国家重点基础研究发展计划(2012CB721006)
- 作品数：11 被引量：34H指数：4
- 相关作者：储炬张嗣良庄英萍王泽建杭海峰更多>>
- 相关机构：华东理工大学浙江省农业科学院青海珠峰虫草药业有限公司更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程医药卫生更多>>
- 有机氮源质量优化对红色糖多孢菌发酵生产红霉素过程的影响
- 2013年
- 通过分析红色糖多孢菌发酵生产红霉素过程中有机氮源中的氨基酸含量,设计了一种新型复合有机氮源,充分搭配各种氨基酸,优化蛋白质质量。通过摇瓶试验,氮源优化后红霉素效价达4 611 u/ml,较未优化的对照提高了22.5%。进一步在50 L罐上进行放大试验,红霉素有效组分EryA含量为7 901 g/ml,相比对照提高了9.4%,杂质组分EryB和EryC含量分别降低了17.9%和33.1%。
- 常先通段飞中庄英萍储炬张嗣良
- 关键词：红色糖多孢菌红霉素发酵
- 农杆菌转化法高效构建顶头孢霉sorA和sorB双缺失菌株提高头孢菌素C产量被引量：1
- 2019年
- 目的获得顶头孢霉sorA和sorB双缺失菌株,以阻断sorbicillinoids的合成,并研究其与头孢菌素C(CPC)产量的关系。方法通过根癌农杆菌转化法,依据同源双交换的原理,同时敲除合成sorbicillinoids骨架结构的两个聚酮合酶基因sorA和sorB,并通过摇瓶发酵实验检测缺失菌和野生菌的产量。结果筛选并验证了6株A.chrysogenum-Δpks菌株,遗传稳定,转化效率约为20%。通过发酵实验测定发现,缺失菌株产CPC能力比野生菌提高了70%。结论农杆菌转化法是一个高效的顶头孢霉遗传操作系统,并且顶头孢霉中sorbicillinoids的缺失可以提高CPC产量。
- 陈国枝储炬
- 关键词：顶头孢霉聚酮合酶同源重组头孢菌素C
- 利用合成生物学技术深入挖掘放线菌中活性次级代谢产物被引量：4
- 2013年
- 放线菌是一类能够产生丰富生物小分子药物的微生物,对人类的健康事业做出了杰出的贡献。但近几十年来,来源于微生物并最终上市的药物越来越少,而病原菌的抗药性问题却越发严重,人们对新药的期待越来越迫切。本文介绍了近十年里发展迅速的合成生物学对微生物次级代谢产物研发的促进作用。合成生物学以工程化的思想对生命系统进行设计与改造,使传统方法难以获取的放线菌次级代谢产物通过外源宿主得以产生,充分利用了自然界的资源;此外,对次级代谢基因簇的合理设计和对生物元件的应用不仅使人们获得了自然界中原本不存在的新化合物,还能使某些具有广泛应用价值药物的产量得以显著提高;最后,还介绍了合成生物学领域近些年DNA组装的新技术和新方法,为从事次级代谢产物研发的工作者提供便利。
- 白超弦卓英张立新
- 关键词：放线菌次级代谢产物合成生物学
- 中国被毛孢发酵虫草菌丝体多糖的提取、纯化及其理化性质被引量：8
- 2014年
- 利用中国被毛孢虫草菌液体深层发酵培养得到的菌丝体,通过正交试验优化得到了虫草多糖的提取工艺条件为:提取温度100℃,提取时间120 min,料液比1∶15,提取次数4次。粗多糖经Sevag法脱蛋白、透析袋透析、DEAE-cellulose离子交换和Sephadex G-100柱层析纯化后,得到3种多糖(命名为HSP-1、HSP-2和HSP-3)。经紫外扫描、Sephacryl S-300 HR柱层析检测确定HSP-1和HSP-2为均一组分,HSP-3为非均一组分。苯酚-硫酸法测得HSP-1和HSP-2的含糖量分别为89.42%和85.63%。Sephacryl S-300 HR柱层析测得HSP-1和HSP-2的相对分子质量分别为1.7×104Da和9.8×103Da。GC-MS测得HSP-1的单糖组成及比例为:D-葡萄糖∶D-甘露糖∶D-半乳糖=4.522∶1∶1.378,HSP-2的单糖组成及比例为:D-葡萄糖∶D-甘露糖∶D-半乳糖∶D-阿拉伯糖=2.687∶4.591∶1∶0.212。红外光谱测定结果显示HSP-1和HSP-2都含有α型糖苷键。
- 刘金花李富奎贾得儒李兰王泽建杭海峰储炬庄英萍张嗣良
- 关键词：中国被毛孢冬虫夏草多糖提取纯化理化性质
- 液体深层发酵中丝状菌形态控制的研究进展被引量：2
- 2012年
- 丝状菌广泛用于工业发酵,其菌丝形态与产物产量及发酵液粘度和能耗紧密相连,成为发酵过程控制的热点。本文综述了丝状菌形态特征、成球机理及液体深层发酵中影响丝状菌菌丝形态的因素,包括添加微粒子、碎布片及搅拌通气、接种量、培养基组分、培养条件等对丝状菌形态的影响,并对未来深层发酵丝状菌形态控制进行了展望。
