国家高技术研究发展计划(2006AA10Z447)
- 作品数：8 被引量：48H指数：4
- 相关作者：雷红涛孙远明王弘沈玉栋刘凤权更多>>
- 相关机构：华南农业大学南京农业大学南京大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程理学环境科学与工程更多>>
- 沙丁胺醇时间分辨荧光免疫分析检测技术的研究被引量：8
- 2009年
- 采用包被二抗间接竞争法,以抗SAL二抗体包被96微孔板作为固相二抗,与游离SAL间接竞争限量的以Eu3+标记的SAL-OVA抗原,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测沙丁胺醇(SAL),以利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速、高灵敏度的沙丁胺醇(SAL)全自动检测方法。结果表明该法的灵敏度为0.04ng/mL,批内和批间变异系数分别为2.2%和8.7%,平均回收率为106.5%,与盐酸克伦、莱克多巴胺的交叉反应率分别为0.93%和0.73%。由此可见,用TRFIA法检测SAL,灵敏度高、特异性强、稳定性好,具有良好的应用前景。
- 何明祥
- 关键词：沙丁胺醇时间分辨荧光免疫分析
- 硫代磷酸二乙酯类农药半抗原设计及抗体识别特性被引量：16
- 2009年
- 通过分析硫代磷酸二乙酯类农药的结构特点,设计并合成了系列半抗原;采用活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了系列免疫原和包被原;通过免疫新西兰大白兔获得了相应抗硫代磷酸二乙酯类农药的类特异性抗体.建立检测硫代磷酸二乙酯类农药的间接竞争酶联免疫分析(ELISA)方法,分析探讨了免疫半抗原结构对抗体特性的影响,并阐述了包被半抗原结构对ELISA灵敏度的影响规律.结果表明,手臂取代位置在苯环对位且手臂较短的免疫原具有较好的免疫效果,同时异源包被可以显著提高ELISA方法的灵敏度.由抗体PAb-H1和包被原H6-OVA建立的间接竞争ELISA方法可以同时检测7个广泛使用的有机磷农药,其半抑制浓度(IC50)分别为蝇毒磷(0.013 mg/L)、对硫磷(0.348 mg/L)、喹硫磷(0.022 mg/L)、三唑磷(0.035 mg/L)、甲拌磷(0.751 mg/L)、除线磷(0.850 mg/L)及辛硫磷(1.301mg/L),最低检测限符合国内外相关有机磷药物最大允许残留限量标准(MRLS)的检测要求.
- 谢桂勉孙远明徐振林李永祥雷红涛王弘沈玉栋
- 关键词：有机磷农药酶联免疫分析
- Lipocalin文库的构建及与克百威有结合活性的小分子筛选被引量：2
- 2008年
- 构建大菜粉蝶Lipocalin蛋白家族中的BBP蛋白突变文库,依据基因序列,分别设计10条和12条引物,通过PCR重叠延伸法得到包含随机突变蛋白BBP的基因序列,并重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中构建Lipocalin突变文库,库容达到4.0×109.以偶联分子BSA-克百威和OVA-克百威为靶分子,采用柱式和平皿式交叉法对Lipocalin文库进行了筛选,用竞争洗脱法洗脱特异结合活性的噬菌体.经过3轮筛选,从第3轮的洗脱液中随机挑选了10个重组克隆,用Dot-blotting法检测出K7anticalin分子能与克百威特异结合.为研发克百威的Anticalin类检测试剂盒提供了候选分子,也为拓宽Lipocalin文库在有害小分子检测方面的应用奠定了基础.
- 武婕杨金易张宏斌潘科王弘雷红涛郑霖肖治理孙远明
- 关键词：克百威
- 分子模拟技术在小分子免疫检测方法研究中的应用
- 常用的分子模拟方法有:量子力学法、分子力学法、蒙特卡洛法和分子动力学法。本文重点阐述了分子模拟技术在小分子免疫检测方法研究中的应用,即分子模拟技术能够更好地研究抗原抗体反应中的分子间作用力,促进抗原抗体反应识别机制研究的...
