国家教育部博士点基金(20115503120012)
- 作品数：9 被引量：31H指数：3
- 相关作者：何云锋张尧吴小候蒲军王德林更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金重庆市教委科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNA干扰ROR-γt表达对大鼠肾移植模型中Th17细胞功能和慢性排斥反应的作用被引量：1
- 2016年
- 目的探讨RNA干扰Th17关键转录因子ROR-γt表达后,对大鼠肾移植慢性排斥模型中Th17细胞功能以及慢性排斥反应的影响。方法构建ROR-γt特异性干扰腺病毒,将其通过尾静脉注入大鼠慢性排斥反应模型,监测大鼠血肌酐变化,酶联免疫吸附试验检测Th17相关细胞因子IL-17、IL-6和TNF-γ改变。4周后检测大鼠肾组织病理改变。结果成功构建ROR-γt特异性干扰腺病毒pSES-HUS-ROR-γt。大鼠慢性排斥反应模型尾静脉注入pSES-HUS-ROR-γt,大鼠血清肌酐水平下降,IL-17、IL-6和TNF-γ水平下降,肾小球纤维化病变减轻。结论 pSES-HUS-ROR-γt特异性干扰腺病毒可以抑制Th17细胞功能,减轻肾移植慢性排斥反应。
- 何云锋张尧蒲军王德林李家兵唐亚雄吴小候
- 关键词：TH17
- 抑制C5L2表达对Th17细胞功能和小鼠肾移植急性排斥反应的作用
- 2018年
- 目的:探讨补体C5a关键受体C5L2表达抑制后,对小鼠肾移植急性排斥反应模型中Th17细胞功能以及急性排斥反应的影响。方法:构建特异性C5L2干扰腺病毒,通过小鼠尾静脉注射入小鼠急性肾移植排斥模型,检测其血肌酐,ELSA检测Th17相关细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-17以及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-γ的变化,同时检测小鼠肾组织病理改变。结果:成功建立小鼠急性肾移植排斥模型,将构建的C5L2干扰腺病毒尾静脉注射后,小鼠血清Cr水平下降,IL-6、IL-17以及TNF-γ水平下降,急性排斥反应减轻。结论:特异性C5L2干扰腺病毒可以抑制Th17细胞功能,减轻肾移植急性排斥反应。
- 程洪林何云锋张尧王德林蒲军吴小候
- 关键词：肾移植急性排斥反应TH17腺病毒
- 改良型小鼠肾移植动物模型的建立被引量：1
- 2018年
- 目的:建立一种操作简便、手术时间短、效果确切的小鼠肾移植模型。方法:静脉采用套扎式吻合,将供肾下腔静脉穿过导管,外翻套扎于导管,将其插入受体肾静脉内,套扎受体肾静脉于腔静脉外,完成静脉端端吻合;动脉采用供体腹主动脉与受体腹主动脉端侧吻合,供体膀胱瓣与受体膀胱吻合。结果:开放血管后供肾颜色正常,动脉搏动正常,静脉充盈好,成功建立小鼠肾移植模型,静脉吻合(10±5)min,动脉吻合(10±5)min,膀胱瓣吻合2~5 min,总手术时间40~60 min。结论:采用改良的套扎式原位静脉吻合和膀胱瓣吻合,可以降低手术难度,缩短手术时间,成功建立小鼠肾移植模型。
- 何云锋程洪林张尧王德林蒲军吴小候
- 关键词：小鼠肾移植动物模型
- PBL和LBL教学法在儿童呼吸内科教学中的比较被引量：20
- 2016年
- 随着医学教育的不断改革和发展,问题式学习（problem based learning,PBL）的教学方法在医学教育中得到了广泛的认可。PBL教学方法在各医学院校得到了积极的推广和应用,对教师的相关培训和继续教育也在快速地进行中。
- 田代印何云锋
- 关键词：LBL教学法内科教学问题式学习PBL临床实践能力临床思维
- ROR-γt干扰腺病毒载体抑制Th17细胞功能被引量：1
- 2014年
- 目的:设计和构建ROR-γt特异性干扰腺病毒载体,观察其对大鼠脾脏来源的辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)功能的影响。方法:设计ROR-γt编码区干扰序列,DNA聚合酶作用下形成双链序列,与线性化pSES-HUS质粒连接。转入BJ5183,转染病毒包装体系293细胞系,收集细胞,得到病毒液。反复感染4次得到高滴度pSES-HUS-ROR-γt病毒液。将其感染大鼠脾脏来源的Th17细胞,检测其对Th17细胞功能的影响。结果:成功构建和包装pSES-HUS-ROR-γt干扰腺病毒液,Th17细胞感染pSES-HUS-ROR-γt干扰病毒后,其分泌细胞因子白介素(interleukin,IL)-17、IL-6和TNF-γ水平下降。结论:pSESHUS-ROR-γt干扰腺病毒能够有效抑制Th17细胞功能,可能对肾移植慢性排斥反应具有抑制或者延缓作用。
- 何云锋吴小候李家兵陈刚张尧唐亚雄
- 关键词：腺病毒辅助性T细胞17
- 单壁纳米碳管联合吡柔比星对膀胱肿瘤抑制效应研究
- 2012年
- 目的探讨修饰的单壁纳米碳管联合吡柔比星(SWNT-THP)复合物对膀胱肿瘤抑制效应。方法用磷酸支链乙二醇修饰单壁纳米碳管,构建SWNT-THP复合物。通过流式细胞术探讨SWNT-THP复合物对膀胱癌细胞株(BIU-87细胞)抑制作用,同时研究该复合物对膀胱肿瘤的治疗效果及不良反应。结果 SWNT-THP复合物能够有效地增强THP的抗肿瘤效应(P<0.05)。同时能有效减少THP的不良反应。结论 SWNT为基础的药物载体能够有效提高化疗药物的治疗效果,减少不良反应。在膀胱肿瘤靶向药物输送中将发挥重要的作用。
