河北省自然科学基金(C2010000683) 作品数:5 被引量:11 H指数:2 相关作者: 张爽 马向超 黄大庄 杜克久 任志彬 更多>> 相关机构: 河北农业大学 更多>> 发文基金: 河北省自然科学基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
桑天牛线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ基因的PCR反应体系优化 被引量:1 2010年 建立一整套适用于研究桑天牛线粒体细胞色素氧化酶I(mtDNA CO I)基因的PCR反应体系,研究不同地理分布的桑天牛遗传多样性。通过L_(16)(4~5)正交组合试验和单因素梯度试验对缓冲液(Mg^(2+))、dNTP、随机引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA的浓度和退火温度、循环次数等影响PCR扩增的重要因素进行优化。试验结果表明,50μL反应体系及反应程序中各因素优化组合为:缓冲液(含Mg^(2+))0.9mmol/L,dNTP 0.15mmol/L,随机引物0.44μnol/L,TaqDNA聚合酶3.0U,模板DNA75ng;退火温度47℃,循环次数35次。 马向超 黄大庄 张爽 任志彬关键词:桑天牛 PCR反应体系 单因素 杨树木质部特异启动子5'端侧翼序列缺失表达载体构建及转化烟草的研究 被引量:6 2013年 采用5'端系列缺失分析法,PCR扩增杨树木质部特异性启动子JCesAP中与转录起始位点距离不同的5'端缺失启动子片段ZU2、ZU3、ZU4。为鉴定缺失片段的功能活性,以β-葡糖醛酸酶基因(GUS)作为报告基因,分别构建JCesAP启动子3个缺失片段的表达载体,并通过农杆菌介导瞬时转化烟草。对转化烟草植株进行GUS活性检测的结果表明,缺失片段ZU3、ZU4有启动子活性,且ZU4启动子活性强度与CaMV35S启动子相当,转化烟草的叶片表面都呈现大面积蓝色,而ZU2没有启动子活性。木质部特异性核心启动子的筛选将有助于利用转基因技术治理桑天牛等天牛类蛀干害虫。 赵金风 李杰 张爽 杜克久关键词:杨树 桑天牛遗传多样性研究中AFLP反应体系的建立 被引量:2 2010年 建立适合的AFLP反应体系研究桑树主要害虫桑天牛(Apriona germari)的遗传多样性,有助于从分子水平分析桑天牛不同地理种群的遗传多样性以及开辟害虫防治新途径。对提取的桑天牛成虫基因组DNA预扩增中的Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶的用量以及选择性扩增中的预扩增产物稀释倍数、dNTP浓度、引物浓度、Mg2+浓度和Taq酶的用量等进行单因素试验,优化反应体系。确定预扩增反应体系中的Mg2+终浓度为1.50mmol/L,dNTP终浓度为0.15mmol/L,引物浓度为10.0×10-7mol/L,Taq酶用量为1.00U;确定选择性扩增反应体系中的预扩增产物稀释倍数为40倍,dNTP终浓度为0.15mmol/L,引物浓度为5.00×10-7mol/L,Mg2+终浓度为1.50mmol/L,Taq酶用量为1.00U。用优化后的反应体系扩增得到了条带清晰的桑天牛AFLP图谱。 马向超 张爽 黄大庄 张静洁 王圣杰 夏明瑞关键词:桑天牛 扩增片段长度多态性 桑天牛不同地理种群遗传分化的AFLP分析 被引量:2 2011年 研究桑天牛不同地理种群的遗传分化,为探讨桑天牛在不同区域暴发危害的规律提供理论依据。采用AFLP技术,对6个桑天牛地理种群的DNA进行扩增,5对引物组合得到扩增条带共241条,有多态性条带196条,平均多态性位点比率为81.33%,其中杭州种群具有13条特异条带。遗传距离分析结果:来自河北省的4个桑天牛地理种群间的平均遗传距离为0.270 3;来自浙江杭州的桑天牛种群与来自河南济源的桑天牛种群之间的遗传距离为0.397 2,二者与河北省的4个桑天牛地理种群间的平均遗传距离分别为0.418 2、0.333 4。聚类分析也显示,地理上相距越远,桑天牛种群间的遗传分化越大。 马向超 张爽 黄大庄 任志彬关键词:桑天牛 遗传分化 地理种群 几个杨树木质部特异启动子片段表达载体的构建与功能分析 被引量:2 2012年 木质部纤维素合酶基因(CesA)在植物正常生长期的木质部特异表达,受到外界压力时可诱导在韧皮部表达,因而被用作杨树抗桑天牛转基因研究中的特异性表达启动子。将前期分离的CesA上游DNA片段JCesAP、YCesAP和MDCesAP分别替换植物表达载体pCAMBIA1302中的组成型启动子CaMV35S,构建成新的植物组织特异性表达载体pJCesAP-GFP、pYCesAP-GFP和pMDCesAP-GFP,然后采用农杆菌介导法转化烟草,均得到完整的再生烟草植株。经PCR初步检测证明目的基因已整合到烟草基因组中。荧光检测JCesAP、YCesAP和MDCesAP片段均能启动GFP蛋白的表达,在395 nm激发光下出现黄绿色荧光,显示3个CesA片段均具有在木质部特异表达的启动子活性。 张爽 武会 杜克久关键词:转基因 绿色荧光蛋白