山东省自然科学基金(ZR2011CQ026)
- 作品数：10 被引量：52H指数：6
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- 相关机构：青岛农业大学烟台工贸技师学院更多>>
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- 花生与其近缘野生种间细胞融合及杂种愈伤组织的形成被引量：2
- 2012年
- 本研究旨在为体细胞杂交法在花生育种中的应用奠定基础。将花生栽培种Krapts和野生种A.stenosperma幼叶解离的原生质体,用PEG方法融合后,置于添加2mg/L毒莠定(Pic)、0.1mg/L苯基噻二唑基脲(TDZ)、2%的椰乳、5g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和0.1%2-吗啉乙磺酸(MES)的改良MSB5(MS无机盐+B5有机成分)液体培养基中进行浅层培养。5周后将形成的小愈伤组织转移到添加3mg/L玉米素(ZT)、0.2mg/L6-苄氨基嘌呤(BAP)、0.1mg/L萘乙酸(NAA)的固体培养基上进行培养,促使愈伤组织增殖。观察发现,融合处理的原生质体在液体培养基上培养4天后开始分裂,2周后形成直径约300μm的细胞团,5周后小愈伤组织直径可达2～3mm。当将小愈伤组织转移到固体培养基上后,愈伤组织迅速增殖,并获得大量愈伤组织。提取愈伤组织DNA进行PCR检测,部分愈伤组织扩增出了双亲特异的DNA条带或双亲都不具有的新条带,说明愈伤组织来自于融合细胞。
- 乔利仙孙海燕隋炯明徐丽娟孙世孟王晶珊
- 关键词：花生细胞融合愈伤组织PCR检测
- 花生Rab2基因的克隆及表达分析被引量：3
- 2012年
- Rab2是小GTP结合蛋白家族成员之一,控制着蛋白从内质网到高尔基体的运输,研究发现有些Rab2基因受多种逆境胁迫的诱导表达。为了获得花生Rab2基因,本试验根据拼接的cDNA序列设计1对特异性引物,通过RT-PCR克隆了1个花生Rab2基因。测序结果显示其cDNA含有长636bp的完整开放阅读框,编码的蛋白含211个氨基酸,推测分子量为23.4kDa。比对分析发现花生Rab2蛋白与多种生物的Rab2的氨基酸序列具有较高的同源性,荧光定量PCR研究表明AhRab2基因受低温、干旱、盐和植物激素ABA的诱导表达。这为利用基因工程手段调控花生的抗逆性奠定了基础。
- 李瑞隋炯明
- 关键词：花生进化树
- 不同基因型对花生胚小叶植株再生的影响被引量：6
- 2012年
- 以不同类型18个花生品种成熟种子的胚小叶为外植体,对不定芽诱导及植株再生进行了研究,旨在为花生遗传转化和离体诱变等提供培养方法。将胚小叶外植体培养在添加1mg/LNAA和6mg/LBAP的诱导培养基上,4周后转移到添加4mg/LBAP的培养基上进行培养。结果表明,所有的供试品种芽点诱导率均高于60%,但5大类型间及品种间（62.2%~95.5%）存在显著差异,龙生型平均诱导率最高（87.2%）,其次是珍珠豆型（81.5%）,多粒型最低（63.1%）。将形成芽点的外植体转移到添加4mg/LBAP的培养基上后,部分外植体从芽点上分化出不定芽,继续培养不定芽伸长并再生植株。植株再生率也存在显著性差异,最高的是珍珠豆型（83.5%~97.1%）,最低是多粒型（14.8%~22.0%）。
- 隋炯明乔利仙赵明霞徐丽娟王晶珊
- 关键词：花生丛生芽诱导植株再生
- PyTPS转化花生对其后代耐盐性和品质性状的影响被引量：7
- 2014年
