中国人民解放军总后勤部青年基金(01Q143)
- 作品数：11 被引量：16H指数：3
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- ag85a-卡介苗重组疫苗的构建、免疫原性及抗结核作用的初步研究
- 2009年
- 目的构建结核分枝杆菌ag85a-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性或治疗性疫苗。方法通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原Ag85A的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,采用电穿孔技术导入卡介苗中,应用PCR扩增、PAGE电泳鉴定重组卡介苗。通过ELISA法检测其免疫小鼠血清中特异性抗体,用MTS法分析其脾淋巴细胞增殖指数。通过观察ag85a-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、大体病变、T细胞及B细胞免疫功能等指标评价ag85a-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防效果。结果PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定、PAGE电泳表明成功地构建了ag85a基因pYUB295重组质粒,Ag85A蛋白在卡介苗中分泌表达。重组卡介苗免疫原性试验表明:ag85a-卡介苗重组疫苗免疫组小鼠有Ag85A特异性抗体产生,45天时达到最高水平。脾淋巴细胞增殖试验表明刺激指数均达2.0以上,ag85a-卡介苗重组疫苗免疫组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数与对照组无明显区别。预防试验表明:ag85a-卡介苗重组疫苗组、卡介苗组与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率。结核分支杆菌攻击后2个月,处死小鼠时,小鼠脏器大体病变、脏器培养、抗体检测结果及淋巴细胞增殖实验表明:各组间无显著差别。结论正确构建了ag85a-卡介苗重组疫苗,ag85a-卡介苗重组疫苗与卡介苗对结核分枝杆菌感染的预防作用基本相同。
- 张灵霞董恩军吴雪琼
- 关键词：结核分枝杆菌
- Ag85b-卡介苗重组疫苗的构建及鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的构建结核分枝杆菌Ag85b-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性和治疗性疫苗。方法通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原Ag85b的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,通过电穿孔技术导入卡介苗中,应用PCR扩增、PAGE电泳鉴定重组卡介苗。结果通过PCR扩增获得Ag85b基因,与穿梭表达载体pYUB295重组后,通过PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定表明成功地构建了Ag85b基因pYU295重组质粒。将重组质粒通过电穿孔导入卡介苗,重组卡介苗在抗性培养基上生长良好。pYUB295-Ag85b重组卡介苗基因组DNA的PCR扩增以及培养上清液的PAGE电泳表明:Ag85b-卡介苗重组疫苗构建正确,Ag85b蛋白在卡介苗中分泌表达。结论成功构建了Ag85b-卡介苗重组疫苗。
- 张灵霞吴雪琼董恩军
- 关键词：结核分枝杆菌卡介苗重组疫苗
- 四种卡介苗重组疫苗对小鼠免疫原性的研究被引量：1
- 2010年
- 目的研究esat6-卡介苗重组疫苗、mpt64-卡介苗重组疫苗、ag85a-卡介苗重组疫苗、ag85b-卡介苗重组疫苗的免疫原性。方法通过ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体,用MTS法分析其脾淋巴细胞增殖指数。结果以生理盐水、卡介苗为对照,用各卡介苗重组疫苗免疫小鼠后,各组小鼠体重变化与对照组相比差异无统计学意义。应用不同抗原检测各组小鼠不同时间采集的血清,各组有其特异性抗体产生;ag85a-卡介苗重组疫苗能提高卡介苗刺激B细胞产生抗体的水平;各卡介苗重组疫苗免疫后15d,抗体水平已有升高,45d时达到最高水平。用不同抗原刺激各组小鼠脾淋巴细胞,平均刺激指数均达2.0以上,esat6-卡介苗重组疫苗组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数稍高,其它各组之间差异无统计学意义。结论结核分枝杆菌esat6、mpt64、ag85a、ag85b基因在卡介苗中都能够表达特异的蛋白,刺激小鼠产生特异性抗体,均能刺激T淋巴细胞产生细胞免疫。
- 张灵霞吴雪琼董恩军
- 关键词：结核分枝杆菌淋巴细胞增殖
