江西省科技厅工业攻关项目(00526)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
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- GL-7ACA酰化酶基因工程菌(E.coliBL21(DE3)pYW-GA)发酵工艺的优化
- 2007年
- 探索了组成型重组大肠杆菌E.coliBL21(DE3)pYW-GA高效表达GL-7ACA酰化酶(EC.3.1.5.11)的发酵工艺.在摇瓶培养获得GL-7ACA酰化酶工程菌的最佳发酵条件的基础上,用5L自控发酵罐进行分批补料培养,为减少细菌代谢过程中有害的物质(主要是乙酸)的产生及酶的高效表达,发酵过程中采用不同的流加方式进行补料,同时对转速和溶氧等进行控制.考察了恒速流加、pH反馈流加和指数流加几种补料模式,比较得出菌浓最高的是pH8.0反馈流加这一模式,OD600可达35,而酶活最高的模式是pH7.0反馈流加,最高酶活可达3 463.8 U/L.大肠杆菌E.coliBL21(DE3)pYW-GA高效表达GL-7ACA酰化酶的发酵工艺的建立为工业化生产GL-7ACA酰化酶和头孢类抗生素提供了基础.
- 杨志平王筱兰孙兵兵
- 关键词：基因工程菌补料分批发酵
- D-氨基酸氧化酶的分离纯化及固定化研究被引量：2
- 2008年
- 利用自制的亲和载体EPI-30-ARG-IDA-Co2+对带有6个组氨酸的重组D-氨基酸氧化酶(DAAO)进行分离纯化,其纯化倍数为10倍,酶活回收率达38.35%,SDS-PAGE显示为单一条带。经过Eupergit C载体固定化后,固定化酶对温度和pH的稳定性提高,表观米氏常数增大,固定化酶活力回收高达42.44%。
- 王筱兰孙兵兵杨志平
- 关键词：D-氨基酸氧化酶纯化固定化
- 金属螯合载体一步纯化与固定化GL-7ACA酰化酶被引量：4
- 2008年
- 采用金属鳌合亲和层析技术,以EIP-ARG-IDA-Co^2＋为载体,从可溶性总蛋白中一步分离纯化具有His-tag标签的GL-7ACA酰化酶.在此基础上进行了固定化方面的研究,其固定化最适条件是150-200U/g给酶量与载体比,固定化时间16 h,固定化介质pH=7.0.固定化酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为8.0.同时还考察了固定化酶的热稳定性、重复利用性及载体的重复使用等特性.
- 王筱兰杨志平孙兵兵
- 关键词：纯化固定化
