辽宁省自然科学基金(201202283)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：阮强吉耀华唐宏苏力李书琴更多>>
- 相关机构：中国医科大学沈阳市食品药品监督管理局更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 尿标本池检测法筛选新生儿先天性人巨细胞病毒感染被引量：3
- 2013年
- 目的探讨敏感性强、特异性好、简便易行并能降低试剂和人力成本的适于大规模人巨细胞病毒(HCMV)感染筛查的方法。方法收集日龄<14 d的住院新生儿尿标本200例,每例标本分成2份,1份标本采用临床常规实时荧光定量PCR法(RT-QPCR)检测HCMV-DNA,1份尿标本进行尿池预混和三级筛检,即采用相同的操作方法、仪器和试剂进行20份/池的筛检,阳性池再进一步分为5份/池进行筛检,再阳性者进行单个标本检测。结果采用的RT-QPCR的最低检出量为10 copies/mL。在200例新生病儿尿标本中,分别用标准法和尿池法检测,均有4例相同的标本为HCMV-DNA阳性。多份样本混合在同一检测池中未发现抑制物质对检测的影响。尿池法检测患者标本节约近80%的试剂成本。结论尿池法除具有标准RT-QPCR法的优点外,极大地降低了试剂和人力成本,适合于大规模新生儿HCMV先天性感染的筛查。
- 吉耀华羿永东李书琴苏力唐宏阮强
- 关键词：人巨细胞病毒先天性感染实时荧光定量PCR
- 人巨细胞病毒UL55编码蛋白结合蛋白的筛选与鉴定被引量：1
- 2016年
- 从人胎脑c DNA文库中筛选和鉴定出与人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)UL55编码蛋白结合的蛋白。将UL55基因编码区克隆到诱饵载体p GBKT7中,在证实UL55蛋白不具有自激活作用的前提下,采用Match-maker GAL酵母双杂交系统筛选人胎脑c DNA文库中与UL55蛋白结合的宿主蛋白,用酵母双杂交回转实验验证UL55蛋白与获得的蛋白结合的可靠性。将酵母双杂交筛选出的文库蛋白烯醇化酶1(enolase1,ENO 1)构建到p GEX-4T-2载体上,利用GST pull-down技术体外验证ENO 1与HCMV UL55蛋白的结合。并依据所筛选出蛋白的生物学功能分析UL55蛋白可能的生物学功能。结果显示有10种蛋白与HCMV UL55编码蛋白结合。应用GST pull-down技术检测到ENO 1与HCMV UL55相互结合的蛋白条带。成功地筛选出10种与UL55蛋白相互结合的宿主蛋白,GST pull-down实验进一步表明ENO 1可以与HCMV UL55蛋白直接结合,为进一步研究UL55蛋白的功能提供了新的线索。
- 吉耀华刘畅齐莹马艳萍黄郁静柳中洋阮强
- 关键词：人巨细胞病毒DNA文库ENO
