国家自然科学基金(30500369)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 沙眼衣原体多形态膜蛋白D基因序列分析及其B细胞抗原表位预测被引量：5
- 2008年
- 分析沙眼衣原体多形态膜蛋白D（PmpD）的基因序列并预测PmpD蛋白的B细胞抗原表位。在GenBank中检索沙眼衣原体不同血清型的PmpD基因序列，进行序列比对分析。以L2血清型PmpD基因序列为材料，采用Karplus-Schulz、Chou-Faaman和Gamier-Robson方案预测蛋白质的二级结构和柔性区；按Jamesonv-wolf方案预测抗原指数，运用Kyte-Doolittle方案预测PmpD氨基酸的亲水性，利用Emini方案预测蛋白质的表面可及性。检索到20个沙眼衣原体不同菌株的PmpD基因序列，分析发现其核苷酸序列非常保守，一致性高达99．14％-100％；对预测结果综合分析，推测最有可能的B细胞表位位于PmpDN端的67-74、132-140、335-340、851-861、972-988及1091-1097。多参数方案综合预测PmpD蛋白的B细胞抗原表位，为进一步实验鉴定PmpD抗原表位及其多表位疫苗设计和研究奠定基础。
- 刘光桥宋立华邱少富端青
- 关键词：沙眼衣原体B细胞表位
- 沙眼衣原体多形态膜蛋白D基因的克隆表达及其免疫血清中和作用研究被引量：2
- 2009年
- 通过DNA重组技术表达沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)多形态膜蛋白D(polymorphic membrane protein D,PmpD),用Ct-PmpD重组蛋白(rCt-PmpD)制备免疫兔血清,观察该免疫血清在鸡胚攻毒试验中的保护作用。采用PCR技术从Ct L2型基因组中扩增PmpD基因,连接pET32a(+)表达载体,转化宿主细胞E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达rCt-PmpD,用Ct L2免疫兔血清Western Blot(WB)检测其抗原性。复性后的rCt-PmpD免疫家兔制备免疫血清,免疫荧光法(IF)检测其免疫原性,并用鸡胚攻毒试验检测其中和活性。rCt-PmpD在工程菌中获得高效表达,以包涵体的形式存在胞浆中,WB结果显示rCt-PmpD能被Ct L2免疫兔血清识别。用rCt-PmpD免疫家兔获得的血清在IF中能与Ct L2反应;中和试验表明,rCt-PmpD免疫血清能有效保护鸡胚免于死亡。成功构建重组表达载体rpET32a-PmpD,表达的rCt-PmpD具有良好的免疫原性,rCt-PmpD免疫血清具有中和活性,为进一步研制亚单位疫苗奠定基础。
- 刘光桥马晓红宋立华左庭婷端青
- 关键词：沙眼衣原体原核表达
- 鹦鹉热嗜衣原体两对荧光定量PCR引物的应用与比较被引量：1
- 2009年
- 针对鹦鹉热嗜衣原体(Cps)的主要外膜蛋白(MOMP)基因和多形态膜蛋白(PMP)基因分别设计引物,建立荧光定量PCR方法,比较两对引物的灵敏度和特异性。试验结果表明,两对引物均可用于Cps检测,在样本中靶标浓度高时,PMP引物的检测灵敏度优于MOMP引物;但前者的扩增效率低于后者,后者更适合用于Cps的实时定量PCR检测。相对定量研究表明国内不同Cps流行株的PMP基因在基因组上的拷贝数可能存在较大差异。
- 宋立华何君李岩伟赵海段鸿元朱虹端青
- 关键词：荧光定量PCR主要外膜蛋白
