山西省国际科技合作计划(2010081002)
- 作品数：17 被引量：50H指数：5
- 相关作者：李鹏飞黄洋孟金柱陈建伟姜晓龙更多>>
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- 发文基金：山西省国际科技合作计划国家自然科学基金引进国际先进农业科技计划更多>>
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- 猪CART mRNA全CDS区序列的克隆与表达载体的构建被引量：3
- 2011年
- 选用猪为研究对象,以可卡因苯异丙胺调控转录肽(CART)作为影响猪繁殖机能的多肽,依据NCBI上登录的CARTmRNA序列设计3对特异性引物,用RT-PCR方法从下丘脑内扩增出CART mRNA的部分序列并进行序列分析;再根据扩增出的序列设计一对带酶切位点的特异性引物,用PCR方法扩增出含EcoRⅠ/HindⅢ酶切位点的CART mRNA的全编码序列(CDS)区序列.结果表明:猪下丘脑CART mRNA的CDS区全长367 bp,CART基因在下丘脑上有表达,并成功构建pEG-32a-CART原核表达载体.
- 李鹏飞李富禄于秀菊吕丽华
- 卵泡发育相关基因在牛优势和从属卵泡颗粒细胞中表达的研究被引量：3
- 2014年
- 旨在探究卵泡发育相关基因在牛发情周期内第一卵泡波中优势卵泡(Dominant follicles,DF)和从属卵泡(Subordinate follicles,SF)颗粒细胞中表达差异,进而筛选影响牛卵泡发育的相关基因。通过GEO数据库与基因功能分析筛选与牛卵泡发育相关基因,采用qRT-PCR检测牛第一卵泡波DF和SF颗粒细胞中各基因的表达差异。结果显示:筛选出6个候选基因(SFRP2、CPEB1、PRKAG2、MAPK8、PPP2R2A和PRSS23)与牛卵泡发育有关;qRT-PCR检测,CPEB1在DF中的表达量极显著高于SF(P<0.01),PRKAG2在DF中的表达量显著高于SF(P<0.05);SFRP2和MAPK8在SF中的表达量极显著高于DF(P<0.01);PPP2R2A和PRSS23虽然在DF和SF的表达量存在倍数关系,但差异并不显著。综上表明,在牛卵泡发育过程中,CPEB1和PRKAG2促进卵泡发育,SFRP2和MAPK8对卵泡的发育可能有抑制作用。
- 姚晓磊李鹏飞姜晓龙孟金柱黄洋刘岩陈建伟赵妙妙吕丽华
- 关键词：卵泡发育基因
- 可卡因-苯丙胺调控转录肽(CART)对猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的影响被引量：11
- 2012年
- 旨在研究可卡因-苯丙胺调控转录肽(Cocaine amphetamine regulated transcript,CART)对促卵泡素(Follicular stimulating hormone,FSH)诱导的猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的影响。用Long-term培养方法在不同CART、FSH浓度下对猪卵巢卵泡颗粒细胞培养7d,在显微镜下观察各孔细胞生长情况并采集图像;采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定各孔雌激素浓度。细胞培养168h后:(1)在培养液不添加CART时,添加FSH孔中的雌激素浓度与不添加孔相比,显著提高;浓度为25ng.mL-1时,雌激素浓度最高,为(17 295.57±184.03)pg.mL-1;(2)CART对体外培养的无FSH和FSH为5ng.mL-1的猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生没有影响;(3)当培养体系FSH浓度分别为25和50ng.mL-1时,随着CART浓度的升高(0.01、0.1、1μmol.L-1),培养液雌激素浓度有下降的趋势,但各组间差异不显著(P>0.05)。