- 为了研究条斑紫菜TPS基因(PyTPS)对花生种子耐盐性和品质性状的影响,利用花粉管通道法,将携带条斑紫菜PyTPS基因的pCAMBIA2300-PyTPS重组载体导入花生,获得了T0转基因植株。利用PCR对T0植株进行了检测,PCR阳性率为34.7%。将部分转基因植株的T2种子进行耐盐试验,利用半定量RT-PCR分析了PyTPS基因在转基因植株中的表达情况,并用近红外技术测定了T2种子的品质性状。结果表明,部分转基因花生种子在盐溶液中的发芽率显著提高,PyTPS基因可在有些转基因植株中表达,有的转基因植株的蛋白质、油酸、亚油酸或脂肪含量发生了明显变化。总之,条斑紫菜PyTPS基因导入花生后,既可提高转基因花生种子的耐盐性,又对部分后代种子的品质性状产生影响。
- 王亚郭宝太乔利仙武秀玲王晶珊韩立坤隋炯明
- 关键词：花生转基因植株耐盐性
- 花生fw2.2基因的克隆及遗传转化被引量：8
- 2011年
- fw2.2基因是影响番茄果重的一个重要数量性状基因,在心皮的细胞分裂中起负调控作用。本研究以番茄fw2.2基因的序列为探针,从花生EST数据库中筛选同源序列。根据花生的EST拼接序列设计引物对花生进行扩增,目标产物测序后,将推测的氨基酸序列与其他植物fw2.2基因编码的氨基酸序列进行比对,同源性为34.78%～66.85%。半定量RT-PCR结果表明,该基因在野生种和栽培种中的表达存在差异。将fw2.2基因连接到植物表达载体,通过农杆菌介导法转化花生品种花育23号,获得了12个PCR阳性的独立转化子。
- 刘强王晶珊乔利仙赵春梅隋炯明
- 关键词：花生克隆
- 花生体胚诱导及植株再生被引量：5
- 2012年
- 以成熟种子胚小叶为外植体,对花生体胚诱导及植株再生进行了研究,旨在为花生体细胞杂交、离体诱变及遗传转化提供培养方法。将花生5大类型17个品种的胚小叶外植体分别培养在添加10mg/L2,4-D的培养基上诱导体胚形成。培养4周后将形成体胚的外植体转移到添加4mg/LBAP的培养基上进行培养,促使体胚萌发成苗。结果表明,不同类型间体胚诱导率和植株再生率存在明显差异,中间型供试品种获得了较高的胚诱导率(84.1%～91.2%)和植株再生率(81.1%～97.0%);珍珠豆型和普通型内供试品种间体胚诱导率差异较大,分别为43.9%～85.0%和42.2%～82.2%,而植株再生率均较高,分别为94.3%～96.5%和88.1%～98.7%;多粒型品种体胚诱导率(32.2%～50.0%)和植株再生率(41.2%～55.1%)均最低;而龙生型体胚诱导率(61.1%～87.8%)和植株再生率(63.7%～87.6%)均表现为中间。再生苗经嫁接驯化后移栽于田间,植株正常生长和结实。本研究结果说明,花生不同类型间再生能力存在显著差异,多粒型品种再生能力最低。
- 乔利仙隋炯明谭玲玲郭宝太孙世孟王晶珊
- 关键词：花生胚胎发生植株再生
- 花生β-1,3-葡聚糖酶基因启动子的克隆及功能分析被引量：10
- 2013年
- 植物β-1,3-葡聚糖酶属于一种重要的植物病程相关蛋白(PR蛋白),容易受到激发子的诱导而积累。用1.5 mmol/L水杨酸(SA)对花生品种花育20号幼苗进行诱导处理0.5、12、24、36、48和72 h后,提取RNA进行荧光定量检测β-1,3-葡聚糖酶基因(Ah-Glu)的表达量。结果表明,经诱导24 h后β-1,3-葡聚糖酶基因的表达量达到最高,是未经SA诱导的1.8倍。根据前期已克隆的花生β-1,3-葡聚糖酶基因序列(GenBank JQ801335),在其5'端设计3个嵌套的特异性引物扩增其上游启动子序列。以花育20号基因组DNA为模板,利用TAIL-PCR方法,扩增得到973 bp的花生β-1,3-葡聚糖酶基因启动子片段,在NCBI网站注册序列号为GenBank KC290400,并命名为Ah-Glu-Pro。PLACE和PlantCARE在线预测分析表明,Ah-Glu-Pro序列中含有TATA-box和CAAT-box等核心元件,还含有病原菌及水杨酸响应的顺式调控元件。根据Ah-Glu-Pro序列设计上下游引物,采用普通PCR法从花育20号扩增得到931 bp的启动子序列,命名为Ah-Glu-P。