广州市医药卫生科技项目(2008-ZDi-04)
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
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- 相关机构：广州市第十二人民医院暨南大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：广州市医药卫生科技项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 携带HGF基因的重组腺病毒表达载体的构建被引量：1
- 2010年
- 目的构建携带肝细胞生长因子HGF的重组腺病毒表达载体。为研究HGF的功能、作用机制及临床应用奠定基础。方法以pcDNA3.0-HGF为模板,经PCR扩增得到HGF基因,将其插入到带有绿色荧光蛋白基因的穿梭载体pAdTrack-CMV-GFP中,得到重组质粒pAdTrack-CMV-HGF-GFP。将线性化的pAdTrack-CMV-HGF-GFP与pAdEasy-1质粒共转化BJ5183感受态细胞,进行同源重组,得到重组腺病毒质粒,经PacI线性化后,转染AD293细胞。结果得到重组腺病毒,转染重组腺病毒DNA的AD293细胞经荧光显微镜能观察到AD293细胞内有绿色荧光,且出现细胞病变反应(cytopathic effects,CPE),对传代的Ad-HGF进行PCR分析证实得到目的基因,感染CHL细胞,通过western blotting分析HGF蛋白表达量,从而证实重组腺病毒载体构建成功。结论腺病毒制备简便,成本低,周期短,毒性小,产量高,感染率及蛋白表达率高,成功构建Ad-HGF为进一步研究HGF并最终使其在临床应用中更为方便提供实验基础。
- 刘薇薇陈娟刘移民李素梅余卫陈嘉榆张成陈运贤林琛莅钟雪
- 关键词：重组腺病毒肝细胞生长因子基因治疗
- 骨髓间充质样干细胞和骨髓单个核细胞影响博莱霉素诱导肺纤维化的比较被引量：3
- 2010年
- 背景:有报道指出,骨髓间充质样干细胞和骨髓单个核细胞在多种疾病中被证明有疗效,骨髓间充质样干细胞在肺纤维化模型中也有应用。目的:比较骨髓间充质样干细胞和骨髓单个核细胞对博莱霉素A5所致大鼠肺泡炎和早期纤维化的治疗作用。方法:收集Wistar雄性幼鼠的骨髓间充质样干细胞、骨髓单个核细胞并分别进行DAPI标记。21只Wistar雌性大鼠气管内注入博莱霉素A5制作肺损伤模型,随机均分为骨髓间充质样干细胞治疗组、骨髓单个核细胞治疗组和模型组。造模后第7天处死大鼠,取肺组织病理切片观察炎症和纤维化情况;荧光显微镜下检测DAPI标记细胞;ELISA法检测肺组织匀浆羟脯氨酸和肿瘤坏死因子的含量。结果与结论:①在骨髓间充质样干细胞治疗组、骨髓单个核细胞治疗组肺组织冰冻切片中均见到DAPI标记的外源细胞。②模型组肺泡炎最严重,骨髓间充质样干细胞治疗组肺泡炎最轻,各组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。③模型组肺组织匀浆中羟脯氨酸和肿瘤坏死因子α含量最多,骨髓间充质样干细胞治疗最少,各组比较差异有显著性意义(P<0.05)。提示骨髓间充质样干细胞和骨髓单个核细胞均可定植于损伤肺组织,并能有效阻止博莱霉素A5诱导的大鼠肺泡炎和早期纤维化,前者作用更为显著。
- 陈娟刘薇薇刘移民李素梅余卫陈嘉榆张成林琛莅唐丽娟方茅钟雪云
- 关键词：骨髓单个核细胞细胞移植肺纤维化肿瘤坏死因子Α
- 自体骨髓间充质干细胞治疗矽肺的观察被引量：7
- 2011年
