广东省科技计划工业攻关项目(2008B060600055)
- 作品数：10 被引量：64H指数：6
- 相关作者：刘颖纪超吴伟康刘剑刘克玄更多>>
- 相关机构：广东药学院中山大学中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 组织蛋白酶E第284位苏氨酸残基对酶活性的作用
- 2009年
- 目的探讨组织蛋白酶E第284位苏氨酸残基在酶活性中的作用。方法通过基因点突变，将大鼠组织蛋白酶E内羧基端的活性部位基序中第284位苏氨酸残基用丝氨酸进行替代，构建变异体T284S。结果当将野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E基因在HEK293T细胞中进行异源表达时，在细胞培养基和细胞提取物中都发现有野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E的酶原蛋白表达。突变体T284S仍具有自我转化为成熟型酶的能力，尽管它们的酶活性只是野生型的40％，变异体的Km值与野生型的相似，但它的Keat值却比野生型显著下降。变异体和野生型酶都被胃酶抑素和蛔虫胃蛋白酶抑制剂所抑制，Ki值几乎相同。变异体在各种酸碱度下的圆二色光谱与野生型基本相同。结论（1）第284位苏氨酸残基对酶的催化活性确实非常重要。变异体T284S酶催化活性的下降是由于多出来的甲基使活性部位氢键的分布发生改变，从而使酶与底物的作用模式发生改变。（2）BACE-1不能被胃酶抑素抑制，可能与羧基端结构域的活性部位基序差异无关，而与BACE1蛋白结构中的其它部分有关。
- 刘剑
- 金属硫蛋白介导附子多糖对缺氧复氧心肌细胞的保护被引量：15
- 2012年
- 目的:以金属硫蛋白为着眼点,探讨附子多糖对缺氧复氧后心肌细胞的保护机制。方法:建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、附子多糖组。缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3 h后复氧6 h;附子多糖组分别给予10.0,1.0,0.1 g.L-1的附子多糖预处理心肌细胞24 h后再予缺氧3 h后复氧6 h。ELISA检测金属硫蛋白的含量,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,测定心肌细胞内丙二醛(MDA)的含量和细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果:与缺氧/复氧组相比较,附子多糖可以呈剂量依赖形式地增加金属硫蛋白的合成,减少MDA的生成与LDH的的释放,抑制心肌细胞凋亡,在10.0 g.L-1时作用达到峰值。结论:附子多糖对于缺氧复氧心肌细胞损伤具有保护效应,其机制与附子多糖促进金属硫蛋白的合成,对抗氧化应激损伤,抑制心肌细胞凋亡有关。
- 刘颖纪超吴伟康
- 关键词：附子多糖金属硫蛋白缺氧复氧损伤
- 药物模拟心肌缺血后适应的研究进展被引量：1
- 2011年
- 应用缺血后适应(IPost)的机制进行药物后适应的开发研究成为临床治疗缺血性心脏疾病的研究热点。IPost的发生机制与其激发心肌内源性活性物质的释放、启动保护性信号转导通路密切相关。目前已发现许多药物通过多个信号转导通路证实参与IPost的发生。现就能够模拟心肌IPost发挥保护缺血心肌作用的相关药物、信号转导通路的最新研究进展作一综述。
- 纪超刘颖
- 关键词：药物后适应心肌缺血再灌注损伤心肌保护
- JAK/STAT通路在大鼠肠缺血再灌注所致肠损伤中的作用被引量：12
- 2011年
- 目的:探讨Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)通路在大鼠肠缺血再灌注(I/R)所致肠损伤中的作用。方法:雄性健康SD大鼠40只,体重230～255 g,随机分为5组(n=8):假手术组(sham组),仅分离肠系膜上动脉(SMA)但不夹闭;肠缺血再灌注组(I/R组),采用阻断SMA 60 min后开放120 min的方法制备肠I/R损伤模型;AG490(JAK特异性抑制剂)组,于夹闭SMA前30 min在大鼠侧腹部皮下注射8 mg.kg-1AG490,余同I/R组;雷帕霉素(STAT特异性抑制剂)组(RPM组),于夹闭SMA前30 min在大鼠侧腹部皮下注射0.4 mg.kg-1 RPM,余同I/R组;二甲基亚砜组(DMSO组),于夹闭SMA前30 min侧腹部皮下注射2μmol.kg-1DMSO,余同I/R组,DMSO系AG490和RPM的溶剂。所有大鼠均于再灌注120 min后取小肠观察肠黏膜形态学变化并行Chiu's评分,同时取肠黏膜组织检测髓过氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及丙二醛(MDA)和乳酸(LD)含量,采集动脉血检测血清二胺氧化酶(DAO)活性及15-F2t-isoprostane、内皮素-1(ET-1)和血栓烷素B2(TXB2)浓度。