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新型共刺激分子B7-H4在肿瘤免疫中的研究进展: 2009年; B7-H4是共刺激分子B7家族的最新成员，是B7家族相关的第3个T细胞抗原特异性反应的负性调控分子，在CD4^＋、CD8^＋T细胞的分化发育、细胞周期的进展以及细胞因子的产生方面发挥广泛的抑制效应。B7-H4途径在器官特异性自身免疫病、病毒感染、移植耐受和肿瘤免疫逃避等方面可能具有重要的作用，因而对B7-H4在肿瘤免疫逃避中发挥的作用的深人研究可以为肿瘤的生物学诊断及治疗策略提供一个新的方向。; 陶岚张立煌; 关键词：B7-H4 肿瘤免疫

病毒感染与自身免疫性糖尿病被引量：4: 2006年; 目前认为,1型糖尿病(T1D)是T细胞介导的自身免疫性疾病,以遗传为基础,在某些环境因素的作用下,诱发以胰岛炎为病理特征的胰岛β细胞自身免疫反应,损伤β细胞使其丧失合成和分泌胰岛素的功能,引起糖代谢紊乱。病毒感染是其中的一个重要因素。文中综述多种病毒感染与T1D的关系,着重讨论病毒介导的自身免疫性糖尿病的发病机制以及病毒感染对糖尿病的作用。; 裴紫燕张立煌; 关键词：病毒 1型糖尿病自身免疫

小鼠B7-H4重组腺病毒的构建及鉴定被引量：4: 2008年; 目的:利用AdEasyTMXL system构建携带小鼠B7-H4基因的重组腺病毒,并鉴定其生物学活性。方法:以RT-PCR方法从C57小鼠肺组织中扩增B7-H4全长基因并克隆到T载体,然后测序鉴定。经Xhol和EcoR双酶切后接入pshuttle-CMV穿梭载体(简称PSC),构建重组腺病毒的穿梭质粒PSC-mB7-H4,并电转化至BJ5183-AD-1感受态细菌,经筛选获得携带mB7-H4的重组腺病毒的质粒pmB7-H4/Ad。将此质粒转化人胚肾细胞(AD-293)产生复制缺陷的重组腺病毒mB7-H4/Ad。以RT-PCR及Western blot方法检测被mB7-H4/Ad感染的AD-293细胞中B7-H4 mRNA和蛋白的表达,并观察重组腺病毒感染的小鼠成纤维细胞(L929)对T细胞增殖和细胞因子表达的影响。结果:获得序列准确的mB7-H4基因并成功构建重组腺病毒表达质粒,转化AD-293细胞获得重组腺病毒;细胞生物学实验证实,该重组腺病毒具有抑制CD3单抗诱导的T淋巴细胞的增殖和细胞因子的分泌。结论:成功构建具有免疫抑制功能的mB7-H4重组腺病毒。; 闫佩毅姚航平钱韵古丽娟陶岚张立煌; 关键词：转染

小鼠B7-H4重组蛋白的表达及鉴定被引量：3: 2009年; 目的:构建小鼠B7-H4胞外区基因的真核表达载体,转染酵母细胞以表达mB7-H4,并检测其生物学活性。方法:以mB7-H4的重组质粒为模板,在克隆引物上加入XhoI和EcoRI酶切位点,并用PCR方法扩增得到mB7-H4胞外区的基因片段,经XhoI和EcoRI双酶切后接入酵母表达载体Ppic9上,构建成Ppic9-mB7-H4重组质粒。经双酶切和核酸测序鉴定,将该重组质粒转染至酵母细胞,用PCR、Western Blot及ELISA等方法检测重组基因的表达,并鉴定表达蛋白的生物学活性。结果:转染Ppic9-mB7-H4重组质粒的酵母细胞内表达mB7-H4,诱导表达的mB7-H4能有效抑制CD3单抗活化的T淋巴细胞的增殖(相对抑制率为28.3%)和IL-2(相对抑制率为68.8%)、IL-4(相对抑制率为78.8%)、IL-10(相对抑制率为67.6%)、IFN-γ(相对抑制率为77.7%)等细胞因子的分泌。结论:成功构建了mB7-H4真核表达系统,并获得了有生物学活性的mB7-H4分子。; 钱韵姚航平程林芳沈玲古丽娟陶岚张立煌; 关键词：重组蛋白质类免疫抑制

PD-L1-Ig融合蛋白的酵母表达及其对T细胞的抑制作用被引量：3: 2009年; 目的:利用毕赤酵母表达系统表达PD-L1-Ig融合蛋白,检测该融合蛋白的生物学活性。方法:化学合成hPD-L1-IgG4融合基因,构建携带该基因的酵母表达载体,转化GS115酵母菌株后分泌表达融合蛋白,亲和层析和离子交换层析法纯化,SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。ELISA法检测融合蛋白与受体PD-1的结合能力,混合淋巴细胞反应检测融合蛋白对T细胞功能的抑制能力,51Cr稀释法检测其对CTL杀伤人结肠癌SW480细胞效应的抑制作用。结果:成功构建酵母表达载体pPIC9K-PD-L1-IgG4,转化菌株分泌表达PD-L1-IgG4融合蛋白,相对分子质量为55000,含量为120μg/ml。发酵菌株,纯化制备融合蛋白。融合蛋白与受体PD-1具有良好的结合能力,能够显著抑制T细胞增殖、活化(P<0.01),并抑制CTL对结肠癌细胞的杀伤(P<0.01)。结论:成功制备了酵母表达PD-L1-IgG4融合蛋白,该融合蛋白具有良好的生物学活性,为深入研究其在肿瘤免疫应答中的调控效应奠定了良好基础。; 张意吴聪蒋应明龙瑶陈国友; 关键词：PD-L1 融合蛋白酵母表达系统 T细胞结肠癌细胞

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国家重点基础研究发展计划(2003CB515503)