四川省科技攻关计划(0040205301469)
- 作品数：8 被引量：25H指数：4
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- 缺氧不同时间对人胚肺成纤维细胞RHO/RHO激酶信号通路及CTGF表达的影响被引量：4
- 2010年
- 目的观察不同时点低氧条件下,对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)RHO/RHO激酶信号通路、结缔组织生长因子(CTGF)表达及Ⅰ型胶原(ColⅠ)合成的影响并探讨其可能机制。方法以MRC-5为研究对象,在常氧和缺氧(37℃、5%CO2、2%O2、93%N2)条件下分别孵育MRC-5细胞0、1.5、3、6、12、24、48、60h,用Westernblot法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、RhoA、ROCK1、CTGF蛋白的表达;RT-PCR技术检测HIF-1α、ROCK1、CTGF及ColⅠmRNA的表达;ELISA法测定细胞上清ColⅠ的表达。结果①体外培养的MRC-5细胞在常氧条件下表达基础水平的RhoA、ROCK1、CTGF,在低氧条件下RhoA、ROCK1、CTGF的蛋白表达水平增强(P<0.01),具有时间依赖性,以60h表达最高,且在低氧条件下,不同时点MRC-5细胞的RhoA、ROCK1蛋白表达水平与CTGF蛋白表达水平呈正相关关系。②与常氧对照组比较,低氧作用1.5h后即出现ROCK1、CTGF、ColⅠmRNA的表达上调(P<0.01),并随着低氧作用时间延长而逐渐增强,以60h表达最高;③与常氧对照组比,在低氧条件下,不同时点MRC-5细胞分泌ColⅠ均增加,以24h最高。结论缺氧不同时间均可上调细胞CTGF在mRNA和蛋白水平的表达、增加ColⅠ的合成,其机制可能部分是通过激活RHO/RHO激酶信号通路及上调HIF-1α的表达促发CTGF的高表达进而引发肺成纤维细胞细胞外基质表达增加等一系列促纤维化反应。
- 高艳谢敏何正平张旭郑家群
- 关键词：低氧人胚肺成纤维细胞低氧诱导因子-1ΑRHOA
- 低氧对大鼠肺组织结构的影响及其机制的探讨被引量：4
- 2012年
- 目的观察间歇性常压低氧对SPF级SD大鼠肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、通道蛋白Smad4、Ⅰ型胶原、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及肺组织结构的影响。方法将SD大鼠置于常氧或间歇性常压低氧(101kPa,10%O2,每天低氧8h)条件下,分别于3、7、14、21d每组处死5只大鼠,HE染色观察肺组织病理改变,免疫组化染色检测肺组织TGF-β1、Ⅰ型胶原表达,RT-PCR检测TGF-β1、Ⅰ型胶原的mRNA表达量,Westernblot法检测Smad4通道蛋白的表达,ELISA法检测肺泡灌洗液中TNF-α的表达。结果 HE染色提示低氧第3d低氧组大鼠肺组织即出现轻度水肿及炎症细胞浸润,且随低氧时间延长,炎症反应加重,肺泡间隔逐渐增厚;低氧组大鼠肺组织中TGF-β1、Smad4、Ⅰ型胶原蛋白表达量及TGF-β1mRNA、Ⅰ型胶原mRNA均较对照组高(P<0.01),随低氧时间延长,各因子表达量逐渐增高,且Smad4蛋白表达水平与TGF-β1表达水平呈正相关(r=0.944,P<0.01);肺泡灌洗液中TNF-α表达量较对照组高(P<0.01)。结论低氧可能通过诱发肺组织水肿及炎症反应,上调TNF-α水平、激活TGF-β1/Smads通路从而增加Ⅰ型胶原合成,引发细胞外基质沉积,肺泡间隔增厚。
- 张旭谢敏高艳魏华华郑家群
- 关键词：低氧转化生长因子-Β1SMADSSMAD4
- 低氧致大鼠凝血功能异常对肺组织结构的改变及灯盏花素对其的拮抗作用被引量：2
- 2014年
