星火计划(20123BBF61121)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 发文基金：星火计划江西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 池蝶蚌金属硫蛋白基因的原核表达及活性分析被引量：1
- 2014年
- 筛选池蝶蚌性腺转录组并运用RT-PCR方法扩增池蝶蚌金属硫蛋白(metallothionein,MT)ORF框序列。该序列有216个碱基组成,编码71个氨基酸,其中半胱氨酸含量丰富,富含金属硫蛋白典型的Cys-X(1-3)-Cys结构。多序列比对表明,池蝶蚌MT蛋白序列和其他物种MT序列有很高的同源性,与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)MT蛋白具有100%的同源性。将该ORF框片段导入原核表达载体pET-32a上,在IPTG诱导下成功在E.coli BL21(DE3)中融合表达。SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小约为27kDa,在25℃,终浓度为1mM IPTG诱导4h表达量最高,重组蛋白主要存在上清液中,纯化并获得了重组蛋白。细胞增殖实验表明,纯化的MT融合蛋白有生物活性并能有效地减轻宫颈癌Hela细胞的氧化胁迫效应。
- 王诚远胡芳琴刘国凤王军花彭扣盛军庆洪一江
- 关键词：池蝶蚌金属硫蛋白原核表达活性分析