- 目的 探讨自体骨髓问充质干细胞（BMSCs）移植治疗矽肺的安全性和治疗作用。方法选取我院确诊的10例矽肺患者，经医学伦理委员会批准，患者签署知情同意书后，无菌抽取患者骨髓液100ml，体外分离、纯化培养BMSCs，收获第3代BMSCs5×10^7个，细胞质量检测合格后，坩生理盐水50ml稀释，静脉滴注回输，每周1次，连续3次，其中3例患者采用肝细胞生长闪子（HGF）基因修饰的自体BMSCs输注。移植后6个月、9个月，观察患者的临床症状、胸部cT、x线胸片、肺功能、T细胞亚群、血清中IgG、铜蓝蛋白（CP）等指标。结果治疗9个月后，所有患者咳嗽、咳痰、胸闷症状基本消失；肺功能：最大肺活量（FVC）从治疗前平均（71．2％±17．O％）提高到（84．0％±10．9％），第1秒最大呼气最（FEV。）从治疗前平均（67．5％±17．7％）提高到（80．6％±14．9％），与治疗前比较，差异有统计学意义（P〈0．（）1）；血清中cP和lgG较治疗前明显下降，差异有统计‘学意义（P〈O．01）；采用HGF基『太J修饰的自体BMSCs治疗的患者胸片和肺部cT提示有不同程度好转，肺纹理较治疗前减少、清晰，双肺结节影较治疗前缩小，边缘较治疗前清晰，结节影密集及分布均较治疗前有所减少。结论自体BMSCs移植治疗矽肺对临床症状改善有一定效果，HGF基因修饰的自体BMSCs可使小结节影缩小，略有变淡，肺纹理较治疗前减少。
- 陈玲珍刘薇薇陈嘉榆余卫叶更新詹昱巫进明郭子宽
- 关键词：肝细胞生长因子矽肺
- 肝细胞生长因子联合自体骨髓间充质干细胞移植治疗矽肺一例被引量：8
- 2011年
- 目的探讨采用肝细胞生长因子（HGF）联合骨髓间充质干细胞（BMSC）白体移植治疗矽肺患者的潜在作用。方法选取我院确诊的1名Ⅱ＋矽肺患者，经医学伦理委员会批准，患者自愿同意抽取自体骨髓100ml，体外分离，纯化培养BMSC。取第3代细胞，加入脂质体（lip02000）及p-HGF共培养2d。收获P—HGF—BMSC细胞5×10^7个细胞后，用生理盐水50ml静脉滴注回输给患者，每周1次，连续3次。移植治疗后第1个月复查，以后每3个月复查1次，直至观察12个月。观察指标：（1）高仟伏X线胸片、胸部CT；（2）肺功能；（3）血清铜蓝蛋白。结果治疗后追踪12个月后，患者咳嗽、胸闷症状基本消失，病情稳定。肺功能检查：用力肺活量（FVC）从治疗前64．6％提高到治疗后的81．0％，第1秒用力呼气容积（FEV1.0）从治疗前68．7％提高到治疗后的90．1％，1秒率（FEV10／FVC％）从治疗前111．6％降到治疗后的107．1％，最大呼气中期流量（FEF29%-75%）从治疗前100．3％降到治疗后的94．6％，用力呼出75％肺活量位气体的瞬间流量（MEF75%）从治疗前99．2％升高到治疗后的113．5％，用力呼出50％肺活量位气体的瞬间流量（MEF。）从治疗前125．3％升高到治疗后的130．2％，用力呼出25％肺活量位气体的瞬间流量（MEF25%）从治疗前86．9％降到治疗后的71．7％；血清铜蓝蛋白含量从治疗前690mg／L降到治疗后180．6mg／L；胸部CT在第1次复查显示“双肺野细小结节小阴影密集及分布均较治疗前有所减少”。高仟伏X线胸片在第2次复查显示“双肺从肺尖到肺底均见弥漫分布小结节阴影，边缘尚清较前有所吸收、好转”。患者无明显不适的表现。结论HGF联合BMSC移植方法可能对改善矽肺患者肺结节和纤维化有一定潜在作用。
- 刘薇薇陈嘉榆余卫叶更新张程杨志前刘移民钟雪云郭子宽
- 关键词：矽肺肝细胞生长因子干细胞干细胞移植
- 石英尘和博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的比较研究被引量：1
- 2011年
- 目的 比较石英尘和博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型中的肺泡炎和早期纤维化改变,并对其机制进行探讨.方法 将大鼠随机分为SiO2组（14只,气管内注入40mg/ml SiO2混悬液1 ml）、BLM组（14只,气管内注入5 mg/kg BLM A5）和对照组（14只,气管内注入1 ml无菌生理盐水）.在造模后7、14 d每组各处死7只动物,取肺组织病理切片行HE染色,对肺泡炎进行计分,行饱和苦味酸天狼猩红染色,采用图像分析系统测得各组胶原面积后,进行定量分析,免疫组织化学技术检测肺组织中CD68和TNF-α蛋白表达情况,采用图像分析计算累积吸光度值,进行半定量分析.结果 （1）HE染色光学显微镜下可见,BLM组7d时肺泡炎（肺泡炎评分2.814±0.832）最明显,偏振光下显示BLM组14d时肺纤维化[胶原面积（1284.57±554.72）μm2）]最严重,均明显高于对照组和同期SiO2组,差异有统计学意义（P＜0,05）.