- Ag85a-卡介苗重组疫苗的构建及鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的构建结核分枝杆菌ag85a-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性或治疗性疫苗。方法通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原Ag85a的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,通过电穿孔技术导入卡介苗中,应用PCR扩增、PAGE电泳鉴定重组卡介苗。结果通过PCR扩增获得约800bp的ag85a基因,与穿梭表达载体pYUB295重组后,通过PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定表明ag85a基因正确插入到pYUB295质粒中。将重组质粒通过电穿孔导入卡介苗,重组卡介苗在抗性培养基上生长良好。pYUB295-ag85a重组卡介苗基因组DNA的PCR扩增以及培养上清液的PAGE电泳表明:ag85a-卡介苗重组疫苗构建正确,Ag85a蛋白在卡介苗中分泌表达。结论成功构建了ag85a-卡介苗重组疫苗。
- 张灵霞吴雪琼董恩军
- 关键词：结核分枝杆菌卡介苗重组疫苗
- Ag85a-卡介苗重组疫苗对结核病预防及治疗作用的研究被引量：2
- 2009年
- 目的评价Ag85a-卡介苗重组疫苗对结核病预防及治疗效果,期望得到对结核病的预防效果强于卡介苗的重组疫苗。方法观察Ag85a-卡介苗重组疫苗对结核分支杆菌感染的预防试验和治疗实验中实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、大体病变、T细胞及B细胞免疫功能等指标评价各卡介苗重组疫苗的抗结核作用。结果用Ag85a-卡介苗重组疫苗对结核分支杆菌感染进行预防,Ag85a-卡介苗重组疫苗及卡介苗与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率。结核分枝杆菌攻击后2个月,处死小鼠时,Ag85a-卡介苗重组疫苗免疫组小鼠脏器与其他各组之间无显著差别。各组小鼠脏器研磨、消化后稀释为不同梯度进行培养Ag85a-卡介苗重组疫苗免疫小鼠肺脏结核分支杆菌生长的最低稀释度主要集中在10-5,肝、脾结核分枝杆菌生长的最低稀释度主要集中在10-4。抗体检测结果及淋巴细胞增殖实验各组间无显著差别。卡介苗重组疫苗对结核病的治疗试验结果中半数死亡时间与2个月内的死亡率反而不如预防的效果,说明卡介苗或卡介苗重组疫苗等活体疫苗作为结核病治疗性疫苗无明显的治疗效果。结论初步实验表明:Ag85a-卡介苗重组疫苗对结核分支杆菌感染的预防作用与卡介苗无显著区别,卡介苗或Ag85a-卡介苗重组疫苗等活体疫苗作为结核病治疗性疫苗无明显的治疗效果。
- 张灵霞吴雪琼董恩军
- 关键词：结核分枝杆菌
- mpt64-卡介苗重组疫苗对结核病预防作用的研究
- 2008年
- 目的评价mpt64-卡介苗重组疫苗对结核病预防效果。方法观察mpt64-卡介苗重组疫苗对结核分支杆菌感染的预防试验中实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、大体病变、T细胞及B细胞免疫功能等指标评价mpt64-卡介苗重组疫苗对结核分支杆菌的预防效果。结果用mpt64-卡介苗重组疫苗对分支杆菌感染进行预防,mpt64-卡介苗重组疫苗组及卡介苗组与生理盐水对照组比较都能延长结核分支杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月的死亡率。结核分支杆菌攻击后2个月,处死小鼠时,mpt64-卡介苗重组疫苗组小鼠脏器与其他各组之间差异无统计学意义。各组小鼠脏器研磨、消化后稀释为不同梯度进行培养,mpt64-卡介苗重组疫苗小鼠肺结核分支杆菌生长的最低稀释度主要集中在10-5,肝、脾结核分支杆菌生长的最低稀释度主要集中在10-4。抗体检测结果及淋巴细胞增殖实验各组间差异无统计学意义。结论初步实验表明:mpt64-卡介苗重组疫苗对结核分支杆菌感染的预防作用与卡介苗差异无统计学意义。
- 张灵霞吴雪琼董恩军
- 关键词：结核卡介苗
- mpt64-卡介苗重组疫苗免疫原性研究被引量：3
- 2008年
- 目的研究mpt64-卡介苗重组疫苗的免疫原性。方法以生理盐水、卡介苗、mpt64-卡介苗重组疫苗免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体,MTS法分析小鼠脾淋巴细胞增殖指数。结果mpt64-卡介苗重组疫苗组小鼠体重变化与对照组相比,无显著性差异。应用不同抗原检测各组小鼠不同时间采集的血清,mpt64-卡介苗重组疫苗组有MPT64特异性抗体产生,而卡介苗组无MPT64特异性抗体产生;卡介苗、mpt64-卡介苗重组疫苗免疫后15d,抗体水平已有升高,45d达到最高水平。用不同抗原刺激实验组及对照组小鼠脾淋巴细胞,平均刺激指数均达2.0以上。结论结核分枝杆菌mpt64基因在卡介苗中能够表达特异的蛋白,刺激小鼠产生特异性抗体。
- 张灵霞吴雪琼董恩军
- 关键词：结核分枝杆菌淋巴细胞增殖
- Ag85B-卡介苗重组疫苗对结核病预防及治疗效果研究被引量：1
- 2014年
