黑龙江省自然科学基金(ZJY04-04)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：姜晓峰王育文许勇臣梁红艳薛丽更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学附属第二医院哈尔滨医科大学附属第四医院哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- IL-13及其变异体真核表达载体的构建表达与亚细胞定位
- 2006年
- 目的:体外构建野生型人白细胞介素-13(whIL-13)及变异型人白细胞介素-13(mhIL-13)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融和蛋白真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位。方法:以RT-PCR方法扩增whIL-13、mhIL-13全长编码基因,构建EGFP-whIL-13、EGFP-mhIL-13融和蛋白真核表达载体,转染C0S-7细胞,以激光扫描共聚焦显微镜观察融合蛋白的表达及其在细胞内的分布情况。结果:两种融和蛋白表达载体均构建正确,将其转染COS-7细胞后,在阳性克隆胞浆内均可见明亮的绿色荧光,胞核空虚。结论:成功构建EGFP-whIL-13、EGFP-mhIL-13融和蛋白表达载体,并在COS-7细胞中得到表达,表达的两种融和蛋白细胞内分布特征没有区别,均位于胞浆内。
- 王育文许勇臣姜晓峰
- 关键词：白细胞介素-13变异体绿色荧光蛋白
- IL-13及其变异体对气道平滑肌细胞信号传导的影响被引量：5
- 2006年
- 目的探讨野生型人IL-13(whIL-13)及其变异体(mhIL-13,Arg130Gln)对培养的气道平滑肌细胞(AM-SCs)信号传导的影响。方法利用不同浓度的whIL-13及mhIL-13分别对AMSCs进行刺激,收集细胞,流式细胞仪检测STAT-6磷酸化情况,从而判断这两种蛋白分子在信号传导上的差异。结果whIL-13及mhIL-13引起的STAT-6磷酸化随浓度增加而增强。mhIL-13在较低浓度(0.3 ng/ml)即可引起STAT-6磷酸化,而whIL-13则需要更高浓度(1 ng/ml);相同浓度时STAT-6磷酸化情况在两种蛋白分子间具有显著性差异;mhIL-13作用强度大约为whIL-13分子的3-5倍。结论mhIL-13分子致气道平滑肌细胞STAT-6磷酸化能力明显强于whIL-13,低浓度mhIL-13即可在体外培养的AMSCs中引起信号传导。
- 王育文许勇臣姜晓峰
- 关键词：变异体气道平滑肌细胞信号传导
- 白细胞介素13及变异体刺激呼吸道平滑肌后差异蛋白分析
- 2007年
- 目的应用双向电泳及质谱技术对野生型及变异型白细胞介素13(IL-13)刺激后的ASMC 总蛋白进行差异比较研究,借此分析差异表达蛋白与支气管哮喘的关系,为哮喘的治疗提供新的靶标。方法用固相 pH 双向电泳分离,分别给予野生型 IL-13及变异型 IL-13刺激的 ASMC 总蛋白组成分,找出异常 IL-13处理后与野生型 IL-13处理后有明显差别的蛋白斑点,用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF)进行鉴定部分差异蛋白质。结果获得了分辨率高,重复性好的电泳图谱,在野生型 IL-13刺激组和变异型 IL-13刺激组分别平均有(840±21)个和(892±17)个蛋白点(n=3)被检测,匹配的点数为(685±19)个,选取5个未匹配点做质谱分析,鉴定其中3个分别为 stathmin 1,Ribosomal protein p0,NADH dehydrogenase。结论本研究结果显示不同处理组的ASMC 总蛋白表达存在差异,这些差异蛋白有可能为阐明野生型 IL-13及其变异体引发哮喘机制提供新的实验证据。
- 姜晓峰郭晓英梁红艳杜雪飞辛瑜薛丽傅松滨
- 关键词：白细胞介素13肌细胞平滑肌电泳