（2）免疫组化结果显示,BLM组7 d时TNF-α表达最高（17.100±1.831）,明显高于对照组（0.420±0.020）、SiO2组7 d（7.909±1.275）及BLM组14d（13.506±1.454）,差异均有统计学意义（P＜0.05）;在SiO2组14 d时TNF-α表达为22.778±2.512,明显高于BLM组（14 d）、对照组及SiO2组（7 d）,差异有统计学意义（P＜0.05）.14 d时,SiO2组CD68表达明显高于对照组、BLM组（14 d）及SiO2组（7d）,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 BLM诱导的大鼠肺损伤模型的早期肺泡炎重于SiO2诱导的大鼠肺损伤模型,纤维化进程早于SiO2诱导的大鼠肺损伤模型,TNF-α在两种模型的病程中均起着重要的作用,而巨噬细胞更为持续地参与了SiO2诱导的肺纤维化.
- 刘薇薇陈娟刘移民李素梅余卫陈嘉榆张程唐丽娟林琛莅钟雪云
- 关键词：石英肺纤维化
- 阻遏矽肺纤维化的实验研究被引量：8
- 2011年
- 目的比较骨髓间充质样干细胞（BM＋MSCs）与pcDNA3．1肝细胞生长因子（HGF）转染的BM—MSCs对SiO，所致大鼠肺泡炎和早期肺纤维化的影响并探讨其机制。方法收集培养雄性Wistar幼鼠的原代BM-MSCs，并进行4，6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）标记。将50只雄性Wistar大鼠气管滴注40mg／mlSiO2，混悬液1ml造模后，随机分为模型组、BM—MSCs组和pcDNA3．1-HGF＋BM—MSCs组。造模次日，模型组（10只）：尾静脉注入PBS1ml；BM—MSCs组（20只）：尾静脉注入10^6／mlBM-MSCs1ml；pcD-NA3．1-HGF＋BM-MSCs组（20只）：尾静脉注入10^6个／mlpcDNA3．1-HGF转染的BM-MSCslm1。14和28d后，分别处死大鼠，取肺组织冰冻切片，荧光显微镜下检测体内DAPI标记细胞；HE和Masson染色观察肺炮炎和纤维化情况；免疫印迹（Westernblot）法测各组大鼠肺组织的I-IGF表达量；ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子（TNF）．or．的含量，样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸（HYP）的含量。结果14、28d时，pcDNA3．1-HGF＋BM-MSCs组肺组织肺泡炎评分（14d：1．16±0.3，28d：0.8＋0．20）均低于同时期BM-SCs组（14d：1．68＋0．17，28d：1．58±031）和模型组（14d：2．36＋_0．17，28d：2．80_＋0．14），BM—MSCs组肺泡炎评分均低于同时期模型组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。14、28d时pcDNA3．1-HGF＋BM～MSCs组肺纤维化评分（14d：0．10＋_0．11，28d：1．16＋_0．13）均明显低于同时期BM—MSCs（14d：0．54＋0．15，28d：1．36±0．13）和模型组（14d：0．64＋0．09，28d：1．84＋0．17），差异均有统计学意义（P〈O．05）。14、28d时pcDNA3．1一HGF＋BM—MSCs组肺组织匀浆中TNF—d含量[14d：（280．48＋23．11）pg／mg，28d：（249．78_＋22．33）pg／mg]均明显低于BM—MSCs组[14d：（342．58_＋35．34）pg／mg，28d：（319．5l±17．84）pg／mg]~模型组『14d：（442．29±36．76）pg／mg，28d�
- 翁泽平 钟雪云张继君刘薇薇陈娟刘移民余卫唐丽娟陈嘉榆方茅张程叶更新 陈玲珍
- 关键词：肝细胞生长因子肺纤维化羟脯氨酸
