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弓形虫SAG1基因截短片段植物表达载体的构建被引量：8: 2004年; 目的　将弓形虫SAG1基因截短片段 (t SAG1) ,分别用植物组成型E35S启动子和番茄果实特异性E8启动子驱动 ,构建t SAG1植物表达载体。方法　自本室构建的pET32a t SAG1载体中PCR扩增得到t SAG1基因 ,克隆进T载体为pMD T t SAG1,酶切鉴定后进行测序确认。用BamHⅠ单酶切连接方式将t SAG1分别亚克隆进 pB35MG、pB35E1MG、pBE2MG载体 ,分别构建中间载体 pB35 t SAG1、pB35E1 t SAG1、pBE2 t SAG1载体。其中 ,pB35 t SAG1以E35S驱动t SAG1,3′端携带NOS3′终止子序列 ,组成E35S/t SAG1/NOS3′操纵子结构单元。pB35E1 t SAG1含E35S和番茄果实特异性E8启动子核心序列E81.1双启动子驱动t SAG1,组成E35SE81.1/t SAG1/NOS3′操纵子结构单元。pBE2t SAG1以番茄果实特异性E8启动子全长E82 .2驱动t SAG1,组成E82 .2 /t SAG1/NOS3′操纵子结构单元。pB35 t SAG1、pB35E1 t SAG1、pBE2 t SAG1经酶切证实后 ,分别将其中E35S/t SAG1/NOS3′、E35S -E81.1/t SAG1/NOS3′、E82 .2 /t SAG1/NOS3′操纵子结构单元以HindⅢ单酶切连接方式亚克隆进pCAMBIA2 30 0质粒中 ,构建植物表达载体 pC35 t SAG1、pC35E1 t SAG1、pCE2 t SAG1,酶切鉴定。含三种启动子驱动t SAG1的植物表达载体转化根癌农杆菌LBA4 4 0 4感受态细胞后 ,; 周晓红陈晓光卢丽琴李林吴优咸鹏言慧吴琨; 关键词：刚地弓形虫植物表达载体

弓形虫多表位基因植物表达载体的构建被引量：14: 2003年; 目的构建弓形虫多表位基因(TGMG)植物表达载体。方法①将TGMG亚克隆人pBAC55构建中间载体pB35MG,再将其中E35S/TGMG/NOS3′结构单元亚克隆人pCAMBIA2300构建植物表达载体pC35MG。②将番茄果实特异性启动子E81.1插入pB35MG构建中间载体pB35E1MG,再将其中E35SE81.1/TGMG/NOS3′结构单元亚克隆人pCAMBIA2300构建植物表达载体pC35E1MG。③将番茄果实特异性启动子E82.2插入pB35MG构建中间载体pBE2MG,再将其中E82.2/TGMG/NOS3′结构单元亚克隆人pCAMBIA2300构建植物表达载体pCE2MG。测序鉴定pB35MG、pC35E1MG、pCE2MG中的TGMG序列。④pC35MG、pC35E1MG、pCE2MG转化根癌农杆菌LBA404。结果重组质粒用酶切鉴定均得到预期片段,pB35MG、pC35E1MG、pCE2MG测序结果正确。结论成功构建TGMG中间载体pB35MG、pB35E1MG、pBE2MG,以及植物表达载体pC35MG、pC35E1MG、pCE2MG。并将3种植物表达载体导入根癌农杆菌。; 周晓红陈晓光张晓东杨培梁习佳飞胡建军王亚楠李林沈树满; 关键词：弓形虫多表位基因植物表达载体

弓形虫多表位基因的构建及其在大肠杆菌系统中的表达鉴定: 目的构建弓形虫和破伤风毒素多个表位的编码基因,将其在大肠杆菌系统进行表达,评价重组抗原的特异反应性。方法从弓形虫保护性抗原及通用免疫增强佐剂破伤风毒素中选取含有T和（或）B细胞表位的抗原片段,通过软件分析在各片段之间插...; 杨培梁陈晓光; 文献传递

弓形虫多表位基因对番茄的转化研究: ＜正＞目的:获得弓形虫多表位基因转基因番茄植株。方法:1.用番茄果实特异性E8启动子驱动弓形虫多表位抗原基因构建植物表达载体pCE2MG,酶切鉴定。2.用液氮冻融法将pCE2M6转化根癌农杆菌LBA4404,PCR鉴定...; 周晓红胡建军李林王和勇陈晓光; 关键词：弓形虫多表位基因克隆; 文献传递

三种表达形式的弓形虫SAG1基因植物表达载体的构建: ＜正＞目的:将分泌型、表膜型、细胞内型三种表型的弓形虫SAG1基因,用番茄果实特异性启动子E82.2驱动,构建弓形虫SAG1基因植物表达载体。方法:①将构建好的pcDNA3-SAG1Se（分泌型）、pcDNA3-SA...; 周晓红陈晓光龚娅习佳飞胡建军王亚楠李林; 关键词：弓形虫 SAG1基因植物表达载体; 文献传递

