国家自然科学基金(30972778)
- 作品数：8 被引量：24H指数：3
- 相关作者：胡涛于晓锋杜镇镇栾希英王国艳更多>>
- 相关机构：滨州医学院苏州大学临淄区人民医院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- hPMSCs对白血病细胞Jurkat T表面CD分子表达的影响及机制研究被引量：1
- 2021年
- 目的探究人胎盘源间充质干细胞(human placenta derived mesenchymal stromal cells,hPMSCs)对人急性淋巴白血病细胞(Jurkat T)表面CD4、CD28及CD175表达的影响及机制。方法将hPMSCs与Jurkat T细胞共培养,采用FCM检测共培养前后Jurkat T细胞表面CD4、CD28、CD175的表达水平;Western blot检测Cosmc蛋白表达水平,荧光法检测T-合酶(T-synthase)活性,细胞O-糖组扩增技术(Cellular O-glycome Reporter/Amplifition,CORA)检测O-糖组变化。结果hPMSCs O-糖组结构较复杂,表达核心1来源的O-糖链结构(m/z955.4、1129.5、1316.6)及核心2来源的O-糖链结构(m/z1217.6、1648.7、1782.8、1939.9、2058.0、2563.2);Jurkat T细胞不表达核心1及核心2来源的O-糖链。与hPMSCs共培养后,Jurkat T细胞表面CD4表达增高,CD28、CD175表达降低;Cosmc蛋白表达增多,T-合酶活性增高,表达核心1来源的O-聚糖结构(m/z955.4,1316.6)。结论hPMSCs可通过上调Cosmc蛋白、T-合酶活性,改变Jurkat T细胞O-糖基化状态影响其表面CD4、CD28及CD175表达。
- 丁瑞松胡雯黄盼盼胡涛
- 关键词：分子伴侣免疫调节
- 可溶型B7-H3在原发性肝细胞癌患者血清中的表达及临床意义被引量：13
- 2013年
- 目的检测协同刺激分子B7-H3在肝细胞癌患者血清及组织中的表达,并探讨其临床意义。方法选取原发性肝细胞癌63例患者的癌组织和血清标本;5例肝血管瘤的瘤旁组织作为正常肝组织对照;同期收取50例健康体检人员外周血标本为正常对照。采用ELISA检测肝癌患者和正常人血清中可溶型B7-H3(sB7-H3)的含量,免疫组化检测正常肝组织和肝细胞癌组织中B7-H3的表达。结果肝细胞癌患者外周血清sB7-H3含量为(4143.47±976.27)pg/mL,显著高于正常对照组(2076.18±605.42)pg/mL(P<0.05);且其表达水平与临床分期,是否远处转移及肝癌组织中是否阳性表达B7-H3等参数有关(P<0.05),与年龄、性别、组织学类型、淋巴结转移及肿瘤大小等临床病理参数无关;与血清学指标CA19-9呈明显正相关(P<0.05),但与AFP和CEA水平无相关性。结论肝癌患者血清中sB7-H3表达明显高于正常人,B7-H3表达与疾病临床病理指标相关,表明检测sB7-H3可能对原发性肝癌的诊断有一定价值。
- 王斐斐于国华刘同慎王国艳杨静张光波栾希英
- 关键词：共刺激分子B7-H3ELISA
- WtCosmc质粒转染对Tn^+肿瘤细胞恶性行为的影响被引量：1
- 2016年
- 目的：以Tn＋肿瘤细胞为靶标,研究野生型Cosmc（WtCosmc）质粒转染对其恶性行为的影响,以期为肿瘤的诊断及治疗提供新思路.方法：流式细胞术检测肿瘤细胞表面Tn抗原阳性率,免疫磁珠分选Tn＋与Tn-肿瘤细胞;分选后的Tn＋肿瘤细胞经Fugene 6转染WtCosmc质粒,并用免疫荧光检测细胞表面Tn抗原表达状况.分别采用荧光法、CCK-8和Transwell检测转染前后Tn＋肿瘤细胞的T-synthase活性、细胞增殖、迁移能力及对Apo2L/TRAIL的敏感性.结果：与Tn-细胞相比,Tn＋肿瘤细胞T-synthase活性及对Apo2L/TRAIL诱导凋亡的敏感性较低;细胞增殖、迁移能力较强.经WtCosmc质粒转染后,Tn＋细胞T-synthase活性及其对Apo2L/TRAIL诱导凋亡的敏感性明显增高;Tn抗原表达受抑;细胞增殖及迁移能力明显下降.结论：转染WtCosmc可恢复Tn＋细胞T-synthse活性,抑制Tn抗原的表达,进而增强其对Apo2L/TRAIL诱导凋亡的敏感性,降低细胞增殖、迁移能力,有效抑制Tn＋肿瘤细胞的恶性行为.
