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广东省高校优秀青年创新人才培养计划项目(LYM09040)
作品数:
2
被引量:3
H指数:1
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刘瑶
王斌
邹飞
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邹飞
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刘瑶
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中国医药导报
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2013
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TRPC通道在缺氧胶质瘤细胞VEGF表达中的作用
被引量:3
2013年
目的探讨TRPC通道在缺氧胶质瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达中的作用。方法将体外培养的U87细胞分为常氧对照组、常氧+25μmol/LSKF96365组、常氧+40μmol/LSKF96365组、缺氧组、缺氧+25μmol/LSKF96365组、缺氧+40μmol/LSKF96365组,34h加人后不同浓度的SKF96365,常氧对照组和缺氧组加人等量溶剂,继续培养2h后后3组细胞更换为低氧培养基,培养10h后实时RT.PCR检测各组细胞VEGFmRNA的表达:培养16h后RT-PCR和Westernblotting分别检测常氧对照组和缺氧组TRPCImRNA、蛋白的表达:培养1h后免疫荧光染色检测常氧对照组和缺氧组TRPC定位的变化。结果各组细胞缺氧条件下培养10h,VEGFmRNA表达量差异有统计学意义(F=101.362,P=-0.000),缺氧组VEGFmRNA表达量较常氧对照组增加.差异有统计学意义(P〈0.05),与缺氧组比较,缺氧+25μmol/LSKF96365组、缺氧+40μmol/LSKF96365组细胞VEGFmRNA表达下降,差异有统计学意义(P〈0.05)。缺氧16h后,缺氧组TRPCImRNA、蛋白的表达较常氧对照组无显著变化,差异无统计学意义(t=0.493,P=-0.648;t=0.490.P=-0.650)。免疫荧光染色显示常氧对照组TRPCI主要存在于细胞胞浆和胞膜,缺氧1h后TRPCI蛋白发生转位改变。聚集于胞膜位置。结论缺氧条件下,胶质瘤细胞TRPCI通道发生质膜转位而被激活,从而参与VEGF表达的调控。
王斌
刘瑶
邹飞
关键词:
缺氧
血管内皮生长因子
RNA干扰瞬时受体电位阳离子通道1表达抑制缺氧诱导的胶质瘤血管内皮生长因子上调的实验研究
2013年
目的探讨瞬时受体电位阳离子通道1(TRPC1)是否参与缺氧诱导的胶质瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达。方法通过RT-PCR和钙图检测技术观察U87细胞上表达的TRPC亚型;采用RNAi技术、real-time RT-PCR、免疫印迹和ELISA方法,在基因和外分泌蛋白水平观察TRPC1对缺氧U87细胞VEGF表达的影响。结果 U87胶质瘤细胞表达TRPC1,TRPC3,TRPC4和TRPC5亚型。TRPC通道激动剂OAG增加了胞内Ca2+浓度,而TRPC通道阻断剂2-APB可抑制激动剂诱导的胞内Ca2+浓度增加。化学合成的siRNA-1,siRNA-2和siRNA-3分别减少TRPC1 mRNA到64%,39%和36%(P<0.01);分别减少TRPC1蛋白到48%,29%和33%(P<0.01)。siRNA-2和siRNA-3显著抑制了缺氧诱导的VEGF基因上调(P<0.01)。同时缺氧U87细胞VEGF蛋白的分泌亦受到抑制(P<0.01)。结论 U87胶质瘤细胞表达功能性的TRPC通道,TRPC1参与缺氧诱导的胶质瘤VEGF表达。
王斌
刘瑶
邹飞
关键词:
神经胶质瘤
缺氧
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