目的探讨纤维连接蛋白（FN）、Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）两种细胞外基质（ECM）成分对被动致敏的人气道平滑肌细胞（HASMCs）免疫功能的影响及磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）在此调控中的作用。方法将HASMCs接种于FN、ColⅠ包被的培养板和空白培养板中，用10％哮喘患者血清被动致敏HASMCs，以10％非哮喘者血清为对照，在加入血清前用PBK抑制剂（LY294002）预处理HASMCs 30min。采用RT—PCR法检测HASMCs RANTES（regulated upon activation，normal T cell expressed and secreted）、Eotaxin、TGF—β1 mRNA表达；ELISA法测定HASMCs培养上清中RANTES、Eotaxin、TGF—β1蛋白水平。结果与单纯对照血清组比较，单纯哮喘血清组、对照血清＋FN组、对照血清＋ColⅠ组HASMCs RANTES、Eotaxin、TGF-β1 mRNA和HASMCs培养上清中蛋白的表达均增高（P〈0．05）。哮喘血清＋FN、哮喘血清＋ColⅠ处理HASMC后，RANTES、Eotaxin、TGF—β1 mRNA和HASMCs培养上清中蛋白的表达均高于单纯哮喘血清组，且LY294002干预后上述各指标均下降（P〈0．05）。结论细胞外基质对被动致敏的HASMCs免疫功能具有调控作用，PI3K可能参与细胞外基质对被动致敏的HASMCs的免疫功能调控。
目的探讨细胞外基质(extracellular matrix,ECM)纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)在哮喘气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,ASMC)免疫功能调控机制中的作用,同时建立一种优化培养ASMC的方法。方法利用组织贴块法和消化酶法原代培养大鼠ASMC,并用细胞形态学和免疫组化SABC染色方法鉴定;将正常和哮喘大鼠ASMC种植在涂覆有FN的和空白(无FN涂覆)的玻片上,免疫组化方法检测爬片中粘着斑蛋白的表达;ELISA方法检测各组培养上清中调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子(regulated on activated normal T expressed and secreted,RANTES)蛋白水平。结果①原代培养的细胞呈典型的"谷峰状"生长,胞质内特异性的平滑肌肌动蛋白阳性表达,符合平滑肌细胞的形态学特征和生物学特性。②FN作用的哮喘大鼠ASMC粘着斑蛋白的表达明显增加,但未经FN作用的哮喘大鼠ASMC及经(或未经)FN作用的正常大鼠ASMC粘着斑蛋白表达均呈阴性表现。③FN处理组细胞培养上清中的RANTES蛋白水平较未经FN处理组显著增加(P<0.05),哮喘组培养上清中的RANTES蛋白水平较正常组明显增加(P<0.05)。结论 FN可能通过上调哮喘大鼠ASMC粘着斑蛋白的表达、促进RANTES的分泌而参与ASMC的免疫功能调控机制。
