国家自然科学基金(81270296)
- 作品数：17 被引量：77H指数：6
- 相关作者：廖新学陈景福郑东诞冯鉴强庄晓东更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院广东医学院附属医院中山大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目番禺区科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- ATP敏感性钾通道-Akt通路在硫化氢对抗高糖损伤H9c2心肌细胞中的作用被引量：2
- 2016年
- 目的研究ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive K+channel,KATP通道)-Akt通路在外源性硫化氢(hydrogen sulfide,H_2S)对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤中的作用。方法应用Western blot法检测心肌细胞Akt蛋白的表达水平;细胞计数盒测定心肌细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相测定凋亡细胞数量的变化;双氯荧光素染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;JC-1染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)。结果应用高糖(35 mmol·L^(-1),HG)处理H9c2心肌细胞0~24 h,其中3 h起磷酸化(p)-Akt蛋白表达水平开始明显下降,24 h p-Akt表达水平降至最低。在HG处理心肌细胞24 h前,应用50μmol·L^(-1)KATP通道开放剂吡拉地尔(pinacidil,Pin)和400μmol·L^(-1)硫氢化钠(NaHS,为H_2S的供体)预处理30 min均能明显地抑制HG对p-Akt表达的下调作用。应用1mmol·L^(-1)K_(ATP)通道阻断剂格列本脲(glibenclamide,Gli)预处理心肌细胞能阻断NaHS对HG下调p-Akt表达水平的抑制作用。此外,30μmol·L^(-1)Akt的抑制剂LY294002能明显阻断NaHS对抗HG损伤心肌细胞的保护作用,表现为细胞存活率和MMP降低,凋亡细胞数量、ROS生成增多。结论 K_(ATP)通道-Akt通路介导H_2S对抗高糖引起的心肌细胞损伤的保护作用。
- 梁伟杰陈景福何洁仪宋明才余盛龙张稳柱郑东诞廖新学
- 关键词：ATP敏感性钾通道AKT通路硫化氢高血糖心肌细胞
- p38丝裂原活化蛋白激酶在糖尿病心肌病发病过程中的作用被引量：4
- 2013年
- 糖尿病心肌病（diabetic cardiomyopathy，DCM）是糖尿病患者的一种独立心脏并发症（不依赖心肌缺血和高血压病），临床表现为心脏舒张和（或）收缩功能障碍，可诱发心力衰竭、心律失常、心源性休克和猝死等。其特征为心脏舒张障碍先于收缩障碍，伴有心肌形态学和生物化学指标异常[1]。
- 庄晓东廖新学
- 关键词：糖尿病心肌病
- 依达拉奉保护H9 c2心肌细胞对抗阿霉素的心肌毒性作用被引量：1
- 2014年
- 目的探讨新型的自由清除剂依达拉奉(edaravone,EDA)能否保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素(doxorubicin,DOX)引起的损伤。方法应用DOX(5μmol·L-1)处理H9c2心肌细胞建立DOX心肌毒性损伤模型。CCK-8比色法测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色法观察细胞凋亡的形态学和数量改变;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照像检测细胞活性氧(ROS)水平;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照像测定线粒体膜电位(MMP);Western blot法测定caspase-3蛋白的表达水平。结果应用20、40、80μmol·L-1EDA分别预处理H9c2心肌细胞60 min,可明显地抑制5μmol·L-1DOX引起的细胞毒性,使细胞存活率升高,其中40μmol·L-1EDA的保护作用最大;应用40μmol·L-1EDA分别预处理心肌细胞30、60、90、120 min,可明显地抑制DOX引起的细胞毒性,其中预处理60 min的保护作用最大;此外,在5μmol·L-1DOX处理H9c2心肌24 h前,应用40μmol·L-1EDA预处理60 min可明显抑制DOX引起的心肌损伤作用,表现为抑制DOX引起的细胞内ROS生成增多及抑制DOX的致细胞凋亡作用(使凋亡细胞数目减少和cleaved caspase-3表达下调)和MMP的损伤作用。结论EDA能保护H9c2心肌细胞对抗DOX诱导的心肌毒性,此保护作用可能与其抑制ROS生成及减轻DOX对MMP的损伤有关。
