国家高技术研究发展计划(2012AA101304)
- 作品数：22 被引量：56H指数：4
- 相关作者：岳华汤承张强颜新敏李健更多>>
- 相关机构：西南民族大学中国农业科学院兰州兽医研究所西北民族大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家质检公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- E3蛋白:一个重要的痘苗病毒抗干扰素免疫逃避因子被引量：2
- 2013年
- 痘苗病毒能够对抗宿主的抗干扰素作用是其致病机理中的一个重要方面。E3蛋白是由痘苗病毒编码的一类重要的抗干扰素免疫逃避因子,它通过其羧基末端的dsRNA结合域与dsRNA作用后抑制干扰素产生系统中的PRK、2′,5′-OAS/RNaseL系统和RNA聚合酶Ⅲ介导的抗病毒通路,还能通过抑制ISG15的修饰活性、ADAR1催化腺苷酸转化为次黄嘌呤的编辑活性以及IRF3/7的功能进一步逃避宿主的免疫监控。本文就E3蛋白介导的抗干扰素免疫逃避策略做一简要综述。
- 于少雄颜新敏张强
- 关键词：痘苗病毒免疫逃避
- 猪圆环病毒2型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2013年
- 为了研究猪圆环病毒2型（PCV-2）在PK15细胞中的动态增殖，试验根据PCV-2ORF2基因保守区设计特异性引物，经PCR扩增和克隆目的基因制备阳性质粒，建立了基于SYBRGreenI的PCV-2荧光定量PCR方法，并利用该方法检测PCV-2在PK15细胞上的动态增殖情况。结果表明：建立的荧光定量PCR方法在2．0×10^2～2．0×10^9拷贝／IxL内有良好的线性关系，其相关系数为0．9989，扩增效率为99．50％；该方法的最低检测限为20拷贝／止，检测不出猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒等；PCV-2感染PK15细胞后84小时病毒量达最高，为1．2×10^7拷贝／μL，该时间点为收获病毒的最佳时间。说明所建立的荧光定量PCR方法特异性好，灵敏度高，稳定可靠。
- 程方明张焕容岳华
- 关键词：PK15细胞病毒增殖
- 基因C型鸭甲肝病毒单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定被引量：1
- 2014年
- 为制备基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)单克隆抗体(MAb),本研究根据DHAV-C ORF编码氨基酸序列与基因A型DHAV(DHAV-A)相应序列比对结果,利用生物信息学软件筛选位于DHAV-C ORF编码蛋白序列上的不同抗原表位,合成5条十肽表位序列,分别与KLH载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠,经细胞融合筛选获得5株稳定分泌抗DHAV-C MAb杂交瘤细胞株。Western blot显示,5株MAb均能够与DHAV-C发生特异性反应,其中5H24-9、3E18-4和5E3-9 3株MAb不与DHAV-A、鸭瘟病毒、新城疫病毒和禽流感病毒反应,为DHAV-C的特异性MAb,同时也证明与这3株MAb结合的十肽序列为DHAV-C的抗原表位。这3株MAb亚类分别为IgG2b、IgG1和IgG2b。MAb的制备为建立DHAV-C的检测方法和致病机理奠定了基础。
- 程方明张焕容洪杰王远微岳华汤承
- 关键词：抗原表位单克隆抗体ELISA
- 痘病毒F10L基因的克隆及生物信息学分析
- 2014年
- 将古浪山羊痘病毒的基因组DNA提取出来,并设计引物进行PCR扩增,克隆F10L基因的DNA序列.为了分析山羊痘病毒F10蛋白的分子特征,将PCR产物连接到p GEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对F10L基因序列进行预测分析.结果显示,F10L基因序列由1 335个核苷酸组成的开放阅读框,编码444个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值53.01 ku,理论等电点为7.14.该蛋白的二级结构中,α螺旋占12.44%,β折叠占15.73%,其余71.83%为无规则卷曲.多序列比对分析显示,不同羊痘病毒分离株F10L序列高度保守,一致性在97%以上.此研究结果为进一步研究F10蛋白的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白的分子相互作用奠定了基础.
- 赵银龙吴国华吴健朱海霞颜新敏赵志荀李健吴娜张强穆晓峰
- 关键词：痘病毒基因克隆生物信息学分析
- 猪表皮生长因子在大肠杆菌中的串联表达被引量：3
- 2015年
- 根据Gen Bank中猪表皮生长因子(p EGF)基因信息设计引物,通过PCR、亚克隆、基因重组等技术,构建得到p EGF拷贝数分别为1、2、3的原核重组表达质粒.用重组质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,在37℃诱导条件下,1、2、3拷贝p EGF重组质粒均能表达p EGF蛋白,灰度值分析表明:表达的融合蛋白占菌体蛋白总量分别为9.54%、20.37%、26.79%,表明在原核表达中,对p EGF进行同向串联,增加其拷贝数,可以提高p EGF在表达后融合蛋白中所占比例,相应提高p EGF蛋白产量.本研究为p EGF重组蛋白的高效表达和批量生产提供可靠的依据.
