国家重点基础研究发展计划(2007CB116309)
- 作品数：4 被引量：24H指数：2
- 相关作者：陈创夫王远志张辉张红星唐利燕更多>>
- 相关机构：石河子大学更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 羊种布鲁菌05/43株侵染绵羊肺泡巨噬细胞cDNA文库的构建被引量：2
- 2008年
- 目的构建羊种布鲁菌05/43株侵染绵羊肺泡巨噬细胞的cDNA文库。方法培养的绵羊肺泡巨噬细胞经羊种布鲁菌05/43株侵染后,以Trizol试剂提取其总RNA,用cDNA文库构建试剂盒构建巨噬细胞的cDNA文库。随机选取cDNA文库中的18个克隆进行表达序列标签(EST)序列测定,测序结果用BlastX和BlastN软件在GenBank蛋白质库和核酸库中进行序列同源性比对。结果构建的cDNA文库的库容量为1.192×106,重组率为95.65%。18个EST测序,12个与CD抗原基因、细胞因子基因、蛋白酶基因等已知功能的基因序列相关,6个为未知功能基因的EST序列。结论成功构建了羊种布鲁菌05/43株侵染绵羊肺泡巨噬细胞的cDNA文库,这将有助于阐明该菌株的致病机制。
- 王远志陈创夫曹旭东盛金良张辉任艳高剑峰王端明
- 关键词：基因文库
- 绵羊种布鲁氏菌019株侵染绵羊巨噬细胞cDNA文库的构建被引量：1
- 2008年
- 目的构建绵羊种布鲁氏菌019株侵染绵羊肺泡巨噬细胞的cDNA文库。培养绵羊肺泡巨噬细胞,用绵羊种布鲁氏菌019株侵染绵羊巨噬细胞,用试剂盒构建侵染后绵羊肺泡巨噬细胞的cDNA文库,并对文库中的部分克隆进行测序。结果表明,构建的绵羊种布鲁氏菌019株侵染绵羊巨噬细胞cDNA文库达到建库要求;所测序列与牛的基因组编码序列同源性最高。在绵羊种布鲁氏菌019株侵染绵羊肺泡巨噬细胞过程中,以50∶1(细菌∶细胞)的个数比,侵染3.5h,能有效构建侵染后绵羊肺泡巨噬细胞的cDNA文库。
- 王远志陈创夫盛金良张辉曹旭东任艳高剑峰王端明
- 关键词：CDNA文库
- 布鲁氏菌bp26基因的原核表达及BP26-间接ELISA方法的初步建立被引量：15
- 2009年
- 为了表达并纯化布鲁氏菌BP26蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。方法:从布鲁氏菌疫苗株M5-90克隆bp26基因,在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达,纯化BP26蛋白,进行SDS-PAGE、Western-blot检测,将纯化的BP26蛋白包被ELISA板,建立检测布鲁氏菌病的间接ELISA方法,用该方法检测42份绵羊血清,结果与标准试管凝集试验(SAT)进行比较。结果显示:正确表达并纯化了BP26蛋白,布鲁氏菌标准试管凝集试验检测的阳性率为30.85%(13/42);间接ELISA方法检测的阳性率为35.71%(15/42),二者阳性符合率为86.67%(13/ 15)。结论表达、纯化的BP26蛋白能够与布鲁氏菌阳性血清特异性结合,建立的ELISA方法比SAT方法更敏感。为以后M5-90疫苗株bp26基因缺失苗的应用提供配套性血清学检测奠定基础。
- 唐利燕陈创夫王远志张辉张红星
- 关键词：布鲁氏菌间接ELISA
- 羊种布鲁氏菌M5-90 omp31蛋白原核表达被引量：9
- 2009年
- 克隆、测序布鲁氏菌疫苗株M5-90外膜蛋白基因OMP31,原核表达OMP31并对其检测。从羊种布鲁氏菌M5-90中PCR获得OMP31基因,连接到pBS-T克隆质粒并测序;将测序正确的基因片段克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a,进行SDS-PAGE,而后Western-blot检测。结果M5-90疫苗株的OMP31基因序列与羊种布鲁氏菌参考株16M的同源性为99.03%;外膜蛋白基因OMP31在大肠杆菌表达后能够被Western-blot检测到。结论:表达的布鲁氏菌疫苗株M5-90外膜蛋白OMP31可以被布鲁氏菌特异性血清识别,表现出良好的抗原性,为以后实验室诊断和疫苗的研究做好坚实的上游工作。
- 张红星陈创夫王远志唐利燕
- 关键词：克隆测序