- 刘广交郭润民徐文明沈宁冯鉴强廖新学
- 关键词：依达拉奉阿霉素心肌毒性线粒体膜电位
- 血管紧张素-(1-7)通过抑制活性氧激活的环氧合酶-2通路保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤被引量：2
- 2015年
- 目的探讨活性氧(ROS)激活的环氧合酶-2(COX-2)通路在高糖(HG)损伤H9c2心肌细胞中的作用及血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]能否通过调控ROS激活的COX-2通路抑制HG引起的心肌细胞损伤。方法应用Western blot法检测COX-2蛋白的表达;细胞计数盒(CCK-8)测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色检测凋亡细胞的形态及数量的变化;DCFH-DA染色荧光显微镜测定细胞内ROS水平;JC-1染色荧光显微镜照相测定线粒体膜电位(MMP)。结果应用1000μmol/L ROS清除剂(N-乙酰半胱氨酸,NAC)或1μmol/L Ang-(1-7)共处理H9c2心肌细胞12 h能显著地抑制HG对COX-2表达的上调作用;35 mmol/L葡萄糖(HG)处理心肌细胞24 h引起明显的损伤作用,使细胞存活率和MMP降低,凋亡细胞数量及细胞内ROS生成增多;Ang-(1-7)或COX-2抑制剂(NS-398)共处理心肌细胞明显地抑制上述HG引起的损伤作用。结论 Ang-(1-7)通过抑制ROS激活COX-2通路保护心肌细胞对抗HG引起的损伤。
- 谭其平陈景福梁鉴文梁伟杰宋明才郑东诞廖新学
- 关键词：活性氧环氧合酶-2H9C2心肌细胞高糖
- 依达拉奉通过调控p38MAPK通路抑制阿霉素的心肌毒性被引量：2
- 2013年
- 目的探讨新型抗氧化剂依达拉奉(edaravone,EDA)能否通过调控p38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素(doxorubicin,DOX)引起的损伤。方法应用5μmol/L DOX处理H9c2心肌24 h以建立心肌毒性损伤模型。CCK-8比色法检测细胞存活率;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照像测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROX)水平;罗丹明123(rh123)染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);Western blot法测定p38MAPK蛋白表达水平。结果在15~60 min的时间范围内,5μmol/L DOX呈时间依赖性地上调磷酸化(phosphorylated,P)p38MAPK表达。在DOX处理心肌细胞前,应用40μmol/L EDA预处理60 min不仅能抑制DOX对p-p38MAPK表达的上调作用,也能抑制DOX引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率升高、胞内ROS生成减少及MMP丢失减少。另方面,应用了3μmol/L SB203580(p38MAPK抑制剂)预处理60 min也产生类似于上述的EDA对抗DOX心肌毒性的作用。结论 EDA可通过抑制p38MAPK通路保护H9c2心肌细胞对抗DOX引起的损伤。
- 刘广交郭润民徐文明陈景福冯鉴强廖新学
- 关键词：依达拉奉P38丝裂原激活蛋白激酶阿霉素活性氧心肌毒性
- ATP敏感性钾通道的开放通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症被引量：5
- 2016年
