河南省高等学校青年骨干教师资助计划项目(2010GGJS-045)
- 作品数：3 被引量：16H指数：2
- 相关作者：陈陆赵军杨霞王川庆李志娟更多>>
- 相关机构：河南农业大学郑州幼儿师范高等专科学校更多>>
- 发文基金：河南省高等学校青年骨干教师资助计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型方法的研究与应用被引量：8
- 2011年
- 利用常规PCR扩增出猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2保守区域276 bp片段,将其克隆到pMD-18载体,以pMD-18T-276质粒DNA作为标准质粒模板优化反应条件,建立定量检测PCV2的荧光定量PCR方法。结果表明:Ct值与标准品模板在5.60×101～2.74×109拷贝.μL-1范围内呈良好的线性关系,相关系数为-1.00,斜率为-3.345。所建立的方法与猪1型圆环病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖障碍与呼吸系统综合征病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒均无交叉反应。应用该方法对PCV2感染细胞后的复制情况进行了研究,结果显示在感染细胞96 h时,PCV2复制达到最高点。此外,利用建立的方法对保存的11个分离株在PK15细胞上繁殖特性进行了研究,筛选到4株高滴度毒株,丰富了圆环病毒疫苗株的研究资源。
- 李志娟王永生陈陆杨霞赵军王川庆
- 关键词：猪圆环病毒2型荧光定量PCR病毒滴度
- 猪圆环病毒2型灭活疫苗种毒株的筛选被引量：2
- 2013年
- 为筛选满足猪圆环病毒2型灭活疫苗制苗要求的毒株,选择河南省8个地区的8株猪圆环病毒2型分离株进行抗原性分析,将各分离株培养后用不同滴度的病毒原液和其分别稀释至同一滴度(4.233×104拷贝/μL)的病毒液分别制成油佐剂灭活疫苗,免疫小鼠后采血测定其抗体动态水平,以进行免疫效力评价。结果显示,8株圆环病毒2型分离株中8#和12#分离株原液制备的疫苗免疫后诱导产生的抗体水平较高,二免后1周抗体水平即高于1∶800,达到猪圆环病毒2型灭活疫苗的国家质量标准要求,3周时达到高峰,比对照商品疫苗诱导产生的抗体水平更高;其分别稀释130倍和463倍后制备的疫苗诱导产生的抗体水平在二免后3周也能达到1∶800。提示,猪圆环病毒2型8#和12#分离株毒价高,免疫效力良好,是理想的疫苗候选株。本研究丰富了猪圆环病毒2型灭活疫苗毒株的种毒资源,为研制高质量的猪圆环病毒2型疫苗奠定了基础。
- 高金良杨霞陈陆李伟豪常洪涛赵军王新卫刘红英姚惠霞王川庆
- 关键词：猪圆环病毒2型灭活疫苗
- 猪流行性腹泻病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：6
- 2014年
- 为建立一种快速、敏感的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)检测方法,试验据GenBank中PEDV基因组序列,设计并合成针对M基因的内、外2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了检测PEDV的巢式RT-PCR方法。结果显示,单一使用外引物或内引物进行常规RT-PCR时检测限量均为50pg PEDV RNA模板,而使用巢式RT-PCR可检测到50fg PEDV RNA模板。使用该方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒的扩增结果均为阴性。结果表明,建立的巢式RT-PCR方法特异性、敏感性好,可快速准确地检测出样本中微量PEDV核酸。
- 邓祖丽颖陈陆
- 关键词：猪流行性腹泻病毒巢式RT-PCRM基因