- 王伟华雷红涛孙远明
- 关键词：分子模拟
- 文献传递
- 荧光偏振免疫分析技术研究进展被引量：8
- 2008年
- 荧光偏振免疫分析技术是一种均相荧光免疫分析法,具有快速、灵敏和环保等优点。本文对这一技术的研究进展作了评述,介绍了荧光偏振免疫分析技术的基本原理、优越性、示踪物结构设计、制备、及其应用。
- 薛钢雷红涛吴青孙远明徐小燕
- 关键词：荧光偏振免疫分析均相
- 复合免疫制备3种有机磷农药单克隆抗体的技术研究被引量：10
- 2009年
- 以α-氨基丁酸和农药中间体为原料合成了甲基对硫磷、杀螟硫磷和甲基毒死蜱3种有机磷农药人工半抗原(H1、H2和H3);通过活泼酯法将H1、H2和H3分别交联于牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上制备免疫原和包被原。以等体积混合的H1-BSA、H2-BSA和H3-BSA复合免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备单克隆抗体获4株抗上述复合抗原的单克隆抗体,其中甲基对硫磷1株(H9/A3),杀螟硫磷2株(H9/B3、C8/H6),甲基毒死蜱1株(G7/F5)。所获4株抗体的类型及亚类均为IgG1,轻链均为κ链,间接ELISA法测定腹水效价均高达1×106。间接竞争ELISA法测定H9/A3、C8/H6和G7/F5细胞株的抑制中浓度(I50)分别为107.0、40.4和75.2μg.L-1,且与类似物无交叉反应。本研究建立了一种可在较短的研制周期内,通过单次细胞融合获得多种不同农药的单克隆抗体的有效方法。
- 吴芸茹王利民娄旸刘扬胡白石刘凤权
- 关键词：甲基对硫磷杀螟硫磷半抗原单克隆抗体ELISA
- 分子模拟技术在小分子免疫检测方法研究中的应用被引量：4
- 2010年
- 量子力学法、分子力学法、蒙特卡洛法和分子动力学法是4种常用的分子模拟技术。本文重点综述了分子模拟技术在小分子免疫检测方法研究中的应用,分子模拟技术能够更好地研究抗原抗体反应中的分子间作用力,促进抗原抗体反应识别机制研究的深入进行,能够解释抗体的交叉反应率,从而能应用于提高抗体宽谱性提高的研究。
- 王伟华雷红涛孙远明
- 关键词：分子模拟
- 丁草胺荧光偏振免疫分析——示踪物的合成与鉴定被引量：1
- 2008年
- 【目的】为建立除草剂丁草胺的荧光偏振免疫检测方法,对关键试剂示踪物进行合成与鉴定。【方法】以异硫氰酸荧光素、乙二胺和己二胺为原料,合成了异硫氰酸荧光素乙二胺(EDF)和异硫氰酸荧光素己二胺(HDF)两种中间体,薄层层析法分离出目标产物,电喷雾电离质谱法鉴定;然后将5-氨基荧光素(AF)、EDF、HDF分别与丁草胺半抗原(BMPA)连接,得到3种不同间隔臂的示踪物(BMPA-AF,BMPA-EDF和BMPA-HDF),利用抗血清稀释曲线测定抗血清效价,竞争抑制曲线测定不同示踪物检测灵敏度。【结果】3种示踪物合成成功,抗血清稀释曲线和竞争抑制曲线显示3种示踪物的抗血清效价分别为1/600、1/1500和1/600,半抑制浓度分别为1292、433和298ng·ml-1。【结论】合成出3种不同间隔臂的丁草胺示踪物,对示踪物的性质进行初步研究,为下一步建立丁草胺荧光偏振免疫分析方法奠定了基础。
- 薛钢雷红涛沈玉栋刘细霞吴青孙远明王弘
- 关键词：丁草胺荧光偏振免疫分析
- 抗吡虫啉单克隆抗体的制备及鉴定被引量：4
- 2011年
- 为制备灵敏度高,特异性强的抗吡虫啉单克隆抗体,建立经济、快速、准确的吡虫啉残留免疫学分析方法,采用分子模拟技术分析吡虫啉及其类似农药的电荷分布后,选择1-[6-(2-羧乙硫基-3-吡啶)甲基]-N-硝基-2-咪唑啉亚胺(H1)作为免疫半抗原,1-(6-氯-3-吡啶甲基)-3-羧丙基-N-硝基-2-咪唑啉亚胺(H2)作为包被半抗原,利用NHS酯法将H1和H2分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原与包被原。免疫BALB/c小鼠后,采用常规杂交瘤技术共获得2株稳定分泌抗吡虫啉单克隆抗体的细胞株2F11/A9和2G6/G12,其分泌的抗体类型分别为IgG3和IgG1,两细胞株的腹水抗体效价均达到了1∶128 000,IC50分别为5.3 ng/mL和28.3 ng/mL,检测限分别为1.1 ng/mL和7.7 ng/mL,两种抗体与6种吡虫啉的结构类似物均无明显的交叉反应。抗吡虫啉单抗的制备为吡虫啉残留免疫学检测方法的建立及免疫检测产品的研发奠定了基础。
- 李刚纪宪勇钱国良华修德秦娜王杰刘凤权
- 关键词：吡虫啉分子模拟单克隆抗体酶联免疫吸附法
