国家牧草产业技术体系建设项目(CARS-35-04)
- 作品数：7 被引量：151H指数：5
- 相关作者：杨青川康俊梅龙瑞才张铁军孙彦更多>>
- 相关机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所中国农业大学黑龙江省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家牧草产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项中国农业科学院北京畜牧兽医研究所基本科研业务费更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 盐碱胁迫条件下中苜3号紫花苜蓿高效共生根瘤菌筛选被引量：7
- 2018年
- 以10株中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)菌株为研究材料,对"中苜3号"紫花苜蓿(Medicago sativa L.cv.‘Zhongmu No.3’)进行接种试验,分别在不同浓度NaCl(3‰和4‰)单盐溶液和NaHCO3∶Na2CO3=9∶1(pH=8和pH=9)混合碱溶液处理下筛选苗期增重明显的高效根瘤菌菌株。结果表明:在盐和碱处理下,不同根瘤菌菌株对中苜3号接种效果差异明显,增重效果均好于对照处理。3‰和4‰盐处理下,菌株17676接种效果最好,地上部干重、根干重和地上部含氮量分别比对照提高了165.88%和584.81%、142.96%和351.33%、114.46%和119.55%;pH=8碱处理下,菌株17581接种效果最好,而pH=9碱处理下,菌株17675接种效果最好,地上部干重、根干重和地上部含氮量分别比对照提高了118.88%和191.76%、168.23%和188.34%、124.00%和128.74%。此外,在盐和碱处理下菌株17544和菌株17537也都表现出一定的增重效果。
- 张昆张昆康俊梅龙瑞才杨青川郭文山赵忠祥徐玉鹏闫旭东
- 关键词：根瘤菌
- 蒺藜苜蓿MtbHLH148转录因子的克隆与转化及其功能分析被引量：5
- 2019年
- bHLH(Basic helix-loop-helix,bHLH)转录因子家族是植物最大的转录因子家族之一,广泛参与植物生长发育和盐胁迫应答机制。该研究利用同源克隆的方法克隆蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)的MtbHLH148基因,采用qRT-PCR方法分析MtbHLH148基因在蒺藜苜蓿中的表达特性,构建超表达载体并通过农杆菌侵染法转化拟南芥(Arabidopsis thaliana),对转基因拟南芥的耐盐性相关功能进行分析研究。结果显示:(1)从蒺藜苜蓿中获得MtbHLH 148基因,该基因cDNA全长1 343 bp,包含开放阅读框为603 bp,编码201个氨基酸,蛋白分子量22.7 kD,等电点为11.76;蛋白结构分析显示,该蛋白无跨膜结构域,无信号肽,为亲水性蛋白;含有精氨酸/赖氨酸残基的保守结构域和典型的bHLH结构域;二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。(2)亚细胞定位表明,MtbHLH148蛋白定位在细胞核。(3)进化树分析表明,MtbHLH148与大豆(Glycine max)的亲缘性最近;启动子分析发现,该基因启动子区域含有光响应元件、MYB结合位点以及ABA应答元件ABRE,可能参与非生物胁迫。(4)qRT-PCR分析发现,MtbHLH 148基因在蒺藜苜蓿的茎中表达量最高,叶中表达量最低,且MtbHLH 148基因受ABA(100μmol/L)诱导并在盐胁迫(200 mmol/L NaCl)处理8 h内表达量上调,而在低温(4℃)处理时表达量明显下调。(5)成功构建超表达载体pCAMBIA3301-MtbHLH 148并转化拟南芥获得16个抗性株系,经鉴定有12个过表达株系,其中表达量最高的转基因株系为OE8;对OE8株系耐盐性功能分析发现,转基因拟南芥植株的发芽率明显高于野生型,盐胁迫下转基因拟南芥的根长是野生型的1.5倍,表明其耐盐性得到了增强。研究表明,MtbHLH 148基因可能在盐胁迫调节机制中具有一定的调控作用。
