重庆市科委基金(03-43-7)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 相关作者：刘金波郑宏庭李丙蓉郑丹邓华聪更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市科委基金教育部基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人脂联素、球状脂联蛋白基因克隆及真核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2007年
- 目的构建高效表达球状脂联蛋白的真核表达载体,为研究脂联素、球状脂联蛋白在2型糖尿病及动脉粥样硬化中的作用奠定基础。方法克隆人脂联素基因,构建球状脂联蛋白基因的真核表达载体,转染人脐静脉内皮细胞株(HUVEC),Western blot检测上清中球状脂联蛋白的表达。结果测序结果表明克隆的人脂联素基因序列正确;构建的球状脂联蛋白基因真核表达载体能有效转染HUVEC,并在上清中检测到该基因的表达。结论完成人脂联素基因克隆,成功构建了人球状脂联蛋白基因真核表达载体,并在HUVEC中获得分泌表达,为研究球状脂联蛋白对2型糖尿病的干预作用提供了可能。
- 李丙蓉郑丹邓华聪刘金波兰丽珍郑宏庭
- 关键词：脂联素基因克隆真核表达
- 人脂联素基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2006年
- 目的:克隆人脂联素基因(apM1),为进一步研究脂联素的功能提供实验基础。方法:应用RT-PCR法自人大网膜脂肪组织的总RNA中扩增出apM1cDNA全长基因,采用T-A克隆法重组到pGEM-TVectorSystem中,通过蓝白斑筛选出阳性克隆后,测序鉴定。结果:从脂肪组织总RNA中扩增得到735bpapM1基因,其cDNA序列与GenBank报导的人脂联素基因apM1同源性为99.7%(159位和558位碱基发生了无义突变),获得了质粒pGEM-T-apM1,测序鉴定正确。结论:成功的克隆了apM1基因全长cDNA。
- 李丙蓉郑丹邓华聪兰丽珍郑宏庭刘金波
- 关键词：脂联素基因逆转录聚合酶链反应
- 人脂联素重组腺病毒对内皮细胞增殖和一氧化氮合酶的影响被引量：8
- 2006年
- 目的探讨人脂联素重组腺病毒(Ad-apM1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖和总一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和结构型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响,为动脉粥样硬化的基因治疗奠定基础。方法将Ad-apM1感染HUVEC,观察细胞形态,绘制生长曲线,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HUVEC的增殖。双抗体夹心ELISA法检测培养上清中人脂联素的表达水平,比色法检测总NOS、iNOS、eNOS活力。结果重组腺病毒感染后的HUVEC和未受感染的HUVEC形态无明显改变,体外增殖能力也无显著差异。用感染复数(MOI)为50的人脂联素基因重组腺病毒感染HUVEC,24、48、72h后取上清检测脂联素浓度分别为(125±12)ng/ml、(160±14)ng/ml、(150±8)ng/ml。感染了Ad-apM1的HUVEC总NOS和eNOS的活力显著升高,而iNOS的活力显著降低。结论我们制备的重组腺病毒能有效感染HUVEC并分泌表达人脂联素,对HUVEC的形态和增殖无明显影响,可增强HUVEC总NOS和eNOS活性,抑制iNOS活性,为Ad-apM1用于干预动脉粥样硬化奠定基础。
- 李丙蓉郑丹邓华聪刘金波兰丽珍郑宏庭
- 关键词：一氧化氮合酶
- 人脂联素基因重组腺病毒的构建与鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的:构建含有人脂联素基因apM1的重组腺病毒载体,制备能表达人脂联素蛋白的重组腺病毒,为脂联素用于体内外干预动脉粥样硬化奠定基础。方法:自质粒pGEM-T-apM1上扩增两端带有SalⅠ和Hind Ⅲ酶切位点的全长apM1基因,将PCR产物和穿梭质粒pShuttle-CMV经SalⅠ和Hind Ⅲ双酶切后,连接、转化、筛选,进行PCR鉴定后送双向测序。将鉴定正确的重组质粒pShuttle-CMV-apM1用PmeⅠ酶切使其线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转BJ5183菌,进行细菌内同源重组,筛选、鉴定、扩增,PacⅠ酶切后用LipofectamineTM2000转染低代数的HEK293包装细胞,进行包装出毒。结果:重组穿梭质粒pShuttle-CMV-apM1经PCR和测序鉴定正确,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组成功,转染293细胞进行包装,产生的病毒经鉴定正确,并且无具有复制能力的腺病毒存在,生物安全性高。结论:成功的制备了apM1基因重组腺病毒,可进一步用于脂联素干预动脉粥样硬化的研究。
- 李丙蓉郑宏庭邓华聪郑丹刘金波兰丽珍程伟
- 关键词：腺病毒同源重组