但是,当FSH为25ng.mL-1,CART为0.1和1μmol.L-1时,与对照组相比,颗粒细胞雌激素的产生明显受到抑制(P<0.05)。但是,统计分析FSH和CART互作效应并不显著(P>0.05),这一点需进一步试验证明;(4)当培养液添加50ng.mL-1 FSH时,随着CART浓度的升高(0.01、0.1、1μmol.L-1),与对照组相比,雌激素浓度各组差异不显著(P>0.05)。猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生需在FSH诱导下进行;当培养液FSH为25和50ng.mL-1时,CART对FSH诱导的猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生有抑制作用,但抑制效果并不显著。由此推断,并不像单胎的牛、羊,CART在猪卵泡发育过程中,可能并非是个主要的局部负调控因子。
- 李鹏飞岳文斌李富禄黄洋孙晋艳朱芷薇于秀菊贺俊平范瑞文任有蛇吕丽华
- 关键词：促卵泡素雌激素颗粒细胞
- 猪下丘脑CART完整CDS区结构域分析
- 2011年
- 为获得猪可卡因苯异丙胺调控转录肽(Cocain and amphetamine-regulated transcript,CART)的完整CDS区并分析其结构域,根据GenBank中公布的其他物种CART的cDNA序列,设计了三对特异性引物,采用RT-PCR技术扩增出猪下丘脑组织CART mRNA的部分序列。经NCBI比对,与其他物种的相似性较高,提示该序列为猪CART的mRNA序列,CART mRNA在猪下丘脑上有表达;对该序列进行3D结构分析,发现猪CART蛋白在第40～116位氨基酸间存在一个CART超家族(CART Superfamily),这个超家族可能通过作为铁离子的配合基,在动物体内实现多种生理功能。
- 李鹏飞李富禄于秀菊吕丽华
- 关键词：CART克隆
- 可卡因-苯丙胺调控转录肽对绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的影响被引量：10
- 2013年
- 研究可卡因-苯丙胺调控转录肽(Cocaine amphetamine regulated transcript,CART)对促卵泡素(Follicular stim-ulating hormone,FSH)诱导的绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素(E2)产生的影响。收集卵巢卵泡颗粒细胞,Long-term培养方法在不同CART、FSH浓度下培养7d,分别在培养48、96、144和168h后,在显微镜下观察各孔细胞生长情况;采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定其雌激素浓度。培养液分别加入不同浓度FSH(5、25和50ng·mL-1),细胞培养168h后,雌激素浓度显著提高。当FSH浓度为5ng·mL-1时,培养液雌激素浓度最高为5 694.5±40.5pg·mL-1;当FSH浓度为5ng·mL-1,随着CART不同浓度的加入(0.01、0.10、1.00μmol.L-1),颗粒细胞雌激素的产生受到不同程度的抑制;在FSH浓度为25、50ng·mL-1水平下加入CART浓度为0.10μmol.L-1时,对FSH诱导的绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的抑制作用明显(P<0.01)。绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生需在FSH诱导下进行;CART对FSH诱导的绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生有抑制作用。
- 李鹏飞岳文斌黄洋孙晋艳李晓明庞钰莹于学静贺俊平孟金柱任有蛇吕丽华
- 关键词：绵羊促卵泡素颗粒细胞雌激素
- 一种简便的机械法分离绵羊睾丸间质细胞的研究被引量：1