弓形虫多表位基因的构建及其在大肠杆菌系统中的表达鉴定被引量：32: 2002年; 目的　构建弓形虫和破伤风毒素多个表位的编码基因 ,将其在大肠杆菌系统进行表达 ,评价重组抗原的特异反应性。方法　从弓形虫保护性抗原及通用免疫增强佐剂破伤风毒素中选取含有T和 (或 )B细胞表位的抗原片段 ,通过软件分析在各片段之间插入适当数目、起间隔作用的氨基酸 ,以保持个片段的空间构象独立性 ,从而确定氨基酸顺序。根据氨基酸序列选取适当的密码子构成弓形虫多表位基因。将该基因合成并鉴定后 ,亚克隆入原核表达载体 ,在大肠杆菌中表达并分析表达产物的表达形式和抗原活性。结果　成功构建了长度为 36 0bp的弓形虫多表位基因。该基因在原核表达系统中经诱导 ,得到了 14 4kDa的包涵体形式的表达产物。免疫印迹实验表明该产物具有强特异性抗原活性。; 杨培梁陈晓光; 关键词：弓形虫多表位基因大肠杆菌蛋白表达抗原活性

弓形虫多表位基因植物表达载体的构建: ＜正＞目的:将含弓形虫两期（速殖子和缓殖子）的多个保护性抗原表位的编码基因即弓形虫多表位基因（TGMG）,用不同的启动子驱动,构建弓形虫多表位基因植物表达载体。方法:①首先将弓形虫多表位基因亚克隆进pBAC55载体,...; 周晓红陈晓光张晓东杨培梁王亚楠李林习佳飞胡建军; 关键词：弓形虫多表位基因植物表达载体; 文献传递

番茄遗传转化筛选及其子代选育体系的优化研究被引量：8: 2008年; 目的以弓形虫多表位抗原基因(MAG)和截短的速殖子主要表面抗原1(tSAG1)为插入子建立优化的番茄遗传转化筛选及其子代选育体系。方法从培养基激素配方、番茄外植体选择等方面进行番茄再生体系的优化。自番茄品种、外植体选材、培养温度、培养基激素配方以及在共培养时是否加入乙酰丁香酮(AS)等进行以农杆菌介导的番茄基因组稳定转化体系的优化。采用不同浓度卡那霉素抗性压力对转基因小苗进行根筛选诱导的比对。转基因番茄幼苗练苗移栽开花结果后收集种子,以无菌播种卡那霉素抗性筛选法进行番茄转基因植株子代的选育。结果子叶较下胚轴具有更强的再生能力,在优化的番茄再生培养基ZB3中,番茄子叶可达到98%(59/60)的高频再生芽萌发率。番茄的转化体系优化,培养基激素配方、培养温度是番茄转化芽诱导过程中的关键影响因素,(23±1)℃能显著提高转化芽的萌发率,AS的施加亦能显著提高番茄转化芽萌发率,Zhongshu No.5番茄子叶于ZB2培养基和(23±1)℃的条件下转化芽萌发率为35%(28/81)。80mg/L卡那霉素抗性进行HK种番茄转化小苗根的筛选诱导比较适宜,生根率为48%(31/65)。抗性苗移栽成活,正常开花结果的转化植株117株。无菌播种,卡那霉素浓度≥100mg/L时能显著抑制非转基因番茄种子的发育尤其是根的萌发与植株的伸长,根出现紫化且无侧根生长;将转基因番茄种子置于150mg/L卡那霉素抗性浓度下培养,能有效进行转基因植株后代遗传分离的选育。结论成功建立番茄高频再生体系以及优化的番茄转化、抗性筛选及其转基因植株子代的选育体系。; 应彩云黄小琴郭瑜琪钟莉莉刘艳黎事伦顾晓敏周晓红; 关键词：转基因番茄弓形虫

番茄果实特异性E8启动子的基因克隆与序列分析被引量：47: 2003年; 目的获取番茄果实特异性E8启动子基因,为实现外源基因在转基因番茄中果实特异性表达做准备。方法培养中蔬5号(Zhongshu No.5)番茄幼苗, 采集叶片,用Omega公司的植物基因组提取试剂盒提取番茄基因组DNA;设计引物,从基因组中通过PCR扩增获得番茄果实特异性E81.1和E82.2启动子基因;克隆进pGEM-T载体,酶切鉴定;送上海基康公司测序;序列分析。结果从番茄基因组DNA中PCR扩增得到预期大小的启动子片段;构建重组pGEM-T-E81.1和pGEM-T-E82.2载体,经酶切证实具有与目标片段长度相符的插入片段;测序结果分析显示:番茄果实特异性E8启动子序列高度保守,所获得的Zhongshu No.5 E82.2启动子DNA序列与Deikman报道的Cherry种的E82.2启动子同源性为99%, 登陆GenBank, ID号为AF515784。结论成功获得Zhongshu No.5番茄果实特异性E81.1、E82.2启动子基因,为下一步转基因番茄口服疫苗的研制奠定了一定的工作基础。; 周晓红陈晓光张晓东王亚楠李林习佳飞胡建军; 关键词：番茄基因克隆

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国家自然科学基金(30080024)

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