- 目的研究不同低氧时间作用下大鼠肺组织中纤溶酶原激活物抑制物（PAI-1）、活化蛋白酶C（APC）表达量及肺组织结构的变化及灯盏花素对上述改变的影响。方法选取80只SD大鼠,将其随机分为：A（常氧对照）组、B（单纯低氧）组、C（低氧＋低剂量灯盏花素）组、D（低氧＋高剂量灯盏花素）组。各低氧组每天置于常压性低氧（101kPa、10%O2）环境中处理8h,低剂量及高剂量灯盏花素组分别给予腹腔注射10mg/kg体质量、40mg/kg体质量的灯盏花素。于实验第3、7、14、21d每组随机处死5只大鼠,HE染色观察肺组织病理改变,RTPCR检测转化生长因子β1（TGF-β1）、PAI-1的mRNA表达量,Western blot法检测PAI-1蛋白的表达量,ELISA法检测肺泡灌洗液（BALF）中APC蛋白的表达量。结果①HE染色提示3~21d低氧环境下肺泡间隔有不同程度增厚。3~21d,B组大鼠肺组织中TGF-β1、PAI-1的mRNA表达量及PAI-1蛋白表达量均较A组增高（P〈0.05）,BALF中APC蛋白的表达量较A组降低（P〈0.05）,且随着低氧时间延长,上述变化越显著。PAI-1mRNA与TGF-β1表达水平呈正相关（r=0.913,P〈0.05）。②与B组比较,C、D组21d时肺泡间隔增厚程度减轻,TGF-β1、PAI-1的mRNA表达量及PAI-1蛋白表达量降低（P〈0.05）,BALF中APC蛋白的表达量增加（P〈0.05）,且D组变化较C组明显（P〈0.05）。结论低氧可能造成凝血功能异常,使凝血活性增高,纤溶活性及抗凝活性降低,上调PAI-1水平及下调APC水平致肺泡间隔增厚,其机制可能与TGF-β1信号通路有关。而灯盏花素可以改善低氧所致的高凝状态,减轻肺泡间隔增厚。
- 黄建戈谢敏张旭何秋颖何高燕
- 关键词：低氧血液凝固灯盏花素
- 灯盏花素对低氧诱导的大鼠肺泡炎症及细胞外基质沉积的作用被引量：2
- 2018年
- 目的观察间歇性常压性低氧对大鼠肺组织中TGF-β1、Smad4蛋白、Col I、TNF-α表达量的影响及灯盏花素对其的干预作用。方法将80只SPF级SD大鼠随机分为对照组、单纯低氧组、低氧+低剂量灯盏花素组,低氧+高剂量灯盏花素组,分别置于常氧或间歇性常压性低氧(101kPa,10%O2,每天低氧8h)条件下,于3、7、14、21d每组随机处死5只大鼠。HE染色观察肺组织病理改变;免疫组化染色检测肺组织TGF-β1、Col I表达;Western-blot法检测Smad4通道蛋白的表达;RT-PCR检测TGF-β1、Col I的mRNA表达量;ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α的表达。结果 HE染色结果显示低氧可引起大鼠肺组织水肿及炎症细胞浸润,且随低氧时间延长,炎症反应加重,肺泡间隔逐渐增厚,而药物干预组水肿、炎症反应及间隔增厚程度均较单纯低氧组轻;单纯低氧组大鼠肺组织中TGF-β1、Smad4、Col I蛋白及TGF-β1mRNA、Col I mRNA表达量均较对照组增高(P<0.01),随低氧时间延长,各因子表达量逐渐增高,且Smad4蛋白表达水平与TGF-β1表达水平呈正相关(r=0.944,P<0.01),BALF中TNF-α的表达上调(P<0.01)。药物干预组TGF-β1、Smad4、Col I及TNF-α蛋白、Col I mRNA的表达量均较单纯低氧组下调(P<0.05),且低氧+高剂量灯盏花素组较低氧+低剂量灯盏花素组降低(P<0.05),但TGF-β1mRNA的表达量单纯低氧、低氧+低剂量灯盏花素、低氧+高剂量灯盏花素三组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论低氧可能通过诱发肺泡水肿及炎症反应,上调TNF-α水平、激活TGF-β1/Smads通路从而增加Col I合成,引发细胞外基质沉积;灯盏花素则通过调节TGF-β1及Smad4蛋白表达,下调Col ImRNA及蛋白表达,并降低TNF-α水平,抑制低氧诱导的肺组织结构改变。
- 张旭魏华华谢敏王永生
- 关键词：低氧SMADSSMAD4
- 非小细胞肺癌血清外泌体miR-152-5p和AGAP2-AS1水平变化及其预后评估价值被引量：3
- 2021年