将Ah-Glu-P取代pCAMBIA1301质粒中的CaMV35S启动子,构建植物表达载体pCAMBIA1301-Ah-Glu-P。通过农杆菌介导法将pCAMBIA1301-Ah-Glu-P转化洋葱表皮细胞,经5 mmol/L SA诱导处理48 h后进行GUS染色。结果表明:经SA诱导后的洋葱表皮细胞GUS组织化学染色显示为蓝色,未经SA诱导的洋葱表皮细胞GUS组织化学染色未显示蓝色,说明Ah-Glu-P是一个可被诱导的启动子,可能含有对SA响应的顺式调控元件。
- 王合春陈新利隋炯明毕英娜王晶珊乔利仙
- 关键词：花生诱导型启动子染色体步移
- 农杆菌介导的花生遗传转化体系的优化被引量：11
- 2012年
- 以花生胚小叶及其诱导形成的愈伤组织为转化受体,采用农杆菌介导法,通过评估外植体GUS基因瞬时表达率,优化花生遗传转化条件。结果表明,侵染液中添加表面活性剂2-氮吗啉乙烷磺酸(MES)150mg/L或烟草提取物0.5ml/30ml有利于提高胚小叶外植体GUS瞬时表达率;采用针刺法辅助农杆菌介导转化,其胚小叶外植体多点GUS瞬时表达率(29.1%)明显高于未针刺的对照(12.1%);利用愈伤组织作为转化受体,其多点GUS瞬时表达率高达70.1%。利用此优化体系进行花生遗传转化,获得的抗性苗2011年经嫁接、移栽于试验田,PCR检测获得了T0代转基因植株,2012年部分T1代植株也检测出目的条带。
- 乔利仙于新玲隋炯明范乾程孙世孟王晶珊
- 关键词：HYPOGAEA遗传转化体系针刺法
- 花粉管通道法验证花生Oleosin基因启动子的特异性表达被引量：8
- 2013年
- 油体蛋白(Oleosin)是一类覆盖在油体表面且仅在种子中特异表达的低分子质量蛋白,能维护油体的稳定性。研究利用花生Oleosin基因的启动子替换了pCAMBIA1301的35S启动子,构建了重组表达载体pCAMBIA1301-Oleosin-pro,并利用花粉管通道法导入花生。对T0代转基因植株进行了PCR鉴定和GUS组织化学染色,结果显示:50株转基因植株有9株能扩增出目的条带,阳性率为18%,9株阳性转基因植株中有5株的子叶能被GUS染色。对GUS染色成阳性的转基因植株的子叶进行切片观察,结果显示Oleosin基因启动子驱动的GUS基因在油体蛋白中能够表达。
- 范乾程谭玲玲王亚乔利仙王晶珊隋炯明
- 关键词：花生特异性表达花粉管通道法GUS染色
- 花生AhRab7基因的克隆及其原核表达研究被引量：4
- 2013年
- 为了研究花生小G蛋白AhRab7基因在大肠杆菌中的表达模式及与高盐胁迫的关联性,采用RT-PCR技术从花生(Arachis hypogaea L.)品种花育20中克隆了AhRab7(7-1、7-2)的cDNA全长序列,通过核苷酸序列和氨基酸序列分析结果表明AhRab7(7-1、7-2)的cDNA全长分别为872 bp、816 bp,分别含1个621 bp、618 bp大小的开放阅读框(ORF,open readingframe),拟编码氨基酸数分别为206aa、205aa。将携带完整的ORF序列连入表达载体pET-28a(+)中,经IPTG诱导后进行耐盐性测定,结果表明两种全长重组酶(分别含pET-28a-Rab7-1和pET-28a-Rab7-2的重组质粒)均具有正常酶活性,明显缓解了高盐环境(5.5%～10%NaCl溶液)对大肠杆菌的生长胁迫,而对照组(含空载体pET-28a)未能检测出相同的酶活性,结果表明AhRab7基因表达可以显著缓解高盐胁迫影响。目的基因经IPTG诱导后高效表达,SDS-PAGE电泳检测到目标蛋白的大小为23kDa,与预测结果一致。这为后期探讨花生对盐胁迫及其他非生物胁迫的研究奠定了一定的基础。
- 向小华宋琳裴玉贺郭新梅隋炯明宋希云
- 关键词：花生原核表达盐胁迫
