国家高技术研究发展计划(2012AA101300)
- 作品数：3 被引量：22H指数：3
- 相关作者：张亮杨宏军丁家波韩猛刘来兴更多>>
- 相关机构：中国兽医药品监察所山东农业大学山东省农业科学院更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 山东省规模化奶牛场结核病与副结核病流行病学调查研究被引量：12
- 2014年
- 近年来,随着中国奶业的快速发展,奶牛结核与副结核病越来越严重地威胁到行业的健康发展,牛结核与副结核病的防控也日益受到重视。缺乏牛结核与副结核病流行病学数据及有效的疫苗是中国控制牛结核与副结核病的最大障碍。由此本试验利用牛型提纯结核菌素、提纯副结核菌素对牛群进行皮内变态反应试验,筛选出阳性牛和可疑牛,以进一步开展γ-干扰素释放试验,从而对山东省规模化奶牛场逐步开展分子流行病学调查。2010-2012年共随机抽检了山东省不同地区的1678头样本。结果表明,牛结核与副结核病的阳性率从2010年的35.42%和29.34%下降至2012年的25%和14.93%。这说明,通过系统的监测及无害化处理阳性牛、隔离可疑牛等措施能够使牛群结核与副结核病逐步得到控制,进而实现净化。
- 韩猛张亮王基隆丁家波刘来兴谷祖烨葛利江杨宏军
- 关键词：奶牛结核病副结核病流行病学调查
- 牛布鲁氏菌毒力基因Virb8间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：7
- 2013年
- 【目的】布鲁氏菌virb8蛋白是布鲁氏菌的重要毒力因子,本研究拟构建含布鲁氏菌Virb8基因的原核表达载体,利用纯化蛋白作为包被抗原,建立检测牛布鲁氏菌血清抗体的间接ELISA方法(iELISA)。【方法】根据GenBank中的牛型布鲁氏杆菌Virb8序列,设计一对引物,以布鲁氏菌疫苗株S2全基因组DNA为模板扩增Virb8的基因,将目的基因克隆入PEASY-T3,经测序正确后,与载体pET-32a(+)连接,构建重组表达质粒pET-32a-Virb8,转化E.coli BL21(DE3),诱导表达融合蛋白pET-32a-Virb8,经SDS-PAGE及Western-blot分析鉴定后,采用Ni-NTA Spin Kit纯化目的蛋白,利用所建立的iELISA方法对235个临床奶牛血清样本进行检测,并与虎红平板凝集实验进行比较。【结果】成功构建了含Virb8的表达载体,经多次对表达条件的优化,大量表达了目的蛋白,建立的iELISA方法具有稳定、灵敏的特点,与虎红平板凝集试验的符合率可达97.02%。【结论】所建立的iELISA方法是一种有效的牛布鲁氏菌病血清学诊断的方法,为进一步研究其免疫原性和抗感染保护作用奠定了基础。
- 张剑马卫明张亮何洪彬丁家波杨宏军
- 关键词：布鲁氏菌间接ELISA
- 规模化奶牛养殖场布鲁氏菌病血清学调查被引量：3
- 2014年
- 为了对中国奶牛群进行布鲁氏菌病的血清学调查,实验室拟定采用虎红平板凝集试验进行调查,自2011年1月—2013年6月,实验室收到送检和采集的全国范围内的规模化奶牛养殖场血样样本进行虎红平板凝集实验,对养殖场大群和流产奶牛进行初步的筛查。结果表明:虎红检测奶牛血清样本共计5575份,阳性血清1036份,占检测样本总数的18.58%。其中,群检奶牛血清样本4980份,阳性样本792份,虎红阳性率为15.90%;流产奶牛血清样本595份,阳性样本244份,虎红阳性率为41.01%。结果显示:全国范围内,布鲁氏菌病的发病情况比较严重,而且范围很广,呈现上升趋势,布鲁氏菌病引起的奶牛流产,在各种流产因素中占据很大比例。
- 王基隆张亮韩猛丁家波刘来兴谷祖烨马卫明杨宏军
- 关键词：布鲁氏菌病血清学
