国家自然科学基金(81360243)
- 作品数:6 被引量:28H指数:4
- 相关作者:杨海波谢恺庆甘丽英陈园园覃廖缓更多>>
- 相关机构:广西医科大学广西医科大学第一附属医院更多>>
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- 相关领域:医药卫生更多>>
- 自噬在可溶性尿酸诱导肾小管上皮细胞炎症反应中的作用被引量:7
- 2018年
- 目的:探讨自噬在可溶性尿酸(UA)诱导肾小管上皮细胞(HK-2细胞)炎症反应中的作用。方法:(1)分别用可溶性UA、自噬增强剂雷帕霉素(RAP)联合可溶性UA和自噬抑制剂氯喹(CQ)联合可溶性UA刺激HK-2细胞,透射电镜观察自噬体,western blotting法检测单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、自噬微管相关的轻链蛋白3(LC3-Ⅱ)和自噬相关调控基因蛋白Beclin1的表达;(2)用Akt抑制剂Perifosine与可溶性UA溶液共刺激HK-2细胞,western blotting法检测p-Akt和MCP-1的表达。结果:与对照组比较,可溶性UA可诱导HK-2细胞MCP-1、LC3-Ⅱ和Beclin1表达上调(均P<0.05),透射电镜观察到自噬体数量增加。与UA组比较,RAP与可溶性UA共刺激HK-2细胞后,自噬增强而MCP-1表达减弱(均P<0.05),CQ与可溶性UA作用HK-2细胞后,自噬抑制而MCP-1表达增加(均P<0.05)。与单纯UA刺激的HK-2细胞比较,p-Akt阻断剂Perifosine联合UA共刺激细胞后MCP-1表达减弱(P<0.05)。结论:自噬参与调控可溶性UA诱导的肾小管上皮细胞炎症反应。
- 陈园园易扬覃廖缓刘福岗谢恺庆杨海波
- 关键词:自噬肾小管上皮细胞炎症
- TLR4介导可溶性尿酸诱导的肾小管上皮细胞自噬流异常被引量:1
- 2020年
- 目的:探寻Toll样受体4(TLR4)与可溶性尿酸诱导肾小管上皮细胞HK-2自噬的关系。方法:用可溶性尿酸或/和氯喹(CQ)刺激HK-2细胞,采用Western blot检测LC3-Ⅱ和P62的表达水平,通过透射电子显微镜观察细胞内自噬小体及自噬溶酶体形成。在可溶性尿酸刺激HK-2细胞的基础上加上TLR4抑制剂TAK242后采用RT-qPCR检测TLR4的mRNA表达水平,Western blot检测TLR4、LC3-Ⅱ和P62的蛋白水平,并通过自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)标记观察细胞内自噬流的变化。结果:可溶性尿酸可诱导HK-2细胞LC3-Ⅱ和P62的表达上调,其与CQ共同处理后LC3-Ⅱ及P62的表达进一步增加,透射电子显微镜下观察到自噬小体增多,自噬溶酶体少见,提示自噬流受阻。Western blot结果显示,与正常对照组相比,可溶性尿酸组TLR4、LC3-Ⅱ和P62的蛋白水平增高,而TAK242则抑制可溶性尿酸诱导HK-2细胞的TLR4、LC3-Ⅱ和P62的表达水平。自噬双标腺病毒实验结果显示,可溶性尿酸组与对照组相比,自噬小体显著增多,且自噬溶酶体较少;而与可溶性尿酸组相比,TAK242+可溶性尿酸组自噬小体减少,自噬溶酶体相对增多,表明自噬小体与溶酶体融合现象增多,形成自噬溶酶体的进程更顺畅。结论:可溶性尿酸导致肾小管上皮细胞自噬流受阻;同时,可溶性尿酸可通过TLR4介导肾小管上皮细胞自噬流异常。
- 易扬陈缘蒋远霞杨海波谢恺庆
- 关键词:TOLL样受体4肾小管上皮细胞
- TLR4介导自噬流在脂多糖诱导肾小管上皮细胞炎症反应中的作用研究被引量:5
- 2020年
- 目的:探讨自噬流与脂多糖(LPS)诱导肾小管上皮细胞(HK-2细胞)炎症反应的关系,检测Toll样受体(TLR4)是否参与其中。方法:实验分为以下5组:阴性对照组、LPS(100μg/mL)组、LPS(100μg/mL)+雷帕霉素(RAP)(10μmol/L)组、LPS(100μg/mL)+氯喹(CQ)(10μmol/L)组、LPS(100μg/mL)+TAK242(TLR4拮抗剂)(2μmol/L)组,刺激HK-2细胞,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测白细胞介素-1β(IL-1β)、TLR4、选择性自噬接头蛋白(P62)和自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA表达和Western blotting检测IL-1β、TLR4、P62和LC3蛋白表达;采用自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)转染HK-2细胞检测自噬流,在共聚焦显微镜下观察自噬体与自噬溶酶体数量变化以判断自噬流表达情况。结果:与阴性对照组比较,LPS可诱导HK-2细胞IL-1β、TLR4和P62 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),LC3 mRNA和LC3-Ⅱ蛋白表达上调(P<0.05),共聚焦显微镜图示自噬体数明显增多、自噬溶酶体很少,表明自噬流受阻;与LPS组比较,LPS+RAP组IL-1β、TLR4 mRNA和蛋白表达下调(P<0.05),LC3 mRNA及LC3-Ⅱ蛋白表达上调(P<0.05),P62蛋白表达下调(P<0.05),共聚焦显微镜图示自噬溶酶体数量明显增多,表明自噬流得到改善;LPS+CQ组IL-1β、P62、TLR4 mRNA和蛋白表达上调(均P<0.05),共聚焦显微镜图示自噬体明显增多、基本无自噬溶酶体,表明自噬流受阻;LPS+TAK242组IL-1β、TLR4 mRNA和蛋白表达下调(P<0.05),LC3 mRNA及LC3-Ⅱ蛋白表达上调(P<0.05),P62蛋白表达下调(P<0.05),共聚焦显微镜图示自噬溶酶体数量明显增多,表明自噬流得到改善。结论:LPS诱导肾小管上皮细胞炎症反应,存在自噬流阻断;自噬流负调控LPS诱导肾小管上皮细胞炎症反应,TLR4参与其中。
