国家自然科学基金(31171307)
- 作品数:2 被引量:5H指数:1
- 相关作者:唐霓杨翼陈震田玲聂丽珠更多>>
- 相关机构:重庆医科大学重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 丙型肝炎病毒E1蛋白活化MAPK/ERK信号通路促进肝癌细胞增殖被引量:1
- 2012年
- 目的研究丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)编码蛋白E1的生物学功能。方法分别构建编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的腺病毒载体Ad—E1、Ad—E2、Ad—NS3、Ad—NS5a、Ad—NS5b;将重组并包装的腺病毒分别感染SMMC-7721细胞,测定感染滴度,通过RT—PCR方法在转录水平鉴定HCVE1、E2、NS3、NS5a、NSSb的表达,用Western印迹在蛋白水平鉴定E1蛋白的表达。腺病毒感染SMMC-7721细胞后,通过细胞增殖实验筛选生物学功能最明显的蛋白。将筛选到的Ad—E1感染SMMC-7721细胞,用MTS、结晶紫、细胞周期实验观察体外过表达E1蛋白对感染细胞增殖的影响;Western印迹检测p-ERK、ERK的表达;RT—PCR检测c—Myc、cyclinD1、c—Jun、c.Fos基因的表达。结果成功扩增了能够编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的高滴度腺病毒Ad—E1、Ad—E2、Ad—NS3、Ad—NS5a、Ad—NS5b,并且通过RT—PCR方法在转录水平鉴定了目的基因的表达,Western印迹方法在蛋白水平鉴定了E1蚩白的表达。通过细胞计数、MTS、结晶紫实验证实Ad—E1感染组细胞较对照组增殖速度加快,细胞周期显示Ad-E1感染组细胞34.38%处于S期,明显高于Ad—GFP(27.32%)(P〈0.05)对照组;Ad-E1感染绢p-ERK蛋白表达量增高,同时与细胞增殖相关的MAPK/ERK下游基因转录水平上凋。结论体外过表达HCVE1蛋白可以明显促进SMMC-7721细胞的增殖,其促增殖作用可能与MAPK/ERK信号通路的活化相关。
- 陈庆美刘娇单晓亮周帆权会琴陈林林唐霓
- 关键词:丙型肝炎病毒丝裂原活化蛋白激酶细胞增殖
- 新型抑癌基因Arid2对CD44的表达调控及其对肝癌细胞迁移和侵袭的影响被引量:4
- 2016年
- 目的 观察新型抑癌基因Arid2对人肝癌细胞HepG2和Huh7细胞中CD44的表达调控,初步探讨Arid2调控肝癌细胞侵袭和迁移的机制. 方法 构建pGL3-CD44报告质粒并转染至人肝癌细胞HepG2及Huh7细胞中,感染腺病毒Ad-Arid2后,双荧光素酶实验检测报告质粒相对荧光素酶活性的变化;Western blot检测过表达Arid2对跨膜糖蛋白CD44表达的影响.细胞迁移与侵袭实验检测过表达Arid2对细胞迁移和侵袭能力的影响,并在裸鼠荷瘤实验中观察体内移植瘤的生长情况.两组数据之间的比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析.结果 荧光素酶活性实验发现,转染不同长度CD44报告质粒后其相对荧光素酶活性均有不同程度的提高,而变化明显的pGL3-CD44-791 ~ +225 bp报告质粒相对荧光素酶在给予过表达Arid2处理后明显下调,抑制率分别为73.83%±0.92%(P<0.05,HepG2)和48.99%±1.37%(P<0.05,Huh7).外源性过表达Arid2能够明显抑制CD44蛋白表达.Transwell实验证实过表达Arid2可以明显抑制人肝癌细胞的迁移能力,在HepG2、Huh7细胞中其抑制率分别为66.95%±0.59%(P<0.05)、73.86%±0.49%(P< 0.05).动物实验结果表明,Arid2明显延缓或抑制荷瘤小鼠皮下移植瘤的生长,其抑制率为98.57%±0.34%(P<0.05).结论 外源过表达Arid2明显下调CD44启动子活性和CD44蛋白表达,并在肝癌细胞和荷瘤裸鼠模型中也明显抑制肿瘤细胞的生长和迁移,提示CD44在Arid2调控肝癌细胞的侵袭和迁移过程中可能发挥了重要作用.该研究为阐明Arid2与CD44分子的关系以及其在肝癌发生、发展中的作用提供了新的研究方向.
- 田玲段玉洁聂丽珠李治陈震高庆祝杨翼唐霓郑建
- 关键词:细胞迁移转录活性