- 2014年
- 本文旨在探寻一种取代酶消化法分离绵羊睾丸间质细胞的简便新方法。首先将绵羊睾丸被膜剥离,然后将睾丸切块,采用机械震荡的方法使间质细胞自动脱落,然后用差异贴壁法进一步纯化间质细胞。试验结果表明,该方法分离绵羊睾丸间质细胞省时省力,睾丸间质细胞存活率与纯度都较高。
- 黄洋靳辉曹霞李鹏飞姜晓龙陈建伟姚晓磊赵妙妙吕丽华
- 关键词：绵羊睾丸间质细胞
- 绵羊卵巢卵泡颗粒细胞体外培养中促卵泡素和胰岛素浓度优化研究被引量：3
- 2012年
- 为了进一步探讨在无血清体外培养条件下,促卵泡素(FSH)和胰岛素对绵羊卵巢颗粒细胞的影响,以优化颗粒细胞体外培养体系。试验设计6个FSH浓度梯度和3个胰岛素浓度梯度。体外培养7d后,检测培养体系中颗粒细胞数和雌激素浓度。与对照组相比,培养液中添加FSH与胰岛素可显著提高颗粒细胞的增殖和雌激素的分泌(P<0.01);且随着FSH浓度的增加,颗粒细胞数和雌激素分泌量显著增加,当FSH浓度为5.0μg·L-1时,雌激素分泌量最高;随着胰岛素浓度增加,颗粒细胞数和雌激素分泌量显著增加,当胰岛素浓度为10μg·L-1时,颗粒细胞数和雌激素分泌量最高。
- 庞钰莹岳文斌于雪静李鹏飞孟金柱刘岩李晓明黄洋任有蛇吕丽华
- 关键词：FSH胰岛素颗粒细胞绵羊
- CART和胰岛素对绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的影响
- 2013年
- 为了研究CART和胰岛素对颗粒细胞的作用机制,实验采用细胞培养液中梯度量添加CART和胰岛素的方法,以探究CART对颗粒细胞增殖和E2分泌的影响。研究发现CART对颗粒细胞增殖和E2分泌有抑制作用,而胰岛素有促进作用。当CART1ng/mL且无胰岛素时,颗粒细胞和E2分泌量最小;胰岛素10ng/mL且无CART时,颗粒细胞和E2分泌量最大。
- 李晓明岳文斌孟金柱刘岩于雪静庞钰莹黄洋吕丽华
- 关键词：CARTE2胰岛素颗粒细胞
- FSH和胰岛素对绵羊卵巢卵泡颗粒细胞体外培养的影响被引量：8
- 2013年
- 旨在探讨在无血清体外培养条件下,促卵泡素(Follicular stimulating hormone,FSH)和胰岛素对绵羊卵巢卵泡颗粒细胞增殖和雌激素分泌的影响。收集卵巢卵泡颗粒细胞,Long-term培养方法在FSH、胰岛素不同浓度下培养168h后,在显微镜下观察各孔细胞生长情况并计数;采用双抗体ABC-ELISA法测定雌激素浓度。结果表明,FSH与胰岛素的共培养体系,颗粒细胞的增殖和雌激素的分泌量显著高于各单独处理组;胰岛素浓度为10ng·mL-1,FSH浓度分别为5.0和25.0ng·mL-1时,2组颗粒细胞数最高,但差异不显著;当胰岛素浓度为10ng·mL-1,FSH浓度为5.0ng·mL-1时,雌激素分泌量最高,与其他组差异显著(P<0.05),此时颗粒细胞的生长状况最好,培养体系最佳。绵羊卵巢卵泡颗粒细胞增殖和雌激素分泌需在FSH诱导下进行;胰岛素对FSH诱导的绵羊卵巢卵泡颗粒细胞增殖和雌激素的分泌有促进作用;二者对颗粒细胞增殖和雌激素的分泌存在剂量效应关系。
- 李鹏飞岳文斌庞钰莹于雪静黄洋任有蛇吕丽华
- 关键词：绵羊颗粒细胞体外培养促卵泡素胰岛素
- 蛋鸡卵巢PRSS23基因CDS序列分析被引量：2
- 2014年
- 为获得蛋鸡丝氨酸蛋白酶23(PRSS23)的CDS序列并分析其结构域,试验根据NCBI中公布的其它物种PRSS23的mRNA序列,设计了特异性引物,采用RT-PCR技术扩增PRSS23 CDS全序列。BLAST比对发现,与其它物种PRSS23预测序列以及氨基酸序列同源性分别为99%、92%、91%、86%和100%、96%、96%、90%;通过分析该序列的三级结构,发现在第117到362位氨基酸之间含有一个典型的Tyrp-SPc结构域,该结构域具有典型丝氨酸肽链内切酶活性;通过对其蛋白信号肽预测分析,发现序列中含有信号肽,信号锚定的可能性为72.8%。
- 孟金柱李鹏飞姜小龙陈建伟刘岩黄洋吕丽华
- 关键词：蛋鸡卵泡
