中国博士后科学基金(2005037611)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
- 相关作者：李德伍卫方昶周淑娴黄至斌更多>>
- 相关机构：中山大学附属第二医院成都军区总医院中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- FKBP12.6重组腺病毒载体的构建及其心肌细胞感染效率测定被引量：6
- 2006年
- 目的构建携带FKBP12.6基因的重组腺病毒载体以研究FKBP12.6在心力衰竭时心室肌电重构中的作用。方法将平端化的FKBP12.6片段连接到穿梭质粒pAdTrack-CMV构建重组穿梭质粒pAdTrack/FKBP12.6,用XhoI单酶切进行鉴定。采用电穿孔法将线性化pAdTrack/FKBP12.6转化AdEasier-1细菌,产生重组腺病毒质粒pAdEasy-1/FKBP12.6。采用脂质体介导法用线性化pAdEasy-1/FKBP12.6转染293细胞,从病变的293细胞分离、纯化重组腺病毒Ad.FKBP12.6;采用PCR方法对其进行鉴定。用重组腺病毒感染乳鼠心肌细胞,在荧光显微镜下计算GFP阳性细胞百分率。结果在病变293细胞的冻融上清中含有重组腺病毒Ad.FKBP12.6,其滴度为1.5×1012pfu/mL。当感染复数(MOI)为75时,感染效率可达100%。结论成功构建了携带FKBP12.6基因的重组腺病毒载体;Ad.FKBP12.6可高效感染乳鼠心肌细胞。本研究为进一步探讨FKBP12.6在心力衰竭时心室肌电重构中的作用奠定了基础。
- 李德伍卫周淑娴
- 关键词：FKBP12.6腺病毒载体心肌细胞
- FK506结合蛋白12.6基因转染对心力衰竭心室肌细胞钙通道和钠-钙交换器电流的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨钙释放通道稳定蛋白FK506结合蛋白12.6(FKBP12.6)基因转染对心力衰竭(简称心衰)心室肌细胞钙通道(ICaL)和钠-钙交换电流(INCX)的影响。方法用携带FKBP12.6基因的重组腺病毒Ad.FKBP12.6-GFP感染分离的心衰心室肌细胞,通过免疫荧光及激光共聚焦技术检测转基因的表达;采用全细胞膜片钳技术记录ICaL和INCX。结果①心衰心室肌细胞的FKBP12.6蛋白表达显著下调,Ad.FKBP12.6-GFP感染细胞的FK-BP12.6蛋白表达水平显著高于Ad.GFP感染细胞;②Ad.GFP组心室肌细胞的ICaL密度峰值较正常对照组显著降低(6.81±0.83pA/pFvs11.43±1.14pA/pF,P<0.01),而FKBP12.6基因转染细胞电流密度峰值较Ad.GFP组显著升高(9.60±1.09pA/pFvs6.81±0.83pA/pF,P<0.01);③Ad.GFP组心室肌细胞的INCX较正常对照组明显升高(P<0.01),FKBP12.6基因转染使心衰心室肌细胞的INCX显著降低(P<0.05)。结论FKBP12.6基因转染显著升高心衰心室肌细胞ICaL,并显著降低INCX,从而逆转心衰时上述离子通道电流的改变。
- 李德伍卫黄至斌方昶
- 关键词：电生理学FKBP12.6基因转移钙通道
- BTEB2反义基因转染对血管平滑肌细胞迁移的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:研究BTEB2反义基因转染对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:将BTEB2 cDNA反向克隆至腺病毒载体,构建携带反义BTEB2基因的重组腺病毒Ad.ASBTEB2;用Ad.ASBTEB2转染VSMC,经免疫印迹法检测BTEB2蛋白质表达;通过改良Boyden趋化小室检测VSMC迁移数;用免疫细胞化学技术检测促VSMC迁移血小板源性生长因子B链(PDGF)的表达。结果:(1)Ad.ASBTEB2转染明显抑制VSMC的BTEB2蛋白表达;(2)Ad.ASBTEB2组VSMC迁移数较未转染组(P<0.01)和Ad.LacZ组(P<0.01)显著减少;(3)Ad.ASBTEB2组PDGF-BB表达较Ad.LacZ组和未转染组显著降低。结论:BTEB2反义基因转染显著抑制AngⅡ诱导的VSMC的迁移,这种抑制作用可能是通过减少促迁移因子的表达而实现的。