- 薛维纳储炬张超王泽建唐文俊鲁洪钟
- 关键词：液体深层发酵丝状菌
- 合成生物学驱动的智能生物制造研究进展被引量：3
- 2019年
- 合成生物学的迅猛发展给包括药物和化学品在内的生物制造带来了强劲动力。它助力生物合成关键元件的挖掘,丰富了智能生物制造所必需的基础(催化)元件库;底盘细胞的性能优化为高效生物制造奠定了基石和平台。合成生物学经典的"设计-构建-测试-学习"则是创建高效智能细胞工厂的核心研发内容。天然宿主的系统代谢工程和合成生物学以及无细胞体系的体外合成生物学,是实现高效生物制造和替代底盘细胞体系的可选途径。该文简要综述近年国内外的相关研究进展。
- 王文方钟建江
- 关键词：合成生物学生物制造
- 红曲色素高产菌株的高通量选育被引量：8
- 2012年
- 该文结合24深孔板微型化培养和酶标仪检测,建立了红曲色素高产菌株的高通量筛选方法,此法简单、快速、准确且自动化水平较高。确定最佳培养条件为装液量1.2mL/孔(每孔体积为10mL),接种量9%;找出红曲色素最大吸收峰值,确定酶标仪检测波长为530nm;通过紫外-氯化锂复合诱变处理,经过高通量筛选获得9株正突变株,其中菌株D39微孔板发酵色价达42.7U/mL,比出发菌株提高了46.2%;将D39分离纯化并用摇瓶验证,得到纯菌株D39-4的摇瓶发酵色价为206.5U/mL,比出发菌株提高了51.1%,具有很好的工业应用前景。
- 石文娟谭俊储炬郭元昕庄英萍张嗣良
- 关键词：红曲色素微孔板高通量复合诱变
- 溶氧对谷氨酸棒杆菌发酵产谷氨酸代谢的影响被引量：5
- 2012年
- 分别控制0、5%、30%3种溶氧水平进行谷氨酸分批发酵,考察了3种溶氧水平下谷氨酸棒杆菌发酵的代谢响应。结果表明,随着溶氧降低,发酵液中柠檬酸和α-酮戊二酸的含量降低,三羧酸(TCA)循环还原臂途径中的有机酸含量增加,丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸含量也有所增加,在溶氧为0时,乳酸和乙酸大量积累。通过分析不同溶氧水平下的相关酶活和胞内氧化还原状态,发现随着溶氧降低,谷氨酸脱氢酶酶活降低,乳酸脱氢酶酶活升高,胞内氧化还原电势升高,它们的共同作用使氧限制条件下发酵的代谢流流向TCA循环的还原臂途径和乳酸合成途径,导致谷氨酸产量下降。
- 刘剑赵策储炬杭海峰郭美锦
- 关键词：谷氨酸发酵溶氧酶活
- 磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C基因在乳酸乳球菌中的异源表达
- 2016年
- 根据乳酸乳球菌密码子的偏好性,在不改变编码蛋白的基础上,优化设计并合成枯草芽孢杆菌磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C基因,将其与大肠埃希菌-乳酸乳球菌穿梭质粒p AMJ399连接,构建重组质粒p AMJ399-PIPLC,并电转化至乳酸乳球菌中进行诱导表达。SDS-PAGE分析显示:重组蛋白以可溶性蛋白的形式分泌于胞外,分子质量约35 ku,与预期蛋白大小一致。重组蛋白在PI-李斯特氏菌显色平板上显现明显的乳白色晕圈,证明重组蛋白具有酶活性,磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)在重组乳酸乳球菌中成功获得表达。通过优化培养条件,以2%转接量,在含有1%红霉素抗性的GM17液体培养基中,于32℃静止培养24 h,测得培养基上清液中PI-PLC的浓度为1.092μg·m L-1。
- 汤先泽刘伟皮雄娥尹业师王欣刘新利
- 关键词：克隆表达乳酸乳球菌
- 活细胞传感仪在嗜酸乳酸杆菌培养过程中的应用被引量：3
- 2012年
- 活细胞是嗜酸乳酸杆菌发酵过程的目标产物,但长期以来一直缺乏一种能快速、准确地检测发酵液中活细胞量的方法,本文引入了一种基于电容原理的活细胞量测量新方法,探讨了其在嗜酸乳杆菌培养过程中在线应用的可行性。研究结果表明,活细胞传感仪测定的活细胞数与平板活菌计数法测定的菌体浓度有非常好的线性关系,相关系数达0.9944,在相同的实验条件下,仪器测定数据具有较好的重复性,基于电容值计算出的比生长速率比基于CER、OUR计算出的比生长速率更可信。因此活细胞传感仪为嗜酸乳杆菌培养过程在线监测提供了一种简便、精确的方法。
- 罗艳霞黄明志郭元昕王泽建储炬
- 关键词：电容嗜酸乳杆菌
