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AKT基因转染人脐带间质干细胞来源exosomes的分离及鉴定: 2014年; 该研究构建人AKT基因重组腺病毒载体(Ad-AKT),转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSC),分离hucMSC分泌的exosomes,检测exosomes中的成分变化,为exosomes的临床研究提供实验基础。该实验设计含有EcoR I、Xho I的限制性酶切位点的引物,PCR扩增AKT,将扩增产物克隆到带有绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标记的穿梭质粒上。重组穿梭质粒经线性化处理后,与腺病毒骨架质粒在Stbl3中重组,筛选获得含有AKT的重组腺病毒质粒,PCR鉴定并测序。重组病毒质粒用Pac I酶切线性化,转染293A细胞,制备高效表达的Ad-AKT,并转染hucMSC。结果表明,AKT基因重组腺病毒能高效转染hucMSC,hucMSC中AKT蛋白表达增多,并且转染AKT基因的hucMSC来源的exosomes(AKT-MSC-exosomes)中AKT蛋白也增多,说明通过基因修饰可以获得过表达目的蛋白的exosomes,为exosomes的来源及应用研究提供可选择的方法。; 马洁赵媛媛曹文明孙晓仙孙丽钱晖许文荣朱伟; 关键词：AKT 腺病毒 EXOSOMES 脐带间质干细胞

构建大鼠急性心肌梗死模型并初步探讨人脐带间充质干细胞的修复作用被引量：3: 2013年; 目的构建大鼠急性心肌梗死(AMI)模型并初步探讨人脐带间充质干细胞(hucMSCs)对大鼠AMI损伤的修复效果。方法用小动物呼吸机维持呼吸,开胸后快速挤出大鼠心脏,结扎左冠状动脉前降支,并结合双层荷包缝合法构建模型。经心电图,超声心动图和TTC染色多方面验证。尾静脉注射hucMSCs,观察大鼠AMI损伤修复效果。结果成功构建了大鼠AMI模型,建模后成活率高(79.2%)。与模型+PBS组左心室收缩期容积[LV Vol;s(μL):164.73±15.54]和左心室收缩期内径[LVID;s(mm):5.77±0.23]相比,模型+MSCs组[LV Vol;s(μL):116.08±9.06]和[LVID;s(mm):4.96±0.17]明显降低,F分别为75.10和107.96,P均<0.01。与模型+PBS组左心室射血分数[LVEF(%):45.55±3.71]和左心室收缩分数[LVFS(%):23.56±2.38]相比,模型+MSCs组[LVEF(%):53.99±2.32]和[LVFS(%):28.76±1.52]明显增高,F分别为65.80和62.94,P均<0.05。HE染色结果表明,模型+MSCs组细胞损伤程度明显轻于模型+PBS组。结论成功构建大鼠AMI模型并初步证明hucMSCs可以促进大鼠AMI损伤修复,为进一步研究其机制奠定了基础。; 赵媛媛曹文明马洁孙晓仙孙丽钱晖许文荣朱伟; 关键词：急性心肌梗死动物模型人脐带间充质干细胞

应用CRISPR/Cas9技术构建IL-15敲除的MGC-803胃癌细胞株被引量：2: 2016年; 目的 :运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,建立IL-15基因敲除的MGC-803胃癌细胞株。方法 :针对IL-15基因作用的功能域,设计了靶向IL-15基因Exon2的gRNA。构建PX458-gRNA重组质粒并转化感受态细胞Stbl3,筛选出重组子后进行测序,通过测序确认了所设计的gRNA的有效性。并进一步通过流式细胞分选以及ELISA法检测筛选出的MGC-803胃癌细胞株IL-15基因的表达水平。结果 :测序结果显示敲除质粒构建成功,与阴性对照组相比,转染PX458-IL-15-g RNA质粒组IL-15的表达水平明显低于阴性对照组,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:利用CRISPR-Cas9系统成功构建了IL-15基因敲除的MGC-803细胞,为后续研究IL-15在肿瘤中的作用机制和功能奠定了基础。; 俞静孙丽孙晓仙陈志红钱晖许文荣朱伟; 关键词：IL-15 基因敲除

脐带MSC来源外体上调Smad7表达修复大鼠急性心肌损伤被引量：1: 2015年; 目的探讨人脐带间充质干细胞来源的外体(huc-exosomes)对SD大鼠急性心肌梗死(AMI)的修复作用及其可能的分子机制。方法体内构建SD大鼠AMI模型,分为假手术组、AMI+PBS组和AMI+exosomes组,小动物高频彩色超声仪检查心功能;72 h后处死取心肌组织,western blot检测组织内Smad7蛋白变化;体外培养心肌细胞系H9C2及原代培养心肌组织细胞,免疫荧光法鉴定原代培养心肌组织细胞,分为正常氧+PBS、正常氧+exosomes、缺氧+PBS、缺氧+exosomes 4组,分别提取各组的蛋白质或RNA,用定量PCR、western blot分别检测Smad7 mRNA和蛋白质变化。结果成功构建了SD大鼠AMI模型,超声心动图结果显示,尾静脉注射huc-exosomes可改善AMI大鼠的心功能。定量PCR及western blot结果显示,exosomes处理使心肌细胞中Smad7 mRNA和蛋白质的表达水平均上调。结论 huc-exosomes对AMI有修复作用,exosomes可能通过调节Smad7的表达促进细胞修复,Smad7可作为huc-exosomes介导损伤修复的判断指标。; 曹文明孙丽赵媛媛马洁孙晓仙展洁钱晖许文荣朱伟; 关键词：SMAD7 脐带

SSEA4+hUC--MSC的特性分析及表达T细胞共刺激分子的hUC--MSC在肿瘤治疗中的作用和机制研究: 目的：脐带间充质干细胞(hUC-MSC)具有多向分化能力和修复多种组织损伤的潜能，同时也具有肿瘤趋化的特性。hUC-MSC是一群异质性的细胞，是否能筛选出具有更大分化潜能的细胞亚群对于扩大hUC-MSC临床应用潜能具有积...; 李伟; 关键词：脐带间充质干细胞移植 T细胞共刺激分子; 文献传递

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国家自然科学基金(81270214)