- 李德唐兵李刚杨永健
- 关键词：反义RNA腺病毒载体血管平滑肌细胞迁移
- 钙释放通道稳定蛋白基因转染对心力衰竭心室肌细胞收缩功能的影响
- 2008年
- 目的探讨钙释放通道稳定蛋白FKBP12.6基因转染对心力衰竭心室肌细胞收缩功能的影响。方法建立大鼠心力衰竭模型,采用酶解分离技术分离心室肌细胞,正常对照组用Ad-GFP感染正常心室肌细胞,Ad-FKBP12.6-GFP组用携带FKBP12.6基因的重组腺病毒Ad-FKBP12.6-GFP感染心力衰竭心室肌细胞,Ad-GFP组用Ad-GFP感染心力衰竭心室肌细胞。通过RT-PCR和Western blotting技术检测转基因的表达;在局部场刺激条件下,激光共聚焦线扫描检测心肌细胞内的钙瞬变,采用激光共聚焦面扫描测量心肌细胞舒张期末和收缩期末长度,以评价心肌细胞的收缩功能。结果Ad-FKBP12.6-GFP组的FKBP12.6 mRNA和蛋白表达水平(分别为2.48±0.08,0.94±0.11)显著高于正常对照组(分别为0.96±0.12,0.48±0.07,P<0.01)、Ad-GFP组(分别为0.47±0.08,0.25±0.04,P<0.01),且正常对照组显著高于Ad-GFP组;Ad-FKBP12.6-GFP组的钙瞬变幅度(F/F0峰值,3.16±0.42)显著高于正常对照组(2.14±0.41,P<0.05)、Ad-GFP组(1.43±0.38,P<0.01),且正常对照组显著高于Ad-GFP组(P<0.05);Ad-FKBP12.6-GFP组心室肌细胞收缩分数(9.36%±1.78%)显著高于正常对照组(8.17%±3.74%,P<0.05)、Ad-GFP组(5.24%±1.25%,P<0.01),且正常对照组显著高于Ad-GFP组(P<0.01)。结论FKBP12.6基因转染改善了心力衰竭大鼠心室肌细胞的收缩功能,上调FKBP12.6的表达可能是心力衰竭治疗的一条新途径。
- 李德伍卫方昶黄至斌
- 关键词：心肌收缩
- 基本转录元件结合蛋白2反义基因转染对血管平滑肌细胞表型转化的影响
- 2008年
- 目的:探讨基本转录元件结合蛋白2(BTEB2)反义RNA对血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响。方法:采用Ⅰ型胶原酶消化法培养大鼠VSMC;通过RT-PCR法检测血清诱导的VSMC表型标记基因(SMαA和SMemb)mRNA表达的变化;用反义BTEB2重组腺病毒转染VSMC后,采用RT-PCR法检测SMαA和SMemb的mRNA表达,用免疫细胞化学技术检测SMαA和SMemb蛋白表达。结果:血清剌激后,SMemb mRNA表达增加,而SMαA mRNA表达减少;BTEB2反义基因转染显著抑制血清诱导的SMemb mRNA和蛋白表达的增加以及SMαA表达的减少。结论:BTEB2反义RNA可显著抑制血清诱导的VSMC表型转化。
- 李德何国祥唐兵唐波
- 关键词：反义RNA血管平滑肌细胞表型转化
- 钙释放通道稳定蛋白过度表达对心力衰竭心室肌细胞肌浆网功能的影响被引量：7
- 2007年
- 目的:探讨钙释放通道稳定蛋白FKBP12.6过度表达对心力衰竭心室肌细胞肌浆网(SR)功能的影响。方法:用携带FKBP12.6基因的重组腺病毒Ad.FKBP12.6-GFP感染分离的心力衰竭心室肌细胞,通过RT-PCR和Western blotting技术检测转基因的表达;通过局部场刺激诱发胞内钙瞬变,SR钙容量则由咖啡因诱发的钙释放估测;以X-rhod-1-AM作为Ca2+指示剂,采用激光共聚焦线扫描检测细胞内Ca2+浓度的变化。结果:Ad-FKBP12.6-GFP组的FKBP12.6mRNA和蛋白表达水平分别比对照组升高5倍和4倍;Ad-FKBP12.6-GFP感染细胞的钙瞬变幅度(F/F0峰值,3.16±0.42vs1.43±0.38,P<0.01)和SR钙容量(F/F0峰值,4.15±0.54vs2.23±0.44,P<0.01)均显著高于Ad-GFP感染细胞。结论:采用基因转移技术上调FKBP12.6的表达可能是心力衰竭治疗的一条新途径。
- 李德伍卫骆宁周淑娴方昶
- 关键词：肌浆网基因转移