TUNEL法检测肠上皮细胞凋亡情况并计算凋亡指数;采用Western blotting检测磷酸化的JAK2(p-JAK2)及STAT3(p-STAT3)的表达水平。结果:与sham组比较,其余各组的Chiu's评分和肠黏膜细胞凋亡指数均显著升高(P<0.05);而I/R组和DMSO组的LD和MDA含量、DAO活性、MPO活性、15-F2t-iso-prostane浓度、ET-1浓度及TXB2浓度均显著升高,p-JAK2及p-STAT3蛋白表达量也显著升高,SOD活性显著降低(P<0.05)。与I/R组和DMSO组比较,AG490组和RPM组的DAO活性、MPO活性、肠黏膜上皮细胞凋亡指数、ET-1浓度、p-JAK2及p-STAT3蛋白表达均显著降低,SOD活性则显著升高(P<0.05)。结论:JAK/STAT信号通路的激活参与了肠I/R所致的肠损伤的发生,其作用与促进氧化应激损伤、中性粒细胞的聚集和肠黏膜细胞凋亡有关。
- 李毅李坤河温仕宏李偲李云胜刘颖张旭宇姚溪刘克玄
- 关键词：JAK/STAT通路AG490雷帕霉素缺血再灌注损伤
- STAT3在附子多糖后处理保护缺氧/复氧乳鼠心肌细胞机制中的作用被引量：7
- 2012年
- 目的以信号转导子与转录激活子3(STAT3)为切入点,探讨附子多糖后处理对乳鼠缺氧/复氧后心肌细胞的保护机制。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、附子多糖组、STAT3特异性的阻断剂Stattic加附子多糖组、Stattic组。流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,Western blot法分析磷酸化-STAT3(P-STAT3)、细胞色素C(CytC)和Caspase-3的表达,荧光定量PCR检测Bcl-xl mRNA及Bcl-xs mRNA的表达量。结果与缺氧/复氧组相比较,附子多糖后处理可以促进P-STAT3的表达,上调Bcl-xl基因表达而下调Bcl-xs基因表达,阻碍CytC自线粒体的释放及Caspase-3的表达,抑制心肌细胞凋亡发生。而Stattic可以逆转附子多糖后处理对心肌细胞的保护效应及P-STAT3的表达增加。结论附子多糖后处理对缺氧/复氧心肌细胞的保护效应与其激活STAT3、促进抑凋亡蛋白Bcl-xl表达、保护线粒体、阻断细胞凋亡的线粒体通路有关。
- 刘颖纪超吴伟康
- 关键词：附子多糖信号转导子与转录激活子3后处理乳鼠心肌细胞
- 附子多糖对SD乳鼠缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及其机制研究被引量：16
- 2012年
- 目的以乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型模拟在体心肌缺血再灌注损伤,观察附子多糖后处理对缺氧/复氧后心肌细胞的作用及机制。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧后适应组和附子多糖组。缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3 h后复氧6 h;缺氧后适应组在细胞缺氧3 h后,复氧前即给予3个循环的5 min复氧/5 min缺氧,随后复氧6 h;附子多糖组在缺氧3 h后,将心肌细胞换入含附子多糖浓度为10 mg.mL-1的培养液中,常规培养6 h。MTT法检测细胞活力,流式细胞仪测定细胞内钙离子浓度和心肌细胞凋亡率,检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性。结果与缺氧/复氧组比较,经附子多糖后处理,可以增加心肌细胞存活率(P<0.01),减少LDH(P<0.01)和CK(P<0.05)的释放,降低细胞内钙离子浓度(P<0.05),有效抑制心肌细胞的凋亡(P<0.05)。结论附子多糖对缺氧/复氧后心肌细胞产生保护效应,机制与其抑制钙超载、减轻线粒体的损伤有关。
- 刘颖纪超
- 关键词：附子多糖乳鼠
- 附子多糖保护缺氧/复氧乳鼠心肌细胞及其抗内质网应激的机制研究被引量：22
- 2012年