- 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)血清外泌体miR-152-5p和AGAP2-AS1水平变化及其预后评估价值。方法选取成都市第一人民医院2014年6月~2016年12月收治的120例NSCLC患者临床资料(NSCLC组),另选择60例同期于本院进行体检的健康人群作为对照组。分离并鉴定血清外泌体,通过RT-PCR检测miR-152-5p和lncRNA AGAP2-AS1表达水平,分析NSCLC患者血清外泌体miR-152-5p和lncRNA AGAP2-AS1水平变化,探讨其与临床病理特征的关系。依照NSCLC患者随访3年预后情况,将患者分为生存组与死亡组,分析血清外泌体miR-152-5p和lncRNA AGAP2-AS1在非小细胞肺癌中的诊断及预后评估价值。结果NSCLC组患者miR-152-5p表达水平低于对照组,lncRNA AGAP2-AS1表达水平高于对照组(P<0.05);miR-152-5p、lncRNA AGAP2-AS1联合检测诊断NSCLC的发生ROC曲线下面积高于单独检测ROC曲线下面积(P<0.05);不同性别、年龄NSCLC患者miR-152-5p、lncRNA AGAP2-AS1表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);临床分期Ⅲ~Ⅳ期、局部浸润T3~T4、发生淋巴结转移患者miR-152-5p表达低于Ⅰ~Ⅱ期、局部浸润T1/T2、无淋巴结转移患者,lncRNA AGAP2-AS1表达高于Ⅰ~Ⅱ期、局部浸润T1~T2、无淋巴结转移患者(P<0.05);miR-152-5p、lncRNA AGAP2-AS1联合检测判断NSCLC患者Ⅰ~Ⅱ期与Ⅲ~Ⅳ期ROC曲线下面积高于单独检测ROC曲线下面积(P<0.05)。随访3年,120例NSCLC患者中共有5例失访,其余115例患者中生存组患者66例,死亡组患者49例,生存组miR-152-5p表达量高于死亡组,lncRNA AGAP2-AS1表达量低于死亡组(P<0.05);miR-152-5p、lncRNA AGAP2-AS1联合检测判断NSCLC预后ROC曲线下面积高于单独检测ROC曲线下面积(P<0.05)。结论NSCLC患者血清外泌体miR-152-5p呈现低表达,lncRNA AGAP2-AS1呈现高表达,二者表达水平与NSCLC临床分期、肿瘤浸润、淋巴结转移有关,在患者疾病诊断与预后评估中具有重要价值。
- 张旭魏华华王伟石俊青张艺凡
- 关键词：非小细胞肺癌预后
- 灯盏细辛对低氧环境下肺成纤维细胞Ⅰ型胶原、MMP1和TIMP1表达的干预作用被引量：3
- 2012年
- 目的研究灯盏细辛对低氧环境下肺成纤维细胞Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶1(MMP1)和金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)表达的影响。方法以人胚肺成纤维细胞系MRC-5为研究对象,Western blot法检测常氧、低氧、丝/苏氨酸激酶抑制剂星型孢菌素(straurosporine,SP)、灯盏细辛作用下MRC-5缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1alpha,HIF-1α)、Ⅰ型胶原前α1链(pro-col1α1)、p-smad2蛋白的表达,ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅰ型胶原、MMP1和TIMP1蛋白的含量。结果体外培养的MRC-5,常氧环境下细胞内表达一定的pro-col1α1、p-smad2蛋白,几乎不表达HIF-1α,细胞外基质有较低水平的Ⅰ型胶原、MMP1和TIMP1蛋白表达;低氧环境下细胞内pro-col1α1、p-smad2蛋白、HIF-1α和细胞外基质Ⅰ型胶原、MMP1和TIMP1均较常氧组表达增加(P<0.05);SP(5nmol/L)预处理细胞30min与单纯低氧组比较,其胞内的p-smad2蛋白、pro-col1α1和基质中的Ⅰ型胶原、TIMP1降低(P<0.05),而基质中的MMP1表达增加(P<0.05);灯盏细辛组(12.5μg/mL、50μg/mL)与单纯低氧组比较其胞外的Ⅰ型胶原、MMP1、TIMP1蛋白和胞内的HIF-1α、pro-col1α1和p-smad2蛋白表达均有降低(P<0.05)。结论灯盏细辛可降低低氧环境下HIF-1α蛋白的表达,并部分通过p-smad2信号通路抑制Ⅰ型胶原、TIMP1蛋白生成。