- 目的:探讨开放ATP敏感性钾通道(K_(ATP)通道)能否抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法:应用Western blot测定TLR4和NF-κB p65的蛋白水平;应用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定心肌细胞存活率;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(MMP);双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内活性氧簇(ROS)水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法检测凋亡细胞数量。结果:H9c2心肌细胞经HG(35 mmol/L葡萄糖)处理24 h,胞内TLR4和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)的蛋白水平明显增加,100μmol/L K_(ATP)通道开放剂二氮嗪(DZ)预处理30 min可抑制HG对TLR4和p-NF-κB p65蛋白水平的上调作用;此外,30μmol/L TAK-242(TLR4抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h也可减轻HG对p-NF-κB p65的上调作用。另一方面,100μmol/L DZ预处理有明确的心肌保护作用,可抑制HG引起的细胞毒性、炎症反应、线粒体损伤、氧化应激和细胞凋亡,使细胞存活率升高,并减少IL-1β和TNF-α分泌水平、MMP丢失、ROS生成及凋亡细胞数量;而30μmol/L TAK-242或100μmol/L PDTC(NF-κB抑制剂)共处理心肌细胞24 h也可发挥和DZ相类似的作用,能抑制HG引起的上述损伤和炎症反应。结论:开放K_(ATP)通道可通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗HG引起的H9c2肌细胞损伤和炎症。
- 梁伟杰陈美姬何洁仪黄惠敏余盛龙陈君陈景福宋明才廖新学
- 关键词：ATP敏感性钾通道高糖心肌细胞炎症
- 尼可地尔对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症反应被引量：6
- 2016年
- 目的探讨尼可地尔(nicorandil,Nic)能否通过调控核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)/环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)通路对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法应用细胞计数盒(CCK-8)检测心肌细胞存活率;蛋白质免疫印迹法测定NF-κB、COX-2和cleaved caspase-3蛋白的表达水平;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测细胞培养液中LDH的活性;双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞数量;罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);ELISA法检测细胞培养液中白介素^(-1)β(IL^(-1)β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果 35 mmol·L^(-1)葡萄糖(高糖,HG)作用H9c2心肌细胞24 h能明显降低心肌细胞存活率。在HG作用前,应用20~100μmol·L^(-1)Nic预处理60 min或50μmol·L^(-1)Nic预处理30~120 min均可明显对抗HG对心肌细胞存活率的抑制作用。另一方面,HG可上调心肌细胞磷酸化(p)-NF-κB p65和COX-2的表达,50μmol·L^(-1)Nic预处理心肌细胞60 min能抑制HG诱导的p-NF-κB p65和COX-2表达的上调。此外,HG作用心肌细胞24 h可引起明显的心肌细胞损伤和炎症反应,使培养液中LDH活性、ROS生成、凋亡细胞数量、cleaved caspase-3表达、MMP丢失及炎症因子IL^(-1)β和TNF-α的分泌均增加;在HG作用前,应用50μmol·L^(-1)Nic预处理心肌细胞60 min或应用100μmol·L^(-1)PDTC(NF-κB抑制剂)或10μmol·L^(-1)NS-398(COX-2抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h能明显拮抗HG引起的上述损伤和炎症反应。结论 Nic通过抑制NF-κB/COX-2通路对抗HG引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。
- 陈美姬梁伟杰李健豪郑东诞兰军陈景福廖新学
- 关键词：尼可地尔核因子-ΚB环氧化酶-2高糖心肌细胞
- 硫化氢通过调控瘦素保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤
- 2013年
- 目的探讨瘦素(leptin)在高糖损伤心肌细胞中的作用及硫化氢(H2S)是否通过调控瘦素保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤。方法应用细胞计数盒(CCK-8)检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色检测凋亡细胞形态及数量的改变,双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相测定胞内活性氧(ROS)水平;罗丹明123(Rh123)染色及荧光显微镜照相测定线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测瘦素蛋白的表达。结果 35 mmol/L葡萄糖(高糖)作用H9c2心肌细胞9h可明显地促进瘦素表达,并引起心肌细胞损伤,表现为细胞存活率降低、凋亡细胞数量和ROS生成增多及线粒体膜电位(MMP)丢失。硫化氢钠(NaHS,为H2S的供体)预处理能抑制高糖对心肌细胞瘦素表达的上调作用。NaHS预处理或瘦素拮抗剂均能保护H9c2心肌细胞对抗高糖引起的上述损伤。结论瘦素参与高糖引起的心肌细胞损伤。外源性H2S可通过抑制瘦素表达保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤。
- 张莉莉陈景福华潇潇靳思思庄晓东廖新学陈培熹冯鉴强
- 关键词：硫化氢瘦素高糖活性氧心肌细胞
- 活性氧与ATP敏感性钾通道的相互作用参与高糖对H9c2心肌细胞的损伤被引量：6
- 2015年
- 目的研究活性氧(ROS)和ATP敏感性钾通道(KATP通道)的相互作用在高糖(HG)引起的心肌细胞损伤中的作用。方法应用Western blot检测心肌细胞KATP通道蛋白、Cleaved Caspase-3的表达水平;双氯荧光素染色荧光显微镜照相检测胞内ROS水平;细胞计数盒测定心肌细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相测定凋亡细胞数量的变化;JC-1染色法测定线粒体膜电位。结果应用高糖(35 mmol/L葡萄糖)处理H9c2心肌细胞24 h能明显下调KATP通道蛋白的表达水平,1000μmol/L N-乙酰半胱氨酸(ROS清除剂)预处理心肌细胞60min可阻断HG对心肌细胞KATP通道蛋白表达的下调作用。100μmol/L二氮嗪(线粒体KATP通道开放剂)和50μmol/L吡拉地尔(非选择性K_(ATP)通道开放剂)预处理均显著抑制HG引起的心肌细胞ROS的堆积。1000μmol/L N-乙酰半胱氨酸、100μmol/L二氮嗪和50μmol/L吡拉地尔均能抑制HG引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率升高,凋亡细胞数量、Cleaved Caspase-3表达及线粒体膜电位丢失减少。结论在HG状态下,心肌细胞的ROS和K_(ATP)通道存在相互作用,两者在HG引起的心肌细胞损伤中发挥重要作用。
- 梁伟杰陈景福宋明才李健仪郑东诞张稳柱潘玩莹冯鉴强廖新学
- 关键词：活性氧ATP敏感性钾通道相互作用高糖心肌细胞损伤
- ATP敏感性钾通道在硫化氢抑制高糖引起的心肌细胞损伤中的作用被引量：9
- 2015年
- 目的：研究ATP敏感性钾通道（ KATP通道）在硫化氢（ H2 S）抑制高糖引起心肌损伤中的作用。方法：应用Western blot 法检测心肌细胞KATP通道蛋白的表达水平；CCK-8试剂盒测定心肌细胞存活率；Hoechst 33258染色测定凋亡细胞数量的变化；JC-1染色法测定线粒体膜电位（ MMP ）。结果：应用高糖（35 mmol／L葡萄糖）处理H9c2细胞1～24 h，其中6 h、9 h、12 h和24 h均能明显下调KATP通道蛋白的水平，12 h和24 h KATP水平降至最低。在HG处理心肌细胞12 h前，应用400μmol／L硫氢化钠（ NaHS，为H2 S的供体）预处理30 min明显抑制高糖对KATP通道蛋白表达的下调作用。100μmol／L线粒体KATP通道开放剂二氮嗪和50μmol／L非选择性KATP通道开放剂吡拉地尔（ Pin）及NaHS预处理均显著抑制高糖引起的心肌细胞损伤，使细胞存活率升高，凋亡细胞数量及MMP丢失减少。相反，100μmol／L线粒体KATP通道阻断剂5-羟基癸酸和1 mmol／L非选择性KATP通道阻断剂格列本脲均能明显阻断上述NaHS的心肌细胞保护作用。结论：KATP通道介导了H2 S对高糖引起的心肌细胞损伤的抑制作用。
- 梁伟杰陈景福张稳柱莫利求郑东诞宋明才潘玩莹冯鉴强廖新学
- 关键词：ATP敏感性钾通道硫化氢心肌细胞