- 陈缘易扬杨海波谢恺庆
- 关键词:肾小管上皮细胞脂多糖
- CD4^+CD28^-T淋巴细胞在结核性胸膜炎患者胸腔积液与外周血中的表达水平及其意义被引量:4
- 2017年
- 目的探讨结核性胸膜炎患者胸腔积液及外周血中CD4^+CD28^-T淋巴细胞的表达水平及其意义。方法收集2015年3月至2016年12月广西医科大学第一附属医院未经治疗的40例胸腔积液患者的胸腔积液及外周血标本,其中结核性胸膜炎患者20例,非结核性胸膜炎患者20例;另外选择同期广西医科大学第一附属医院体检中心健康体检人员18名作为正常对照组。40例胸腔积液患者通过胸腔穿刺采集胸腔积液,所有受试者通过真空采血法抽取外周血;用流式细胞术检测胸腔积液及外周血中CD4^+CD28^-T淋巴细胞百分含量。对结核性胸膜炎组、非结核性胸膜炎组胸腔积液中CD4^+CD28^-T淋巴细胞百分含量进行比较分析;对3组外周血中CD4^+CD28^-T淋巴细胞百分含量进行比较分析;同时对结核性胸膜炎组、非结核性胸膜炎组的胸腔积液和外周血的CD4^+CD28^-T淋巴细胞百分含量进行相关性分析。结果结核性胸膜炎组胸腔积液中CD4^+CD28^-T淋巴细胞百分含量[(14.69±4.06)%]明显高于非结核性胸膜炎组[(9.75±3.40)%],差异有统计学意义(t=4.19,P〈0.01)。3组外周血CD4^+CD28^-T淋巴细胞百分含量差异有统计学意义(F=3.78,P=0.029);其中结核性胸膜炎组外周血中CD4^+CD28^-T淋巴细胞百分含量[(5.26±2.92)%]分别高于非结核性胸膜炎组[(3.76±2.07)%]和正常对照组[(3.29±1.79)%],差异均有统计学意义(f=2.04,P=0.046;t=2.61,P=0.012)。结核性胸膜炎组中,胸腔积液和外周血的CD4^+CD28^-T淋巴细胞百分含量[(14.69±4.06)%、(5.26±2.92)%]呈正相关(r=0.54,P=0.013);非结核性胸膜炎组胸腔积液和外周血的CD4^+CD28^-T淋巴细胞百分含量[(9.75±3.40)%、(3.76±2.07)%]无相关性(r=0.03,P=0.424)。结论CD4^+CD28^-T淋巴细胞百分含量的变化
- 甘丽英樊晓晖杨海波
- 关键词:结核胸膜T淋巴细胞亚群胸腔积液免疫调节
- TLR4基因Asp299Gly位点和Thr399Ile位点多态性与肺结核及结核性胸膜炎遗传易感性的研究被引量:7
- 2016年
- 目的:探讨Toll样受体4(TLR4)基因Asp299Gly位点、Thr399Ile位点多态性与肺结核及结核性胸膜炎的遗传易感性。方法:采用错配聚合酶链反应—限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)及PCR-直接测序法在190例结核患者(其中结核性胸膜炎患者64例)和110例健康自愿者人群(对照组)中检测TLR4基因Asp299Gly位点和Thr399Ile位点的突变频率,并对实验结果进行统计分析。结果:在结核组、结核性胸膜炎组和对照组中均未发现TLR4基因Asp299Gly位点和Thr399Ile位点的突变。结论:TLR4基因Asp299Gly位点和Thr399Ile位点多态性与肺结核及结核性胸膜炎的遗传易感性无关。
- 杨海波甘丽英谢恺庆
- 关键词:TOLL样受体4肺结核结核性胸膜炎单核苷酸多态性
- TLR2和TLR4在牛型结核分枝杆菌诱导的肾小管上皮细胞损伤中的作用被引量:4
- 2014年
- 目的:探讨Toll样受体(TLR)2和TLR4在牛型结核分枝杆菌卡介苗(BCG)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤中的作用。方法:用BCG刺激HK-2细胞,通过荧光定量PCR和Western blotting方法分别检测TLR2、TLR4、转化生长因子β1(TGF-β1)和趋化因子CX3CL1的表达。将TLR2抗体和TLR4拮抗剂CLI-90分别与BCG共刺激HK-2细胞,通过荧光定量PCR和Western blotting方法分别检测TGF-β1和CX3CL1的表达水平。结果:BCG刺激HK-2细胞可诱导TLR2、TLR4、TGF-β1和CX3CL1表达上调,TLR2抗体和TLR4拮抗剂可部分抑制BCG引起的TGF-β1和CX3CL1表达上调。结论:BCG可通过激活TLR2和TLR4引起TGF-β1和CX3CL1表达上调,提示TLR2和TLR4介导的信号通路在结核分枝杆菌致肾小管上皮细胞损伤中发挥重要作用。
- 林洪升杨海波谢恺庆杨利周静文周马林黄企光
- 关键词:肾小管上皮细胞