- 目的评价Ag85B-卡介苗重组疫苗对结核病的预防及治疗效果。方法将小鼠随机分为6组,A、B、C为预防组,D、E、F为治疗组,A、D组为Ag85B-卡介苗重组疫苗免疫组,B、E组为BCG免疫组,C、F组为生理盐水对照组。通过研究各组小鼠在实验中的血清抗体水平、细胞免疫功能等指标以及体重变化、半数死亡时间、2个月死亡率、大体病变等,评价Ag85B-卡介苗重组疫苗在小鼠结核分枝杆菌感染的预防及治疗成效。结果在注射结核分枝杆菌后,各组小鼠体重平均增长明显减慢,C、F组增长最慢。A、B、D、E组与C、F组相比能延长半数死亡时间,降低一定时间内的死亡率。小鼠脏器大体病变各组之间无显著差别。A、B、D、E 4组小鼠,肺脏的结核分枝杆菌生长培养最低稀释度集中在105,肝脏、脾脏结核分枝杆菌生长培养最低稀释度集中在104。C、F组小鼠,肺脏结核分枝杆菌生长的培养最低稀释度集中在106,肝脏、脾脏结核分枝杆菌生长的培养最低稀释度集中在105。各组间的抗体检测及淋巴细胞增殖实验结果无显著差别。结论 Ag85B-卡介苗重组疫苗与卡介苗对于结核分枝杆菌感染的预防作用无显著区别,Ag85B-卡介苗重组疫苗和卡介苗对结核病无明显的治疗效果。
- 丹子军张灵霞吴雪琼董恩军
- 关键词：卡介苗抗结核作用免疫原性
- Esat6-卡介苗重组疫苗的构建免疫原性及抗结核作用的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的构建结核分枝杆菌esat6-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性或治疗性疫苗。方法通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原esat6的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,采用电穿孔技术导入卡介苗中,应用聚合酶链反应(PCR)扩增、聚丙烯酰胺凝胺电泳(PAGE)鉴定重组卡介苗。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其血清中特异性抗体,用MTS法分析其脾淋巴细胞增殖指数。通过观察esat6-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防试验中实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、大体病变、T细胞及B细胞免疫功能等指标评价esat6-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防效果。结果PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定、PAGE电泳表明成功地构建了esat6基因pYUB295重组质粒,ESAT6蛋白在卡介苗中分泌表达。重组卡介苗免疫原性试验表明:esat6-卡介苗重组疫苗组有ESAT6特异性抗体产生,45d时达到最高水平。脾淋巴细胞增殖试验表明各组刺激指数均达2.0以上,esat6重组卡介苗免疫组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数稍高于对照组。预防试验表明:esat6-卡介苗重组疫苗组、卡介苗组与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率。其中esat6-卡介苗重组疫苗组效果显著,与卡介苗组比有显著差异。结核分支杆菌攻击后2个月,处死小鼠时,小鼠脏器大体病变及脏器培养结果表明:esat6-卡介苗重组疫苗免疫组小鼠比其他各组小鼠结核菌的负荷轻。抗体检测结果及淋巴细胞增殖实验各组结果差异无统计学意义。结论正确构建了esat6-卡介苗重组疫苗,esat6-卡介苗重组疫苗能提高卡介苗对结核分枝杆菌感染的预防作用。
- 张灵霞吴雪琼董恩军
- 关键词：卡介苗疫苗抗结核药
- 四种卡介苗重组疫苗对结核病的预防作用被引量：5
- 2011年
- 目的:评价esat6-卡介苗重组疫苗、mpt64-卡介苗重组疫苗、ag85a-卡介苗重组疫苗、ag85b-卡介苗重组疫苗对结核病预防效果。方法:观察四种卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防试验中实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、T细胞及B细胞免疫功能等指标。结果:卡介苗重组疫苗及卡介苗与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率。其中esat6-卡介苗重组疫苗组效果最显著,与卡介苗组比差异有统计学意义。实验结束时,esat6-卡介苗重组疫苗组小鼠脏器大体病变较其他各组轻。脏器结核分枝杆菌培养结果表明:esat6-卡介苗重组疫苗组小鼠脏器内结核分枝杆菌较少,其他各组间无显著区别。抗体检测结果表明,ag85a-卡介苗重组疫苗免疫小鼠抗体水平显著升高,其他各组之间无差别。淋巴细胞增殖实验结果,各组之间差异无统计学意义。结论:初步实验结果表明esat6-卡介苗重组疫苗对结核菌的预防作用强于卡介苗。
- 张灵霞吴雪琼董恩军
- 关键词：卡介苗
