国家自然科学基金(39730460)
- 作品数：22 被引量：70H指数：5
- 相关作者：于秉治刘莹张杰武迪迪宗志宏更多>>
- 相关机构：中国医科大学中国医科大学附属第一医院沈阳市第五人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划辽宁省博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 蛋白激酶在NIH3T3细胞中对促成熟因子的作用被引量：3
- 2005年
- 目的:研究蛋白激酶C(PKC)在NIH3T3细胞中,对G2/M期的关键调节因子促成熟因子(MPF)的调控作用,检测MPF两种亚基p34cdc2和cyclinB在翻译水平的改变。方法:用aphidicolin,流式细胞仪检测细胞周期同步化。Westernblot做蛋白表达水平的检测。结果:50μmol/L的OAG使3T3细胞周期阻断在G2/M期。OAG对p34cdc2的表达没有影响,但可以使cyclinB的表达减少,对照组与处理组差异显著。结论:PKC激活剂OAG通过降低cyclinB的表达引起p34cdc2的活性改变而调节细胞周期。
- 李雪松刘莹张杰于秉治
- 关键词：蛋白激酶C细胞周期
- 小鼠受精卵早期发育过程中PKC对cdc2和cdc25C活性的影响被引量：2
- 2002年
- 为研究小鼠受精卵细胞早期发育过程中PKC对cdc2和cdc2 5C活性的影响 ,采用免疫印迹和电泳迁移率差异分析的方法 ,观察PKC的激活剂TPA及其抑制剂星形孢子素对小鼠受精卵一细胞期cdc2和cdc2 5C活性的影响 .10nmol L的TPA作用 10min后 ,小鼠受精卵一细胞期卵裂率明显大于对照组 (P <0 0 5 ) ,而星形孢子素作用后卵裂率显著下降 (P <0 0 1) .TPA处理后 ,受精卵中呈去磷酸化状态的活性cdc2明显增加 ,没有活性呈磷酸化状态的cdc2 5C明显减少 ;而星形孢子素处理的受精卵中没有活性的cdc2明显增加 ,有活性的cdc2 5C明显减少 .结果表明 ,TPA短时间作用可以促进小鼠一细胞期受精卵分裂 ,星形孢子素抑制受精卵的分裂 ;TPA可以促进cdc2的去磷酸化以及cdc2 5C的磷酸化 ,从而促进G2 M转换 ,星形孢子素则抑制cdc2和cdc2 5C的活性 ,阻止受精卵由G2
- 师秀艳付伟赵咏梅刘莹刘奕宗志红于秉治
- 关键词：受精卵早期发育过程PKCCDC2活性
- PKC在Ca^(2+)信号调节MPF活性中的作用
- 2003年
- 用Fura-2AM作为染料,用F-2000荧光分光光度计测细胞内Ca2+浓度的改变。用A23187-Ca2+载体提高细胞内Ca2+浓度,同时用PKC的特异性抑制剂calphostin C作用细胞来阻断PKC途径,观察MPF活性改变。结果表明:300nmol/L的Calphostin C可以最大限度地抑制PKC活性。Calphostin C不能影响A23187引起的细胞内Ca2+浓度的升高。A23187处理前加入300nmol/L光激活Calphostin C不能降低MPF的活性,而A23187单独却可以引起MPF的活性降低。与对照组相比,差异不显著,p<0.05。
- 刘莹张杰王亚杰具英花赵昕宗志红于秉治
- 关键词：细胞内钙蛋白激酶C细胞周期
- 一种新的精子结合蛋白HBRP在原核表达及其活性研究
- 2003年
- 为了发现和研究牛精浆(bovine seminal plasma,BSP)蛋白及其相关蛋白在受精及受精卵发育中的重要作用,我们克隆了人类生殖相关新基因HBRP(Human BSP-Related Proteins),本文通过基因重组技术,构建了GST-HBRP融合蛋白表达质粒,在大肠杆菌中获得大量表达,并检测了该蛋白对PKC活性的影响。
- 罗阳宗志宏于秉治
- 关键词：HBRP原核表达活性
- PKC、PKB通过p21^(CIP1/WAF1)蛋白对小鼠受精卵G2期向M期转换的影响被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨在小鼠受精卵中,PKC及PKB是如何通过p21CIP1/WAF1蛋白影响小鼠受精卵G2/M的转换。方法:以小鼠受精卵为材料,通过Westernblot及免疫荧光的方法,检测经PKC及PKB抑制剂处理后的p21蛋白表达及定位。结果:经PKC抑制剂(PMA)处理后的小鼠G2期受精卵中p21蛋白表达增加,而经PKB抑制剂(LY294002)处理后的p21蛋白表达没有变化,但是其在亚细胞的定位发生了改变。结论:PKC通过改变p21蛋白表达,影响小鼠受精卵G2/M转换。而PKB通过改变p21蛋白在小鼠受精卵中的亚细胞定位,影响受精卵G2/M转换。
- 武迪迪具英花张杰李雪松于爱鸣宗志宏安丽文于秉治
- 关键词：PKCPKBP21蛋白
- p21-EGFP融合基因表达载体与卵母细胞的表达定位被引量：5
- 2007年
