量,放瓶时间等因素,最终获得的最佳培养基和培养条件,与出发初始菌株和初始培养条件相比,从最初的发酵产量0.048 g/L提高到了0.312 g/L,最终发酵单位提高了6.5倍。这些工作为我们以后大规模的发酵诺加霉素奠定了基础。
- 刘伟石煊雯李梦茜李继安陈代杰邵雷
- 关键词：蒽环类抗生素抗肿瘤抗生素菌种选育培养基优化摇瓶发酵
- 制癌链霉菌ATCC15944发酵液中抗肿瘤组分的制备和初步鉴定被引量：1
- 2012年
- 新制癌菌素是1965年发现的烯二炔类抗肿瘤抗生素,聚(苯乙烯-马来酸)-NCS偶联物在日本主要用于临床的肝癌介入治疗,目前该药物在国内还没有生产。为了制备新制癌菌素。新制癌菌素产生菌Streptomyces carcino-staticus ATCC15944被在28℃、250 r/min条件下液体发酵,振荡培养72 h。发酵液经预处理后,离心后取上清液经硫酸铵分级沉淀、纯水膜透析分离纯化得到组分SIPI-ZX-1。HPLC分析表明产物纯度大于90%。SDS-PAGE和质谱数据显示,该蛋白质相对分子质量约为11 ku。该产物的抗人肝癌细胞的体外活性被测定。该结果与新制癌菌素的分子质量和抗肿瘤活性数值基本一致。本制备方法简捷,成本较低,本工作为进一步研究新制癌菌素的制备工艺奠定了基础。
- 郭兆霞陈顺陈秀华王娟邵雷
- 关键词：盐析SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