- 郑家群谢敏高艳张旭
- 关键词：灯盏细辛基质金属蛋白酶1
- Rho/Rho激酶信号通路在低氧致肺纤维化中的作用及法舒地尔的干预效应被引量：5
- 2010年
- 目的观察人胚肺成纤维细胞低氧培养24h对致纤维化相关因子表达的影响及不同浓度法舒地尔(6、12、25μmol/L)的干预作用。方法以人胚肺成纤维细胞(MRC-5)为研究对象,体外构建以HIF-1α蛋白的高表达为特征的低氧微环境,低氧(37℃、5%CO2、2%O2、93%N2)培养0、6、12、24h,Westernblot法检测各低氧时间点RhoA、ROCK1、CTGF蛋白的表达及以低氧24h为对照组,观察低氧24h下不同浓度法舒地尔对结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达的影响;RT-PCR、MTT法分别检测低氧24h下不同浓度法舒地尔对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)CTGF mRNA表达和细胞活力的影响,均以低氧24h为对照组。以常氧(21%O2,74%N2,5%CO2)24h及低氧24h为对照,ELISA法测定低氧24h下不同浓度法舒地尔对细胞上清Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达的影响。结果①随着低氧作用时间延长,RhoA、ROCK1、CTGF蛋白表达上调并逐渐增强。②低氧24h下不同浓度法舒地尔(6、12、25μmol/L)对CTGF蛋白及mRNA水平均有抑制作用(P<0.05,P<0.01)。③与低氧24h对照组比较,低氧24h下不同浓度法舒地尔(6、12、25μmol/L)均对细胞上清ColⅠ的合成及细胞增殖活性均有抑制作用(P<0.01)。结论低氧可能是通过激活Rho/Rho激酶信号通路促发CTGF的高表达进而引发肺成纤维细胞细胞外基质表达增加等一系列促纤维化反应,而法舒地尔通过抑制Rho/Rho激酶信号通路来干预低氧致纤维化因子的转录和表达。
- 高艳谢敏石俊青
- 关键词：法舒地尔低氧人胚肺成纤维细胞
- 苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞增殖、结缔组织生长因子和低氧诱导因子1α表达的影响被引量：4
- 2010年
- 目的研究不同浓度苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞株MRC-5的增殖及结缔组织生长因子(CTGF)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法采用MRC-5常规体外培养传代,细胞培养至80%融合时,将细胞分组,分别在常氧(21%O2,74%N2,5%CO2)及低氧(1%O2,94%N2,5%CO2)下采用不同浓度苦参碱(终浓度0～3.2mmol/L)干预24h。按培养条件不同分为8组:常氧组(N0组)、常氧+苦参碱0.2mmol/L组(N0.2组)、常氧+苦参碱0.4mmol/L组(N0.4组)、常氧+苦参碱0.8mmol/L组(N0.8组)、低氧组(H0组)、低氧+苦参碱0.2mmol/L组(H0.2组)、低氧+苦参碱0.4mmol/L组(H0.4组)和低氧+苦参碱0.8mmol/L组(H0.8组)。采用四氮甲基唑蓝比色法(MTT法)检测细胞活性,采用Westernblot法检测细胞CTGF、HIF-1α蛋白表达情况。结果低氧对各组细胞增殖有促进作用(P<0.05);苦参碱对常氧及低氧下细胞增殖有抑制作用(P<0.05),具有浓度依赖性。CTGF、HIF-1α在常氧下有低水平表达,低氧下表达明显增强(P<0.01);苦参碱对常氧及低氧下CTGF、HIF-1α的表达均有抑制作用(P<0.05)。结论苦参碱对常氧及低氧下培养的MRC-5细胞增殖有抑制作用,对细胞CTGF和HIF-1α表达有抑制作用,且具有一定浓度依赖性。
- 蒋云燕谢敏
- 关键词：苦参碱人肺成纤维细胞结缔组织生长因子低氧诱导因子1Α