- 目的:通过构建绿色荧光蛋白p21-EGFP融合基因表达载体,观察其在小鼠卵母细胞中的表达及定位,为研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21对小鼠卵母细胞细胞周期的影响提供实验基础。方法:以含有p21的全长序列的质粒为模板PCR扩增p21cDNA,应用基因重组技术与EGFP基因融合,构建以绿色荧光蛋白EGFP为报告基因的重组表达质粒pEGFP-p21。利用显微注射方法注射到小鼠卵母细胞中进行表达,用荧光显微镜直接观察pEGFP-p21融合蛋白在细胞中的分布和定位,Western Blot方法检测其蛋白的表达。经酶切证实插入片断的正确性。结果:荧光显微镜观察结果显示在空载体pEGFP-C3转染的小鼠卵母细胞中,绿色荧光呈弥散分布,而经注射重组质粒pEGFP-p21的小鼠卵母细胞中,绿色荧光主要集中在细胞核内。同时用WesternBlot证实了pEGFP-p21融合基因的表达。结论:成功的构建了pEGFP-p21融合表达质粒。同时证明小鼠卵母细胞能高效表达pEGFP-p21融合基因,且主要定位于细胞核内。
- 武迪迪张杰具英花宗志宏李雪松于秉治
- 关键词：卵母细胞小鼠绿色荧光蛋白
- 小鼠受精卵中蛋白激酶C底物的鉴定
- 2005年
- 为研究蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)在小鼠早期发育中的调节作用,运用超排卵和体外受精技术,采用体外磷酸化和放射自显影的方法,鉴定小鼠1-细胞期受精卵中PKC的底物。经特殊的反复冻融处理,消除卵中内源性蛋白激酶活性。55个受精卵的样品中加入部分纯化的PKC,结合应用较强的PKC抑制剂H-7和星形孢菌素以及促分裂原活化蛋白激酶抑制剂PD098059作为对照,观察到12条PKC底物蛋白的放射自显影带,根据标准蛋白质Rf值绘制的标准曲线计算,这些磷酸化蛋白的相对分子量分别约为120kDa、100kDa、79kDa、63kDa、59kDa、47kDa、40kDa、34kDa、32kDa、26kDa、24kDa和22kDa。实验结果表明,PKC可通过底物蛋白活性的调节,在小鼠早期发育中发挥重要作用。
- 于爱鸣宗志宏武迪迪于秉治
- 关键词：小鼠动物实验受精卵蛋白激酶C底物
- 小鼠受精卵早期发育过程中PKB/Akt对p21蛋白表达及定位的影响被引量：2
- 2007年
- 初步探讨在小鼠受精卵早期发育过程中PKB/Akt对p21蛋白表达及定位的影响。通过显微操作技术注射野生型、持续激活型及激酶失活型的PKB的mRNA,用免疫荧光方法检测p21蛋白的细胞定位、Western blot方法检测p21蛋白的表达。结果显示在注射不同形式的PKB mRNA后p21蛋白的表达无明显差别,但是细胞定位发生改变,PKB被激活后,p21蛋白滞留在胞浆中。因而初步认为在小鼠受精卵中,PKB/Akt通过影响p21的细胞定位而影响细胞周期的进程。
- 武迪迪冯晨刘莹张杰宗志宏具英花李雪松于秉治
- 关键词：蛋白激酶BP21细胞周期小鼠受精卵
- cAMP-PKA途径在小鼠受精卵卵裂中的作用
- 2003年
- 目的 :探讨环腺苷酸 蛋白激酶A(cAMP PKA)途径在小鼠受精卵早期卵裂中的变化规律及作用。方法 :动态观察小鼠 1 细胞期受精卵M期cAMP浓度及PKA、成熟作用促进因子 (MPF)活性变化。并应用cAMP及蛋白激酶抑制剂 (PKI)显微注射入 1 细胞期受精卵内 ,观察卵细胞形态学变化及卵裂率、死亡率。结果 :小鼠受精卵1 细胞期 ,伴随MPF活性变化 ,M期cAMP浓度下降 ,M中期最低 ,M末期升高 ,与PKA趋势一致。cAMP显微注射后卵细胞胞膜及透明带变形 ,形态不规则 ,无卵裂发生 ;PKI显微注射后核不规则分裂增加 ,正常卵裂率下降。两者死亡率均高于对照组。结论 :cAMP注射升高PKA活性可使卵细胞发育迟缓 ,PKI注射抑制PKA活性引起核不规则分裂。
- 王亚杰于爱鸣刘莹赵昕于秉治
- 关键词：蛋白激酶A
- 人牛精浆蛋白相关新基因的cDNA克隆、定位和表达被引量：11
- 2002年
- 为了研究牛精浆 (bovineseminalplasma ,BSP)蛋白及其相关蛋白在受精及受精卵发育中的重要作用 ,寻找BSP蛋白相关新基因 .采用cDNA末端快速扩增 (RACE)技术 ,克隆了一个BSP蛋白相关基因的cDNA序列 .应用辐射杂种细胞系 (RH)技术进行了基因染色体定位 .通过RT PCR检测了该基因在人体各组织中的表达情况 .并将该基因编码的蛋白进行了原核表达 .新基因的cDNA长度为 10 5 2bp ,其开放阅读框架 (ORF)编码了一个含 2 2 3个氨基酸残基的蛋白质 ,氨基酸序列中含有 4个纤连蛋白Ⅱ结构域 ,与BSP蛋白在结构上具有一定的相似性 ,称其为人BSP相关蛋白 (humanBSP relatedproteins ,HBRP) .该基因定位于染色体 19q13,在大肠杆菌中表达为 5 2kD的融合蛋白 .研究结果提示 ,应用RACE方法克隆了一种新的人类与BSP蛋白相关的基因 ,推测其编码蛋白是与BSP蛋白功能相关的结合蛋白 ,通过基因重组技术大量获得表达蛋白 ,对进一步研究新蛋白的生物学功能具有重要的意义 .
- 罗阳张学刘莹姜莉刘兴元于秉治
- 关键词：CDNA克隆