- 易正金陈刚张尧Shiv Kumar Yadav何云锋
- 关键词：单壁纳米碳管吡柔比星膀胱肿瘤肿瘤抑制
- 增强Foxp3表达对大鼠Treg细胞的功能及移植肾慢性排斥反应的影响
- 2015年
- 目的探讨增强叉状头转录因子3（Foxp3）表达对大鼠肾移植后调节性T淋巴细胞（Treg细胞）的功能及移植肾慢性排斥反应的影响。方法分别以F344大鼠和Lewis大鼠作为供、受鼠，建立肾移植慢性排斥反应模型，慢性移植肾肾病（CAN）的病理诊断标准采用Banff97分级诊断标准。根据基因Bank设计鼠Foxp3编码区引物，构建高表达Foxp3的逆转录病毒。取成功建立肾移植慢性排斥反应模型的受鼠，采用随机数字表法分为3组。（1）实验组：经受鼠尾静脉注入pSCV-BsdRFP-Foxp3病毒液500μl；（2）阴性对照组：经受鼠尾静脉注入pSCV-BsdRFP病毒液500／zl；（3）空白对照组：经受鼠尾静脉注入生理盐水500μl。注射的时间为术后即刻。术后0、1、2、3、4周应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒检测受鼠血清中Treg相关细胞因子IL-10和TGF-β水平；术后4周处死受鼠，取移植肾组织进行病理检查。结果各组受鼠术后4周开始出现CAN的病理改变，术后12周可见典型的慢性排斥反应病变。实验组受鼠的血清IL-10和TGF-β水平均随着术后时间的延长而逐渐增高，至术后3周时达到峰值，术后1、2、3、4周，实验组的血清IL-10和TGF-β水平均显著高于阴性对照组和空白对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）；而阴性对照组与空白对照组受鼠间比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。术后4周，3组受鼠的移植肾组织均可见不同程度的血管内膜增厚、肾小球硬化及轻度的间质纤维增生，并有淋巴细胞和浆细胞浸润，其中以实验组病变程度最轻，并出现明显的血管内膜增生。结论增强Foxp3表达可以缓解大鼠肾移植慢性排斥反应的发展，可能对大鼠肾移植慢性排斥反应有治疗作用。
- 何云锋张尧吴小候李家兵唐亚雄
- 关键词：肾移植
- Foxp3逆转录病毒表达载体增强Treg细胞功能被引量：3
- 2015年
- 目的构建Treg(regulatory T cell)细胞关键转录因子Foxp3逆转录病毒表达载体,并将其转染和稳定表达于Treg细胞中,检测Treg细胞因子改变。方法设计编码区全长序列引物,Hi Fi PCR(high fidelity reverse transcription polymerase chain reaction)扩增编码区序列。胶回收PCR产物,将PCR产物与线性化p SCV-Bsd RFP质粒连接并测序鉴定。将p SCV-Bsd RFP质粒电转入骨架质粒BJ5183,将其转染293病毒包装细胞体系,包装病毒。反复感染4次得到高滴度p SCV-Bsd RFP-Foxp3逆转录病毒液。将此高表达逆转录病毒命名为p SCV-Bsd RFP-Foxp3,感染大鼠脾脏来源Treg细胞,G418筛选稳定表达细胞株。ELISA(enzymelinked immunosorbent assay)检测Treg细胞因子IL-10和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的改变。结果 Hi Fi PCR得到编码区全长序列DNA,连接到p SCV-Bsd RFP质粒,测序鉴定扩增序列符合编码区序列。p SCV-Bsd RFP质粒成功转染BJ5183后,转染293病毒包装体系,可见感染细胞有红色荧光表达。p SCV-Bsd RFP-Foxp3病毒感染Treg细胞稳定表达后,可见细胞内红色荧光表达。IL-10和TGF-β表达增强。结论成功构建Foxp3高表达逆转录病毒p SCV-Bsd RFP-Foxp3,转染大鼠脾脏来源Treg细胞并得到稳定高表达Foxp3的Treg细胞。p SCV-Bsd RFP-Foxp3可增强Treg细胞分泌IL-10和TGF-β功能。
- 何云锋吴小候唐伟尹志康蒲军张尧
- 关键词：逆转录病毒FOXP3质粒TREG
- miRNA沉默ILK基因对人膀胱癌T24细胞侵袭功能的影响被引量：5
- 2012年
- 探讨基因沉默整合素连接激酶(integrin linked kinase,ILK)基因后,对膀胱癌T24细胞侵袭功能的影响.将构建的ILK mi RNA(ILK micro RNA)转染质粒转染膀胱癌细胞株T24,RT-PCR(reverse transcriptase-polymerase chain reaction)检测质粒转染后ILK基因的表达变化,Western blot检测蛋白的表达变化,异质粘附实验和Transwell小室实验检查ILK基因沉默后膀胱癌侵袭作用的变化.结果发现实验组ILK基因和蛋白表达明显下降,异质粘附实验结果显示实验组干吸光度A值为0.21±0.05,而阴性质粒组和空白对照组吸光度A值分别为0.67±0.08和0.63±0.04,有统计学意义(P<0.05).Transwell小室实验结果显示,实验组细胞穿膜数为(7.2±1.1)/HP.而阴性质粒组和空白对照组细胞穿膜数分别为(15.4±1.6)/HP和(13.2±1.2)/HP,有统计学意义(P<0.05).结果表明沉默ILK能降低膀胱癌细胞株T24的侵袭力.
- 易正金何云锋王勇高飞雷波
- 关键词：整合素连接激酶膀胱癌
