国家自然科学基金(30428017)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 相关作者：戴建武李美香张经余王爱娥更多>>
- 相关机构：北京肿瘤医院中国人民解放军第二炮兵总医院中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人NANOGP8蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2009年
- 为获得抗人NANOGP8基因的多克隆抗体,采用PCR法扩增了NANOGP8基因,经序列测定正确后,连接到pET-28a质粒上,将获得的重组质粒pET-28a-NANOGP8转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在16℃和37℃下分别进行诱导表达,经SDS-PAGE检测发现融合蛋白以包涵体形式存在于37℃诱导表达的沉淀中,大小约为45kDa。对包涵体进行洗涤、溶解处理,经ChelatingSepharoseFastFlow亲和层析柱进行纯化。对纯化得到的蛋白进行SDS-PAGE及Westernblot免疫印记杂交检测,得到了单一条带。用获得的高纯度融合蛋白免疫新西兰兔,得到兔来源的抗人NANOGP8血清。对抗血清进行蛋白免疫印记杂交反应和酶联免疫吸附反应检测,结果显示成功制备了高滴度和特异性的兔抗人NANOGP8多克隆抗体,与市售抗人Nanog多克隆抗体相比,杂交更迅速,效果更明显。为进一步研究NANOGP8基因在肿瘤发生、发展中的作用奠定了基础。
- 张经余王爱娥李美香戴建武
- 关键词：多克隆抗体