- 王菊萍王珍张铁军龙瑞才杨青川康俊梅
- 关键词：蒺藜苜蓿转录因子盐胁迫
- 蒺藜苜蓿MtCYP450基因的克隆及功能分析被引量：5
- 2018年
- 分析了豆科模式植物蒺藜苜蓿中MtCYP450的表达特性和对胁迫处理的反应。该基因编码508个氨基酸,蛋白分子量为58.31kDa,等电点为6.85。序列比对发现MtCYP450与狭叶羽扇豆和大豆中的2个CYP450家族94亚家族蛋白同源性较高,因此,MtCYP450属于细胞色素P450的CYP94亚家族。荧光定量PCR结果显示MtCYP450在叶中表达最高,茎中次之,根中最少。在胁迫处理(200mM NaCl、5%PEG、100μM ABA和100μM MeJA)8~12h后,叶片中MtCYP450基因表达量显著上升,表明该基因受逆境和生长调节剂诱导表达。T2代超表达MtCYP450基因拟南芥在PEG和MeJA处理后MtCYP450表达量均上升;对异源超表达拟南芥的生长情况分析显示转基因拟南芥在NaCl(125mM)处理后根长是野生型的1.63倍,表明MtCYP450基因增强了拟南芥根系的抗盐性。因此,MtCYP450基因可能对植物抵抗非生物胁迫具有重要作用。
- 崔会婷王珍张铁军蒋旭龙瑞才杨青川康俊梅
- 关键词：蒺藜苜蓿细胞色素P450非生物胁迫实时定量PCR
- 紫花苜蓿粗灰分与矿质元素含量QTL定位分析被引量：2
- 2022年
- 为初步鉴定与紫花苜蓿(Medicago sativa)粗灰分、钾、钙、镁、磷含量调控相关的数量性状基因座(Quantitative trait loci,QTL)和分子标记,本研究用低产早熟苜蓿和高产晚熟苜蓿杂交,构建了由392个个体组成的F_(1)群体,对这些性状进行3年表型数据测定,且基于前期已构建的高密度遗传连锁图谱开展QTL定位。结果表明:共检测到63个与粗灰分和4种矿质元素含量相关的QTL,分布于22个染色体上,单个QTL的贡献率为2.50%~29.85%;其中重复定位的QTL共8个(qCa-3C-1和qCa-3C-2,qCa-6B-1和qCa-6B-2,qCa-6D-1和qCa-6D-2,qAsh-8B-1和qAsh-8B-2),共定位的QTL有6个(qP-2C和qK-2C,qP-3A和qMg-3A,qP-6D-3和qMg-6D-2);经进一步验证,与这些QTL紧密连锁的标记可用于分子标记辅助选择育种。本研究为选育矿质营养更丰富的苜蓿新品种奠定了基础。
- 杨习江杨昌福蒋学乾张帆何飞杨青川康俊梅
- 关键词：紫花苜蓿矿质元素QTL定位
- 苜蓿种质资源的分布、育种与利用被引量：108
- 2016年
- 苜蓿作为最重要的豆科牧草,是世界上种植面积最大,分布最广的牧草之一.由于其产草量高、营养丰富,且具有根瘤固氮等优点,被誉为"牧草之王".在我国,苜蓿不仅栽培历史悠久,经济价值高,而且种质资源丰富,据记载苜蓿属内植物种有46个.然而,我国苜蓿育种工作开展较晚,建国以后才有较快的发展.截至2015年,我国苜蓿登记品种共有80个.苜蓿不仅是重要的高蛋白饲草,同时又是水土保持植物,因此具有重要的经济功能与生态功能.发掘优异苜蓿种质资源,培养优良苜蓿品种不仅可以增加优质饲草产量,促进奶业等草食畜牧业健康发展,而且苜蓿根瘤肥田,对于农业可持续发展也具有重要意义.本文针对我国苜蓿种质资源育种及利用现状,重点综述了国内苜蓿种质资源的分布、类型、遗传育种及综合利用情况,以期为今后苜蓿相关研究提供参考.
