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中华鳖SOX9基因在胚胎期性腺中的表达模式及在性逆转中的表达变化被引量：5: 2014年; SOX9基因在脊椎动物性别决定和性腺分化中扮演重要的调控作用。从mRNA和蛋白水平分析中华鳖SOX9基因在不同组织中的差异性表达、在胚胎性腺和成年睾丸中的细胞定位以及在性逆转中的表达变化,研究SOX9基因在中华鳖性别分化中的调控作用。Real-time PCR结果显示,SOX9基因在中华鳖雄性性腺中特异性表达。免疫荧光染色分析显示,SOX9蛋白在雄性18期胚胎性腺中开始表达,随着性腺的发育,SOX9蛋白定位于性腺Sertoli前体细胞细胞核中;而在雌性胚胎性腺并未见其表达。此外,在雌激素诱导的雄性向雌性性逆转胚胎中,SOX9基因显著下调,而在芳香化酶抑制剂诱导的雌性向雄性性逆转胚胎中,SOX9基因表达则显著上升。研究表明,SOX9基因为中华鳖雄性特异性基因,参与雄性性腺的发育过程,可能在中华鳖早期性别分化过程中起调控作用。; 王莉孙伟储经乾刘颖史思瑞葛楚天钱国英; 关键词：中华鳖 SOX9基因性别分化性逆转

中华鳖Dmrt1基因的克隆、表达及在性逆转中的变化分析被引量：10: 2014年; 在大部分脊椎动物中,Dmrt1基因在雄性性别决定和性腺分化中起重要的调控作用.本文从m RNA和蛋白水平分析Dmrt1基因的组织差异性表达、在不同发育阶段性腺中的细胞定位及在性逆转中的表达变化,研究Dmrt1基因在中华鳖性别分化中的调控作用.Rapid-amplification of c DNA ends(RACE)结果显示,Dmrt1基因c DNA序列全长2409 bp,其中5′非编码区为230 bp,3′非编码区为1072 bp,开放阅读框为1107 bp,编码368个氨基酸,具有一个高度保守的DM结构域.荧光定量PCR和免疫组化结果显示,Dmrt1在性腺分化之前的第16期雄性性腺中开始表达,先于Amh和Sox9基因表达.随着性腺的发育,Dmrt1蛋白主要定位于性腺Sertoli细胞的细胞核上,在雌性性腺发育过程中并未见其表达.此外,在雌二醇诱导的雄性转雌性性逆转胚胎性腺中,Dmrt1表达显著下调;在芳香化酶抑制剂诱导的雌性转雄性性腺中,Dmrt1表达则显著上升.上述研究表明,Dmrt1基因是中华鳖雄性特异性基因,参与雄性性腺的发育过程,可能在中华鳖早期性别决定中起重要的调控作用.; 葛楚天孙伟桑亚鹏王莉杨克周钱国英; 关键词：DMRT1 性别决定雄性中华鳖

雌激素对中华鳖性腺分化及DMRT1、SOX9基因表达的影响被引量：12: 2014年; 中华鳖(Pelodiscus sinensis)性别决定的方式一直存在较大的争议,分子机制更是不清楚。在大部分脊椎动物中,雌激素在性别决定和性腺分化中扮演重要的调控作用。实验通过对性别分化前胚胎进行雌二醇(E2)和芳香化酶抑制剂(AI)处理,研究雌激素在中华鳖性腺分化中的作用及机理。实验结果显示,与对照组(雌性比例49%)相比,E2处理组中雌性中华鳖仔鳖比例显著增加,高达92.3%;而在AI处理组中,雌性比例显著下调至13.1%。HE染色分析表明,ZZ(雄性)和ZW(雌性)胚胎分别经过E2和AI处理后,ZZ和ZW性腺结构呈现明显的雌性化和雄性化特征。同时,通过RT-PCR和免疫荧光染色发现,E2能显著降低雄性性别关键因子DMRT1和SOX9 mRNA和蛋白表达水平;AI则表现相反的调节作用。综上所述,雌激素通过抑制雄性性别关键因子DMRT1和SOX9的表达来抑制雄性分化,促进雌性分化,揭示雌激素在中华鳖雌性性别分化中起着重要的调控作用。; 王莉胡涛宓猛冬杨克周钱国英葛楚天; 关键词：雌激素 DMRT1 SOX9 性别分化中华鳖

维甲酸直接诱导鸡原始生殖细胞启动并完成减数分裂被引量：1: 2011年; 维甲酸(RA)在胚胎期生殖细胞启动减数分裂过程中发挥重要的调控作用,但RA与性腺细胞的作用机制及其能否诱导生殖细胞完成整个减数分裂生成配子的问题尚不清楚.本文以鸡原始生殖细胞体外无饲养层培养体系为模型,避开性腺体细胞的影响,研究RA诱导PGC进入减数分裂的作用机理.研究发现,在无体细胞的情况下,RA显著上调鸡胚PGC中STRA8,SYCP3和DMC1的mRNA和蛋白表达水平,从而促进其进入减数分裂;同时,流式细胞分析和吉姆萨染色结果表明,RA能使鸡胚PGC经历各个减数分裂时期,最终生成36.5%～58.4%单倍体生殖细胞;此外,本实验还对雌性和雄性PGC对RA的应答能力进行了研究,发现两者对RA的敏感程度相似.综上所述,RA能直接诱导PGC启动并完成整个减数分裂过程,生成单倍体生殖细胞,无需体细胞或其他因子的介导.这为临床上治疗不孕不育及配子形成的机理研究提供了基础.; 葛楚天邹文贤王伟李彩燕高有领钱国英; 关键词：原始生殖细胞鸡胚维甲酸减数分裂

中华鳖Dmrt1基因在雄性性别分化中的功能分析被引量：10: 2015年; 在大部分脊椎动物中,Dmrt1基因在雄性性别决定和性腺分化中起重要的调控作用.本文通过慢病毒-Dmrt1-sh RNA干扰和Dmrt1-OE过表达载体系统的构建,成功实现了Dmrt1基因在中华鳖胚胎发育过程中的高效异常表达,以探讨Dmrt1在中华鳖雄性性别分化中的功能.结果显示,经过Dmrt1-sh RNA干扰处理后的ZZ胚胎,32.0%发育成雌性(生理)个体,而经过Dmrt1-OE过表达处理后,25.5%的ZW胚胎发育成雄性(生理)个体.苏木素/伊红(H&E)染色、q PCR和免疫组化分析表明,Dmrt1基因敲低后,ZZ胚胎性腺外形和组织结构明显雌性化,雄性特异性基因Amh和Sox9表达显著降低,雌性特异性基因Cyp19a1和Foxl2表达则显著上升,出现雄向雌的性逆转现象;而Dmrt1过表达后的ZW胚胎性腺则向睾丸分化,Amh和Sox9表达急剧上调,Cyp19a1和Foxl2表达显著下降,呈现雌转雄性逆转现象.上述研究表明,Dmrt1基因在中华鳖早期雄性性别形成过程中是必需的,且它的异位表达能够单独启动雄性分化,是中华鳖雄性性别分化的关键因子.; 孙伟史思瑞蔡晗宓猛冬钱国英葛楚天; 关键词：DMRT1 性别分化雄性中华鳖慢病毒载体

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国家自然科学基金(31101884)