- 贺超邓璐汤承岳华
- 关键词：猪表皮生长因子亚克隆
- 一株口蹄疫病毒非结构蛋白3A单克隆抗体的表位肽段鉴定被引量：2
- 2014年
- 为鉴定口蹄疫病毒非结构蛋白3A的单克隆抗体3A24#识别的表位区,对非结构蛋白3A分两个肽段进行原核表达,其中3A1和3A2肽段分别包含3A蛋白的第1位~89位和77位~153位氨基酸。分别针对两肽段基因设计并合成引物,PCR扩增后定向克隆到原核表达载体pET-30a（＋）-PES-SUMO,将重组质粒转化宿主菌E.coli BL21（DE3）pLys,IPTG诱导表达。用单克隆抗体3A24#对表达的3A1和3A2肽段进行Western blot检测,以鉴定单克隆抗体3A24#的识别表位肽。SDS-PAGE分析表明,成功表达了3A1和3A2肽段,大小分别为26ku和25ku。Western blot分析表明,FMDV牛阳性血清与两肽段均能识别,而单克隆抗体3A24#只能与3A2肽段发生反应,与3A1肽段不发生反应。3A24#单克隆抗体识别的抗原表位位于3A2肽段,即3A蛋白的第89aa~第153aa肽段上。
- 王娜卢曾军曹轶梅李平花付元芳孙普曾巧英刘在新
- 关键词：口蹄疫病毒单克隆抗体抗原表位
- 山羊粪便总DNA提取方法的比较被引量：4
- 2015年
- 本试验比较了从山羊粪便中提取总DNA的四种方法的优缺点,旨在为后续实验提供合适的提取方法。笔者首先采用PBS缓冲液过夜处理粪便标本,继而通过酚-氯仿抽提法、CTAB抽提法、天根试剂盒法和OMEGA试剂盒法提取样品总DNA。结果显示:酚-氯仿抽提法提取的DNA完整性不好,且纯度低;CTAB法提取的DNA浓度和纯度都较高,但完整性不好;试剂盒法提取方便,操作简单,时间短,但提取的浓度较低,其中天根试剂盒法提取的DNA纯度高,完整性好。综合考虑,天根试剂盒法是提取山羊粪便总DNA的最佳方法。
- 李霞陈新诺王蕾姚梅刘芳田岳华
- 关键词：总DNA
- 副猪嗜血杆菌血清型和外膜蛋白P5基因型多样性的研究被引量：3
- 2013年
- 副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)的血清型及基因型具有复杂多样性。本研究用间接血凝试验对某一猪场分离的Hps进行血清分型鉴定,并对部分菌株的外膜蛋白P5基因进行克隆测序和进化发育分析。试验结果显示,在21头病死猪不同部位共分离了42株Hps,其中Hps血清5型17株(40.7%)、血清14型12株(28.5%)、血清4型1株(2.3%)和未定型12株(28.5%)。本试验中有5头猪同时感染2种不同血清型的Hps。21株Hps临床分离株分属5个不同基因序列型(STA～STE),其中STA有12株(12/21)为优势基因型;相同血清型的Hps分离株具有不同的STs型,来自同一头猪的Hps血清型和STs型也不相同。以上结果表明,同一猪群感染的Hps血清型和基因型存在明显的多样性,同一头猪感染Hps的血清型和基因型也存在多样性。本研究为进一步揭示猪群感染Hps的复杂性,研究该病的感染与流行机制提供了有价值的参考。
- 陈小飞张斌郭定乾汤承岳华
- 关键词：副猪嗜血杆菌血清型基因型多样性
- 牦牛星状病毒的RT-PCR检测方法的建立和变异分析被引量：4
- 2016年
- 近期作者实验室从腹泻牦牛粪便样本中鉴定出一种新型星状病毒(AstV)——牦牛AstV,本研究旨在建立检测牦牛AstV的RT-PCR方法。首先设计引物扩增牦牛AstV 630bp的ORF2基因片段,进行序列分析;在此基础上设计检测引物,建立检测牦牛AstV的RT-PCR方法。结果显示,从20份牦牛腹泻粪便中扩增出13个牦牛AstVORF2基因片段,核苷酸相似性为99.3%~100%,而与牛肠源星状病毒(BAstV)ORF2基因的相似性仅为59.5%~80.8%;所建立的RT-PCR方法只扩增牦牛AstV的特异片段,对BAstV和其他无关病原无扩增;对病毒核酸的最低检测限为57.3fg·μL^(-1);比较试验表明,所建立的RT-PCR方法对牦牛AstV的检出率明显优于现有检测BAstV的RT-PCR方法。其对牦牛腹泻与健康粪便样本中牦牛AstV的检出率分别为55.5%(76/137)和7.7%(2/26)(P<0.01)。试验结果表明,扩增的ORF2基因片段的核苷酸序列在牦牛AstV毒株间高度保守,但相对于BAstV变异大;基于该序列建立的检测牦牛AstV的RT-PCR方法特异性好,灵敏度高,稳定性好,为牦牛AstV的检测和流行病学调查提供了有力工具;同时,本试验结果也提示牦牛AstV与犊牦牛腹泻有联系。
- 陈曦汤承张斌宋志刚周芳岳华
- 关键词：牦牛星状病毒RT-PCRORF2基因
- 山羊痘病毒A6L基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2015年
- 为了分析山羊痘病毒A6蛋白的分子特征,本试验提取了山羊痘病毒古浪分离株的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,克隆A6L基因的DNA序列。将PCR产物连接到pGEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对A6L基因序列进行预测分析。结果显示,A6L基因序列含有1个由1 128个核苷酸组成的开放阅读框,编码375个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值为43.68ku,理论等电点为7.50。该蛋白的二级结构中,α螺旋占53.30%,β折叠占10.24%,其余39.46%为无规则卷曲。多序列比对分析结果显示,不同羊痘病毒分离株A6L序列高度保守,同源性在97%以上。上述研究结果为进一步研究A6蛋白的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白的分子相互作用奠定了基础。
- 赵银龙吴国华朱海霞吴健颜新敏赵志荀李健吴娜穆晓峰张强
- 关键词：山羊痘病毒基因克隆