- 目的:观察附子多糖对缺氧/复氧后心肌细胞的保护,并探讨附子多糖的保护机制是否与其抑制内质网应激反应有关。方法:建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组(缺氧3 h后复氧6 h)和不同浓度附子多糖(0.1g/L、1g/L、10g/L、20g/L)+缺氧/复氧组。MTT法测定心肌细胞存活率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,Western blotting分析葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及caspase-12的表达,荧光定量。PCR进一步检测CHOP及caspase-12 mRNA表达。结果:缺氧复氧后,心肌细胞中内质网应激反应标志蛋白GRP78表达增加,内质网应激凋亡相关蛋白CHOP及caspase-12蛋白和mRNA表达亦明显升高。与缺氧/复氧组相比较,附子多糖预处理24 h后可以有效抑制缺氧/复氧引起的GRP78、CHOP和caspase-12的表达上调,增加心肌细胞的存活率,抑制心肌细胞凋亡的发生。附子多糖的保护效应呈剂量依赖形式,10 g/L剂量时达到峰值。结论:附子多糖保护缺氧/复氧后心肌细胞的可能机制与其抑制内质网应激所介导的细胞凋亡途径相关。
- 刘颖纪超吴伟康
- 关键词：附子多糖内质网应激心肌细胞
- 附子多糖抗心肌细胞凋亡的Smac/Diablo机制研究被引量：5
- 2012年
- 目的:建立体外缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,以模拟在体心肌细胞缺血/再灌注损伤,观察附子多糖(FPS)对H/R后心肌细胞凋亡的影响,并以Smac/Diablo为切入点探讨其作用机制。方法:采用原代培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧模型,随机分为:正常对照组(Control)、缺氧/复氧组(H/R)、附子多糖(0.1、1、10mg/mL)组。MTT法测定细胞的存活率,流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,荧光定量PCR检测BCL-2 mRNA的表达量,Western blot检测胞浆Smac/Diablo蛋白的表达。结果:与对照组比较,H/R组细胞存活率降低,细胞凋亡率显著增加,BCL-2 mRNA的表达量减少,胞浆中Smac/Diablo的表达增加。与H/R组比较,经附子多糖处理24 h后,附子多糖可呈剂量依赖性增加心肌细胞的存活率,抑制细胞凋亡率,促进BCL-2 mRNA的表达,降低胞浆中Smac/Diablo的表达,在10 mg/mL浓度时保护效应达到峰值。结论:FPS可抑制缺氧复氧后心肌细胞凋亡的发生,作用机制可能与其促进BCL-2 mRNA的表达,保护线粒体,抑制Smac/Diablo的释放,从而阻碍细胞凋亡的线粒体信号转导有关。
- 纪超刘颖
- 关键词：附子多糖细胞凋亡SMAC/DIABLO
- 附子多糖对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的保护机制被引量：8
- 2012年
- 目的以细胞凋亡的线粒体信号通路为着眼点,对附子多糖对缺氧/复氧后心肌细胞的保护机制进行探讨。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧后适应组和附子多糖组。缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3 h后复氧6 h;缺氧后适应组在细胞缺氧3 h后,复氧前即给予3个循环的5 min复氧/5 min缺氧,随后复氧6 h;附子多糖组在缺氧3 h后,将心肌细胞换入含附子多糖浓度为10 g.L?1的培养液中常规培养6 h。流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率和线粒体膜电位,进行凋亡诱导因子(AIF)的Western blotting分析,检测心肌细胞内SOD活性和MDA含量。结果与缺氧/复氧组相比较,附子多糖后处理可以保护心肌细胞SOD活性,减少MDA的生成,阻止线粒体膜电位的下降,抑制AIF自线粒体向胞浆的释放,减少心肌细胞凋亡率。结论附子多糖后处理对缺氧/复氧后心肌细胞的保护机制与其抗氧化损伤,抑制细胞凋亡的线粒体信号途径有关。
- 刘颖纪超吴伟康
- 关键词：附子多糖细胞凋亡
- 组织蛋白酶E氨基端催化性残基的确定
- 2009年
- 目的验证组织蛋白酶E保守基序DTG中第98位天门冬氨酸残基为组织蛋白酶E氨基端催化性残基。方法通过基因定点突变技术将第98位天门冬氨酸残基用丙氨酸替代,制成变异体D98A,并将野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E基因在人胚胎肾293T细胞中进行异源表达。结果在细胞培养基和细胞提取物中都发现有野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E的酶原蛋白表达。突变体D98A酶原在酸性条件下不能转变为酶,也没有酶活性。结论组织蛋白酶E第98位天门冬氨酸残基是酶的催化性残基,对酶的催化活性非常重要。
- 刘剑
