目的将表达CXCR4及增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)-CXCR4质粒转入肾癌细胞A498中,并建立稳定转染细胞株。方法针对CXCR4基因构建稳定表达CXCR4质粒,应用脂质体转染技术将稳定表达CXCR4及EGFP-CXCR4质粒转入肾癌A498细胞中,经过G418抗性筛选细胞株。通过共聚焦显微镜观察转染EGFP-CXCR4质粒的A498细胞的表达情况。通过共聚焦显微镜观察EGFP-CXCR4融合蛋白在A498经SDF-1刺激前后的变换。通过蛋白质印迹法检测转染后CXCR4蛋白表达水平的变化,应用MTT法检测转染后的A498细胞增殖能力水平,并通过Transwell实验观察稳定表达CXCR4的肾癌A498细胞株侵袭能力的改变。结果稳定表达CXCR4及EGFP-CXCR4的质粒构建后测序结果与CXCR4DNA序列完全吻合。质粒转入A498细胞后进行G418抗性筛选挑选出合适的细胞株。共聚焦显微镜观察发现,转染EGFP-CXCR4质粒的A498细胞中胞膜及胞质中均有绿色荧光表达,经SDF-1刺激后EGFP-CXCR4向细胞内转移。蛋白质印迹法发现稳定转染CXCR4质粒的A498细胞的CXCR4表达水平高于正常A498细胞。第3天以后,转染pcDNA-CXCR4及pEGFP-CXCR4质粒组的A498细胞增殖水平率高于正常A498细胞(P<0.01)。Transwell实验证实稳定表达CXCR4的肾癌A498细胞株侵袭能力与正常A498细胞株相比增强(P<0.01)。结论成功地构建了CXCR4稳定表达的肾癌A498细胞株,转染后A498细胞的增殖能力增强,侵袭能力增强,为后续实验奠定了基础。