- 杨青川康俊梅张铁军刘凤歧龙瑞才孙彦
- 关键词：苜蓿种质资源育种
- 四倍体紫花苜蓿遗传图谱的初步构建被引量：6
- 2015年
- 分别以早熟低产和晚熟高产苜蓿单株为父母本,通过人工杂交构建了四倍体紫花苜蓿(Medicago Sativa)F1遗传作图群体,采用单因子变量分析法,以降落式PCR和常规PCR结合的反应程序,建立了适宜于紫花苜蓿的分子标记扩增体系;应用130对SSR引物进行筛选,获得60对引物在父母本间存在多态性而被用于绘制遗传连锁图。采用PAGE电泳分析,对作图群体进行基因型分析。通过TetraploidMap软件对60个SSR标记进行连锁作图分析,有44个标记可以定位在8个连锁群上,占总标记数的33.8%,覆盖遗传距离979cM,两标记间平均图距为22.25cM,初步构建了四倍体紫花苜蓿遗传图谱的框架图,还需要进一步添加标记数量增大其饱和度,为重要性状的QTL定位奠定基础。
- 王梦颖张铁军龙瑞才刘凤岐杨青川康俊梅
- 关键词：紫花苜蓿SEQUENCE
- 紫花苜蓿盐诱导HD-Zip类转录因子MsHB2的克隆及功能分析被引量：19
- 2014年
- 【目的】在已有的一条紫花苜蓿(Medicago sativa L.cv.Zhongmu-1)盐诱导未知基因的EST序列基础上,克隆其(MsHB2)全长序列并分析其功能,以进一步了解其在紫花苜蓿中的耐盐调控机理。【方法】以先前获得的EST序列为基础设计引物,使用RACE法从紫花苜蓿中克隆得到MsHB2的3′和5′末端序列,经DNAMAN软件拼接后得到其全长序列。使用多种生物信息学软件对MsHB2的开放阅读框,编码蛋白等电点、分子量、疏水性、亚细胞定位、进化关系等进行预测分析。构建MsHB2的亚细胞定位瞬时表达载体,使用基因枪转化法将MsHB2与GFP在洋葱表皮细胞中融合瞬时表达并观察其亚细胞定位荧光信号。将生长30 d的中苜一号分别进行300 mmol·L-1NaCl和0.1 mmol·L-1 ABA胁迫处理,取胁迫处理0、2、4、10、24 h后的根和茎叶组织提取总RNA并进行荧光定量PCR分析。构建了MsHB2的植物超表达载体,转化农杆菌GV3101菌株,使用农杆菌花序侵染法转化拟南芥并在盐胁迫条件下对转基因株系进行相关表型分析。【结果】将RACE法克隆得到MsHB2的3′和5′末端序列拼接后得到1 126 bp的全长序列,序列分析表明,其编码蛋白包含247个氨基酸,具有一个同源异型结构域和一个亮氨酸拉链结构域,与拟南芥HD-Zip第I类转录因子ATHB12具有较高相似性。进化树聚类分析表明MsHB2属于第Ⅰ类同源异型域亮氨酸拉链蛋白。洋葱亚细胞定位分析表明MsHB2定位于细胞核。转录水平表达分析表明MsHB2受300mmol·L-1 NaCl和0.1 mmol·L-1 ABA胁迫诱导而表达量显著升高。转基因研究表明在NaCl和ABA胁迫下,过量表达MsHB2的转基因拟南芥表现比野生型拟南芥更敏感。【结论】从紫花苜蓿中克隆得到一个定位于细胞核的同源异型域亮氨酸拉链蛋白基因MsHB2,其在紫花苜蓿中受NaCl和ABA胁迫诱导,并在NaCl和ABA胁迫条件下抑制转基因拟南芥的生长。推测MsHB2可能通过A
- 李明娜龙瑞才杨青川沈益新康俊梅张铁军
- 关键词：紫花苜蓿亮氨酸拉链亚细胞定位功能分析转录因子