- 杜镇镇刘栋孙旭红于晓锋石传芹徐雪胡涛
- 关键词：细胞增殖
- B7-H3在人肝癌细胞株HepG2对外周血CD8＋T细胞活化、周期及分泌IL-17调节中的作用被引量：5
- 2012年
- 目的研究B7-H3在人肝癌细胞株HepG2对人外周血CD8^＋T细胞活化、周期及IL-17分泌等调节中的作用。方法RT—PCR及FCM检测B7-H3在HepG2细胞上的表达；应用脂质体法将PGPu6／GFP／neo-B7-H3shRNA质粒转入肝癌细胞株HepG2，阻断B7-H3的表达；免疫磁珠分选健康人外周血CD8^＋T细胞；FCM分析B7-H3分子在HepG2细胞对PHA刺激下CD8^＋T细胞活化、周期及PMA刺激下CD8^＋T细胞分泌IL—17调节中的作用。结果肝癌细胞株HepG2高表达B7-H3分子，PGPU6／GFP／neo-B7-H3shRNA质粒能有效阻断B7-H3在HepG2细胞上的表达；FCM分析结果显示，肝癌细胞株HepG2对CD8^＋T细胞活化及周期均有抑制作用；阻断B7-H3的表达后，明显减弱HepG2细胞对CD8^＋T细胞早期活化表型CD69表达的抑制作用，且能够通过下调CD8^＋T细胞G0／G1期细胞数量，上调S期细胞数量逆转HepG2细胞对CD8^＋T细胞周期的阻滞作用；在HepG2存在条件下，CD8^＋T细胞对IL—17的分泌明显增加，阻断B7-H3的表达后，IL-17的分泌被进一步上调。结论HepG2细胞高表达R7-H3分子；B7-H3能够协同HepG2细胞对CD8^＋T细胞活化表型CD69的表达及细胞周期的抑制作用；HepG2细胞上调CD8^＋T细胞对IL-17的分泌作用，但B7-H3可抑制该上调作用。
- 王斐斐王国艳张光波林艳华栾希英
- 关键词：人肝细胞癌CD8^+T细胞B7-H3
- 非编码区基因突变对Tn＋肿瘤细胞Cosmc mRNA的影响被引量：4
- 2011年
- 目的探讨Tn＋肿瘤细胞分子伴侣（Cosmc）非编码区基因突变的方式及其对Cosmc转录水平的影响。方法免疫磁珠分选肿瘤组织中Tn＋、Tn-细胞，提取基因组DNA（gDNA）和总RNA；RT-PCR检测T-synthase及CosmcmRNA转录水平的表达状况；PCR扩增Cosmc非编码区基因，基因测序寻找突变位点。结果Tn-细胞中未发现基因突变，但部分病人肿瘤组织Tn-细胞存在等位基因嵌合体。Tn＋肿瘤细胞均可见基因突变，但突变方式和位点并不完全一致。部分病人表现为杂合缺失，部分病人表现为点突变。Tn＋、Tn-细胞T—synthasemRNA转录水平无明显差异，Tn＋细胞CosmcmRNA转录水平明显降低。结论Tn＋肿瘤细胞Cosmc非编码区存在基因突变，可能影响Cosmc基因转录导致肿瘤细胞表达Tn抗原。
- 胡涛刘希伟董孟华
- 关键词：肿瘤基因突变杂合缺失
- AChE在Tn^+人白血病Jurkat细胞中的表达状况研究
- 2015年
- 通过研究Tn+人白血病Jurkat细胞中ACh E的表达状况,可以分析Jurkat细胞ACh E表达与Tn抗原表达水平的关系,从而为ACh E用于肿瘤的预后判断或临床治疗提供实验依据。本论文利用ELISA、色度法试验在蛋白水平分析了ACh E的表达状况,利用RT-PCR以及Real-time PCR试验在m RNA水平分析了ACh E的表达状况。结果显示:Jurkat细胞中ACh E的含量及活性明显低于Tn-的白血病细胞K562,且二者又均低于正常白细胞。由此认为,人白血病细胞中ACh E的含量及活性低于正常细胞,ACh E的表达与Tn抗原的表达水平呈负相关,为肿瘤的临床判断提供了有力的依据。
- 孙旭红于晓锋李乃坤杜镇镇李笑言胡涛
- 关键词：ACH肿瘤JURKAT
- 活化T细胞表面Tn抗原动态变化与Cosmc之间的关系研究被引量：3
- 2017年
- 目的探讨T细胞活化过程中表面Tn抗原的表达状况与Cosmc转录及蛋白表达水平之间的关系。方法30例健康志愿者,男15例,女15例,平均年龄(34±8.9)。抽取志愿者外周静脉血,肝素抗凝,采用Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),免疫磁珠法分选纯化的CD3+T细胞,分别采用T细胞活化剂Cocktail、CD3/CD28Dynabeads刺激12、24、36、48、60、72h。流式细胞术检测两种活化剂刺激活化前后不同时间点CD3+T细胞中Tn+细胞的百分率及Tn抗原平均荧光强度,采用RT-PCR和Western blot检测两种活化剂刺激活化前后不同时间点T细胞中Cosmc转录及蛋白表达状况,采用荧光分析法检测T-synthase活性,应用SPASS13.0软件进行统计学分析,阐明活化T细胞表面Tn抗原动态变化与Cosmc之间的关系。结果 Cocktail、CD3/CD28Dynabeads均能促使活化T细胞表面表达Tn抗原,以及Tn抗原表达的平均荧光强度随活化时间的延长先升高后下降。CD3/CD28Dynabeads活化组Tn+细胞百分率的峰值出现在活化后48h,而Cocktail活化组峰值出现在活化后60h,差异具有统计学意义(P<0.05)。Cosmc转录及蛋白水平、T-synthase活性随活化时间延长先降低后升高,变化趋势与Tn抗原表达水平相反,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 T细胞活化过程中Tn抗原表达呈动态变化,表达水平与Cosmc转录及蛋白水平下降、T-synthase活性降低密切相关,为以Tn抗原为靶点治疗由T细胞活化引起的免疫性疾病提供了重要依据。
- 石传芹徐雪于晓锋刘栋于泽顺河恩玲杜镇镇胡涛
- 关键词：T淋巴细胞
- 人结肠癌细胞 HT-29表达 Tn 抗原的机制研究被引量：1
- 2015年
- 目的：探讨结肠癌细胞株HT-29中Tn（＋）细胞表达Tn抗原的机制。方法免疫磁珠分选结肠癌细胞株HT-29中HT-29-Tn（＋）细胞与HT-29-Tn（－）细胞；RT-PCR、PCR 扩增Cosmc基因，测序比对是否存在基因突变。野生型Cosmc转染正常及肿瘤细胞；Western blot检测转染后Cosmc蛋白表达状况；荧光分析法检测转染前后T-synthase活性。结果分选后的HT-29-Tn（＋）细胞缺乏T-synthase活性，Cosmc基因编码区缺失，转染WtCosmc可恢复Tn抗原阳性细胞的T-synthase活性，抑制Tn抗原表达。结论 Cosmc基因编码区缺失引起T-synthase活性丧失导致人结肠癌HT-29-Tn（＋）细胞表达Tn抗原。
- 于晓锋杜镇镇孙旭红石传芹张怀祥胡涛
- 关键词：HT-29细胞基因突变
